保腎膠囊的質(zhì)量控制

張雷韓麗琴林艷

保腎膠囊的質(zhì)量控制

張雷1韓麗琴2林艷1

目的建立保腎膠囊含量測定方法。方法以大黃和元明粉為原料混合制成保腎膠囊，大黃素為對照品，采用高效液相色譜法測定含量，選用HypersilODS色譜柱（150mm×4.6mm，4.5μm），流動相為甲醇-0.1%磷酸溶液，檢測波長254nm。結(jié)果測定結(jié)果顯示在2.4～28.8μg·mL-1濃度范圍內(nèi)吸光度與濃度呈線性關(guān)系，r=0.9999。加樣回收率在98.7～102.8%之間，平均回收率為100.8%，標準偏差為1.25%。結(jié)論測定結(jié)果為臨床合理用藥提供科學依據(jù)。

保腎膠囊；高效液相色譜法；質(zhì)量控制

慢性腎衰，是由多種慢性疾病引起腎臟損害和進行性惡化的結(jié)果，使機體在排泄代謝廢物和調(diào)節(jié)水、電解質(zhì)、酸堿平衡等方面出現(xiàn)紊亂的臨床綜合癥群，是威脅生命的重要病癥之一。我院以大黃和元明粉為原料自主研制的保腎膠囊經(jīng)大量的臨床和實驗證實，對延緩慢性腎衰有確切療效，對大黃及其制劑的質(zhì)量控制，一般采用高效液相色譜法和薄層掃描法[1,2]測定其中蒽醌類有效成分的含量，本實驗利用高效液相色譜法測定保腎膠囊中大黃素的含量。

1 儀器與試藥

LC-R20AT型高效液相色譜儀（日本島津），LC-SOLUTION工作站，二極管陣列檢測器。FN1104型分析天平，HypersilODS色譜柱（150mm×4.6mm，4.5μm）；超聲波振蕩器。

大黃素對照品（中國藥品生物制品檢定所，110756-200110）和大黃對照藥材（中國藥品生物制品檢定所，批號：0986-200002）；甲醇為色譜純，實驗用水為超純水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 TLC鑒別

取大黃對照藥材0.3g，加甲醇20mL，超聲30min，濾過，濾液蒸干；加水10ml使溶解,再加鹽酸1ml,置水溶中加熱30min,立即冷卻,用乙醚分2次提取,每次10ml,合并乙醚液,蒸干,殘渣加氯仿1ml使溶解,作為對照藥材溶液；取成品藥去膠囊，研細稱取3.0g，同法制成供試品溶液。同法稱取除大黃以外的藥材制成陰性對照溶液；另取大黃素對照品加甲醇制成分每1mg·mL-1的對照品溶液,作為對照品溶液。照薄層色譜法試驗[3]，吸取上述4種溶液各10μL，分別點于同一塊硅膠H板上，以石油醚（30～60℃）-甲酸乙酯-甲酸（15∶5∶1）為展開劑，展開取出，晾干，置紫外燈下檢視，結(jié)果，供試品色譜中，在與對照藥材和對照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的斑點。大黃的TLC見圖1。

圖1 大黃的TLC(1～3.樣品；4大黃對照藥材；5陰性對照)

2.2 含量測定

2.2.1 色譜條件

色譜柱HypersilODS（150mm×4.6mm，4.5μm），流動相為甲醇—0.1%磷酸溶液，檢測波長254nm。流速1.0mL·min-1；柱溫：25℃；進樣量10μL。將對照品和陰性液作色譜分析，陰性液在對照品保留時間處無干擾，專屬性良好。

2.2.2 溶液的制備（1）對照品溶液的制備：

精密稱取105℃干燥至恒重的大黃素對照品0.0120g，置100mL容量瓶中，用乙醚定容，搖勻，即得0.12mg·mL-1的大黃素對照溶液。 供試品溶液的制備：取藥品去膠囊研細，稱量2.0g，加甲醇20ml,超聲過濾蒸干，置100mL容量瓶中，用乙醚定容。 陰性對照溶液的制備：稱取元明粉適量，置100mL容量瓶中，用乙醚定容。

2.3 線性關(guān)系考察

精密量取對照品溶液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、6.0mL于10ml容量瓶中，加乙醚至刻度，搖勻，即得對照品溶液。按色譜條件分別進樣10μL，記錄峰面積，以濃度對峰面積進行線性回歸，得回歸方程A=55329C+9264.7（r＝0.99990，n＝5），結(jié)果表明，大黃素進樣濃度在2.4～28.8μg·mL-1范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好的線性關(guān)系。

2.4 專屬性試驗

分別精密吸取陰性對照溶液、對照品溶液和供試品溶液各10μL，按上述色譜條件進樣。結(jié)果表明，陰性對照溶液在大黃素出峰位置處無干擾。色譜見圖2。

圖2 高效液相圖譜(a供試品,b陰性對照,c大黃素對照品)

2.5 精密度試驗

精密吸取同一對照品溶液10μL，重復進樣6次測定，記錄峰面積。結(jié)果，RSD＝0.65%，表明儀器精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗

取本品，按“2.2.2”項下供試品溶液制備方法制備，分別于制備后0、2、4、8、12、24h依法測定大黃素含量。結(jié)果，RSD＝0.70%，表明供試品溶液在24h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.7 重復性試驗

取本品，按“2.2.2”項下供試品溶液制備方法制備，平行試驗6份。結(jié)果，大黃素平均含量為每粒0.65mg，RSD＝1.38%，表明方法重復性良好。

2.8 加樣回收率試驗

精密稱取樣品適量，加入大黃素對照品，按2.2.2項操作，計算回收率，結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率測定結(jié)果(n=9)

2.9 樣品測定

精密稱取樣品適量，乙醚分2次提取，每次20mL，合并乙醚液，蒸干，殘渣加氯仿1mL使溶解，按2.2.2項操作，測定樣品中大黃素的含量。測定結(jié)果見表2。

表2 保腎膠囊中大黃素含量

3 討論

大黃性味苦寒，具瀉熱通腸、涼血解毒、逐淤通經(jīng)之功效。臨床應(yīng)用于實熱便秘、腸癰腹痛等癥，現(xiàn)代臨床研究表明大黃通過改善氮質(zhì)代謝，抑制腎臟代償性肥大和高代謝狀態(tài)來延緩慢性腎功能衰竭的發(fā)展。也可以通過清除自由基作用減少過多的氧自由基使膜脂質(zhì)過氧化引起的腎小球系膜細胞增殖。元明粉具軟堅瀉下，清熱消腫之功效，阻止腸內(nèi)水分的吸收。大黃與元明粉配伍，具有瀉下解毒、蕩滌腸胃、推陳致新及活血化瘀之功效，且能“除邪氣而不傷正氣，”使腸內(nèi)容積增大，引起機械刺激，促進腸蠕動，不僅能使糞氮排出量增加，而且還能阻止氨基氮從腸道吸收，對延緩慢性腎衰具有較好療效。采用高效液相色譜法測定其有效成分含量，操作簡單，線性關(guān)系好，方法可行。

[1]郭丹,陳娜娜,晏媛.高效液相色譜法測定常通口服液中大黃素的含量[J].中國藥房,2003,14(5):296.

[2]袁文娟,孟芹,蔣序.排毒養(yǎng)顏膠囊中大黃素的含量測定[J].時珍國醫(yī)國藥,2002,13(6):340.

[3]國家藥典委員會.中國藥典 [S].2010年版.北京:化學工業(yè)出版社,2010:附錄VB.

1吉林醫(yī)藥學院附屬醫(yī)院，吉林吉林 132013

2吉林醫(yī)藥學院，吉林吉林 132013