不同濃度CPPU對歐亞旋覆花愈傷組織誘導的影響

周紅菊

摘要：以歐亞旋覆花（Inula britannica L.）無菌苗為材料，研究了不同濃度調(diào)吡脲（ＣＰＰＵ）對其葉片、根愈傷組織誘導的影響。結果顯示，ＣＰＰＵ的濃度為０．１０ ｍｇ／Ｌ時，葉片的愈傷組織誘導率為８２．９％，且誘導出的愈傷組織生長好。ＣＰＰＵ的濃度為０．５０ ｍｇ／Ｌ時，根的愈傷組織誘導率最高，達１００．０％，愈傷組織生長最好，呈淺黃綠色，部分帶有紅色斑點，質(zhì)地疏松，具光澤。

關鍵詞：調(diào)吡脲（CPPU）；歐亞旋覆花（Inula britannica L.）；愈傷組織誘導

中圖分類號：Ｑ９４９．７８３．５；Ｑ８１３．１＋２ 文獻標識碼：Ａ文章編號：0439－８114（２０12）06－1268-02

Influence of CPPU Concentration on Callus Induction of Inula britannica

ＺＨＯＵ Ｈｏｎｇ－ｊü

（Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ， Ｈｅｎｇｓｈｕｉ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｈｅｎｇｓｈｕｉ ０５３０００，Hebei，Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｕｓｉｎｇ ｔｈｅ ｌｅａｖｅｓ ａｎｄ ｒｏｏｔ ｏｆ Ｉｎｕｌａ ｂｒｉｔａｎｎｉｃａ Ｌ． ａｓｅｐｔｉｃ ｓｅｅｄｌｉｎｇ ａｓ ｅｘｐｌａｎｔｓ， ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ＣＰＰＵ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｎ ｔｈｅ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｃａｌｌｕｓ ｗａｓ ｓｔｕｄｉｅｄ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｃａｌｌｕｓ ｉｎｄｕｃｉｎｇ ｒａｔｅ ｏｆ ｌｅａｆ ｗａｓ ａｓ ｈｉｇｈ ａｓ ８２．９％ ｗｈｅｎ ｔｈｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ＣＰＰＵ ｉｎ ｍｅｄｉｕｍ ｗａｓ ０．１０ ｍｇ／Ｌ； ａｎｄ ｔｈｅ ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ ｃａｌｌｕｓ ｗａｓ ｗｅｌｌ． Ｔｈｅ ｃａｌｌｕｓ ｉｎｄｕｃｉｎｇ ｒａｔｅ ｏｆ ｒｏｏｔ ｃｏｕｌｄ ｂｅ ｕｐ ｔｏ １００％ ｗｈｅｎ ｔｈｅ ｍｅｄｉｕｍ ｗａｓ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ０．５０ ｍｇ／Ｌ ＣＰＰＵ； ｔｈｅ ｃａｌｌｕｓ ｗａｓ ｌｉｇｈｔ Ｋｅｌｌｙ， ｌｏｏｓｅ ａｎｄ ｇｌｏｓｓｙ．

Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： ＣＰＰＵ； Ｉｎｕｌａ ｂｒｉｔａｎｎｉｃａ Ｌ．； ｃａｌｌｕｓ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ

歐亞旋覆花（Inula britannica L.）是菊科多年生草本植物，是一種中草藥，含多種生物活性成分。其含有的乙酰大花旋覆花內(nèi)酯具有和紫杉醇相似或更強的抗癌活性，可作為一種有效的天然化學防癌劑和治療藥物［１］，但其活性成分在原植物中的含量極低且不穩(wěn)定，產(chǎn)自山西的歐亞旋覆花中乙酰大花旋覆花內(nèi)酯的含量為０．５８％，而產(chǎn)于河北的則為０．３４％［２］。持續(xù)地從野生歐亞旋覆花中提取有效活性成分勢必會破壞生物多樣性和生態(tài)系統(tǒng)的平衡。采用植物組織培養(yǎng)的方法使得該類活性成分的獲取在人為可控及可持續(xù)生產(chǎn)的條件下進行，具有廣闊的應用前景。

調(diào)吡脲（ＣＰＰＵ）是一種人工合成的吡啶取代脲類的細胞分裂素，具有誘導愈傷組織生長，促進芽的發(fā)育、種子的萌發(fā)，保綠和延緩衰老等顯著的生理活性［３］。ＣＰＰＵ誘導細胞分裂和促進器官發(fā)生的活性遠遠高于一般嘌呤類細胞分裂素的活性［４］。低濃度的ＣＰＰＵ能促進草莓愈傷組織分化［５］、香蕉不定芽增殖［６］等。

以歐亞旋覆花無菌苗為材料，研究不同濃度CPPU對其葉片、根愈傷組織誘導的影響，為其愈傷組織的培養(yǎng)提供理論依據(jù)。

１材料與方法

１．１材料

歐亞旋覆花無菌苗由河北醫(yī)科大學組織培養(yǎng)室培養(yǎng)所得。

１．２方法

切取歐亞旋覆花無菌苗的根和葉片作為外植體，接種到附加不同濃度ＣＰＰＵ（０、０．０５、 ０．１０、０．５０、１．００ ｍｇ／Ｌ）、６－ＢＡ ０．５ ｍｇ／Ｌ、ＮＡＡ １．０ ｍｇ／Ｌ的ＭＳ培養(yǎng)基上，黑暗培養(yǎng)，誘導溫度為（２３±１）℃，４０ ｄ后統(tǒng)計愈傷組織誘導率和觀察愈傷組織生長狀況，每個處理接種３５個外植體， ３次重復。研究不同濃度ＣＰＰＵ對歐亞旋覆花愈傷組織的誘導情況。

２結果與分析

２．１不同濃度ＣＰＰＵ對葉片愈傷組織誘導的影響

表１表明，ＣＰＰＵ對歐亞旋覆花葉片愈傷組織誘導率及愈傷組織誘導出后生長有一定的作用，從愈傷組織誘導率來看，在不同濃度的ＣＰＰＵ中，以０．１０ ｍｇ／Ｌ的愈傷組織誘導率最高，為８２．９％，低濃度和高濃度的ＣＰＰＵ均導致愈傷組織誘導率降低， ＣＰＰＵ濃度為１．００ ｍｇ／Ｌ時已完全抑制外植體產(chǎn)生愈傷組織。從愈傷組織生長情況來看，ＣＰＰＵ濃度為０．１０ ｍｇ／Ｌ時，愈傷組織生長較好，其他濃度下，愈傷組織生長一般。從出芽狀況上看，不添加ＣＰＰＵ時，葉脈處有腋芽生成，且生長健壯，ＣＰＰＵ濃度為０．０５ ｍｇ／Ｌ時葉脈處有葉芽生成，但生長較弱，ＣＰＰＵ的濃度大于０．１０ ｍｇ／Ｌ時，葉脈處無葉芽生成。結合愈傷組織誘導率及愈傷組織誘出后生長情況來看，各濃度ＣＰＰＵ對葉片誘導愈傷組織情況的綜合排名為Ｃ２＞Ｃ０＞Ｃ１＞Ｃ３＞Ｃ４（Ｃ０代表不添加ＣＰＰＵ，Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４依次代表添加０．０５、０．１０、０．５０、１．００ ｍｇ／Ｌ ＣＰＰＵ，下同）。

２．２不同濃度ＣＰＰＵ對根愈傷組織誘導的影響

表２表明，ＣＰＰＵ對歐亞旋覆花根愈傷組織有較強的誘導作用，愈傷組織誘導率隨激素濃度的不同差異較大，在不同濃度的ＣＰＰＵ中，以０．０５和０．５０ ｍｇ／Ｌ的愈傷組織誘導率最高，為１００．０％，ＣＰＰＵ濃度為１．００ ｍｇ／Ｌ時，完全抑制了外植體產(chǎn)生愈傷組織。從愈傷組織生長情況來看， ＣＰＰＵ濃度為０．５０ ｍｇ／Ｌ時所誘導的愈傷組織生長最好，呈淺黃綠色，部分帶有紅色斑點，質(zhì)地疏松，具光澤。結合愈傷組織誘導率及愈傷組織誘導出后生長發(fā)育情況來看，各濃度ＣＰＰＵ對根誘導愈傷組織情況的綜合排名Ｃ３＞Ｃ１＞Ｃ０＞Ｃ２＞Ｃ４。

３討論

藥用植物的有效成分往往是次生代謝產(chǎn)物，大量的研究表明，一些植物的細胞培養(yǎng)物可以產(chǎn)生次生代謝產(chǎn)物。到目前為止，中國科學人員已經(jīng)建立了三七、人參、紫草、甘草、紅豆杉、丹參等十幾種藥用植物細胞的液體培養(yǎng)系統(tǒng)，經(jīng)過培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件的篩選已使部分藥用植物的有效成分含量達到或超過了原植株。

目前已報道的歐亞旋覆花的研究主要集中在其活性成分的藥理作用、提取和結構鑒定等方面，未見其植物組織培養(yǎng)和活性成分生物合成方面的報道。本試驗研究了不同濃度ＣＰＰＵ對愈傷組織誘導的影響，為歐亞旋覆花愈傷組織的培養(yǎng)提供理論依據(jù)，為其有效成分的生物合成研究奠定了基礎。

參考文獻：

［１］ ＨＯ Ｃ Ｔ，ＲＡＦＩ Ｍ，ＤＩＰＡＯＬＡ Ｒ Ｓ，ｅｔ ａｌ． Ｉｎｄｕｃｉｎｇ ｃｅｌｌ ａｐｏｐｔｏｓｉｓｓ ａｎｄ ｔｒｅａｔｉｎｇ ｃａｎｃｅｒ ｕｓｉｎｇ １－Ｏ－Ａｃｅｔｙｌｂｒｉｔａｎｎｉｌａｔｏｎｅ ｏｒ １，６－Ｏ，Ｏ－Ｄｉａｃｅｔｙｌｂｒｉｔａｎｎｉｌａｔｏｎｅ［Ｐ］． ＵＳＡ：ＵＳ６６２７６２３Ｂ２，２００３－０９－３０．

［２］ 王維娜，王云志，張嫡群．旋覆花１－Ｏ－Ａｃｅｔｙｌｂｒｉｔａｎｎｉｌａｃｔｏｎｅ ＲＰ－ＨＰＬＣ含量測定方法的研究［Ｊ］．藥物分析雜志，２００５，２５（２）：２０５－２０７．

［３］ 李穎華，寧聰梅． 新型植物生長調(diào)節(jié)劑調(diào)吡脲［Ｊ］． 農(nóng)藥，１９９４， ３３（４）：１８－１９．

［４］ 高金山，邊慶華，張永忠，等． 細胞分裂素ＣＰＰＵ的研究進展［Ｊ］． 農(nóng)藥，２００６，４５（３）：１５１－１５４．

［５］ 吳偉民，陳曉強，陳秀蘭，等． ＣＰＰＵ對草莓花藥愈傷組織誘導和分化的影響［Ｊ］． 中國南方果樹，１９９９，２８（２）：３６－３７．

［６］ 羅富英，張偉國，黃麒參． ＣＰＰＵ對香蕉不定芽增殖的影響［Ｊ］． 中國種業(yè)，２００６（２）：３２－３３．