高效液相色譜法測定急肝退黃膠囊中鹽酸小檗堿含量

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(1.吉林省食品藥品檢驗所，吉林 長春 130033；2.長春中醫藥大學，吉林 長春 130117)

急肝退黃膠囊為茵陳、黃柏、板藍根、白茅根、蒼術、郁金、秦艽、蒲公英、車前草、黃芩、麥芽、大黃、梔子諸藥組成的復方制劑，用于急性黃疸型肝炎。該制劑收載于衛生部藥品標準中成藥制劑第2冊,無含量測定方法[1-2]。本文采用高效液相色譜法測定該制劑中黃柏的鹽酸小檗堿含量，結果表明，本法簡便、迅速、結果準確。

1 儀器與試藥

2010AHT高效液相色譜儀(日本島津),Class-vp工作站，SPD-M10AVP型紫外可見檢測器(日本島津)；KQ-50B超聲波清洗器(昆山超聲儀器有限公司)。

鹽酸小檗堿對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號110713-200208供含量測定用)；急肝退黃膠囊(貴州省安康)；乙腈為色譜醇，水為超純水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 色譜柱：Diamonsil C18 (250 mm×4.6 mm，5 μm)[5];流動相：乙腈-[水-冰醋酸-三乙胺(64∶1∶1)](25∶75)；流速：1.0 mL/min;檢測波長：264 nm;柱溫：30 ℃；進樣量：10～20 μL。理論塔板數按鹽酸小檗堿峰記不低于4 000。鹽酸小檗堿與相鄰的雜質峰的分離度為1.54。

2.2 對照品溶液的制備 精密稱取在100 ℃干燥5 h的鹽酸小檗堿對照品適量,加甲醇制成每1 mL中含鹽酸小檗堿0.1 mg的溶液，即得。

2.3 供試品溶液的制備 取本品裝量差異項下的內容物約3 g,精密稱定，置錐形瓶中，精密加入鹽酸-甲醇(1∶100)混合溶液50 mL，稱定重量，超聲處理(功率250 W，頻率40 kHz)40 min,放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，蒸干，即得。

2.4 陰性對照溶液的制備 按急肝退黃膠囊處方比例稱取缺黃柏的陰性樣品適量，按供試品溶液的制備方法提取陰性對照溶液。

2.5 干擾試驗 取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液按上述色譜條件依法測定，結果樣品色譜圖中與對照品溶液有相同保留時間(tR=19.2 min)的色譜峰，而陰性對照溶液在此保留時間無此峰，說明急肝退黃膠囊的其他成分對鹽酸小檗堿的測定無干擾。

2.6 線性關系考察 精密吸取對照品儲備液(每1 mL含0.0 966 mg)4、6、8、12、16、20 μL注入色譜儀，以上述色譜條件測定峰面積值，以峰面積為縱坐標，鹽酸小檗堿的濃度為橫坐標，繪制標準曲線，計算回歸方程為：Y=-168 112.656 1+362 288 5.366X，r=0.999 7，結果表明線性關系良好。線性范圍為0.386 4～1.932 0 μg。

2.7 穩定性試驗 取同一供試品溶液，分別在0、2、4、8、12、24 h進樣，每次20 μL，按上述色譜條件測定峰面積。得峰面積平均值27 892 03(n=7)，RSD為2.75%，表明供試品在24 h內穩定。

2.8 精密度試驗 取同一供試品溶液，重復進樣6次，按上述色譜條件測定峰面積，測得平均峰面積為29 441 87(n=6)，RSD為1.87%。

2.9 重復性試驗 取同一批號供試品6分，按照供試品溶液制備項下方法處理，依上述色譜條件依法進行測定，并計算含量，結果鹽酸小檗堿平均含量為0.203 mg/粒。

2.10 回收率試驗 采用加樣回收試驗，精密稱取已知含量的樣品6分(各約1.5 g)，精密加入鹽酸小檗堿對照品溶液(0.096 6 mg/mL)10 mL，按照供試品溶液制備項下方法處理,依上述色譜條件依法進行測定鹽酸小檗堿的含量，并計算回收率，結果平均為98.20%，RSD為1.41%。

2.11 樣品測定 取5個批號的樣品，按照供試品溶液制備項下方法處理，依上述色譜條件進行測定，每批測定2次，結果見表1。

表1 5批樣品含量結果 mg/粒

3 結論

3.1 檢測波長的選擇 取鹽酸小檗堿對照品的甲醇溶液，在190～370 nm范圍內掃描，其定測定波長為264 nm。

3.2 流動相的選擇 經多種流動相選擇，認為乙腈-[水-冰醋酸-三乙胺(64∶1∶1)](25∶75)為最佳。

3.3 提取方法的選擇 采用鹽酸-甲醇(1∶100)為溶劑超聲處理30 min的提取方法良好，且操作簡便[3-4]。

[1]唐德智.HPLC法測定急肝退黃膠囊中綠原酸含量[J].中國藥師,2009(10):60.

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[3]丁海昕,王效民,梁玉景.HPLC法測定抗饑消渴片中鹽酸小檗堿的含量[J].安徽醫藥，2008(3):42.

[4]袁常青,邢亮,李長富,等.用高效液相法測定腎特康膠囊中鹽酸小檗堿的含量[J].中國職業藥師，2011(9):51.