肝纖維化血清標(biāo)志物的臨床應(yīng)用評價(jià)

李曉霞 李彬 李林(等）

[摘要] 目的 評價(jià)肝纖維化血清標(biāo)志物透明質(zhì)酸（HA）、Ⅲ型前膠原N端肽（PⅢNP）、Ⅳ型膠原（CⅣ）、層粘連蛋白（LN）對肝纖維化診斷的應(yīng)用價(jià)值。 方法 以肝穿病理學(xué)組織檢查為金標(biāo)準(zhǔn)，采用化學(xué)發(fā)光法肝纖維化血清標(biāo)志物定量檢測試劑檢測70例患者樣本，計(jì)算血清標(biāo)志物的靈敏度、特異性和準(zhǔn)確性。 結(jié)果 與金標(biāo)準(zhǔn)相比，HA、PⅢNP、CⅣ、LN的靈敏度分別為83.3%、58.3%、66.7%、50.0%，特異性分別為77.3%、81.8%、72.7%、81.8%，診斷肝纖維化的準(zhǔn)確性分別為81.4%、65.7%、68.6%、60.0%。 結(jié)論 血清HA、LN、PⅢNP、CⅣ水平與肝組織纖維化有良好的相關(guān)性，能較好地反映肝病的慢性化程度和肝纖維化活動(dòng)水平及程度，在肝纖維化診斷中具有重要的應(yīng)用價(jià)值。

[關(guān)鍵詞] 肝纖維化；化學(xué)發(fā)光；透明質(zhì)酸；Ⅲ型前膠原；Ⅳ型膠原；層粘連蛋白

[中圖分類號] R575.2[文獻(xiàn)標(biāo)識碼] B[文章編號] 1673—9701（2012）25—0075—02

Clinical evaluation of serum markers of liver fibrosis

LI Xiaoxia1 LI Bin2LI Lin1 LI Zhongxin1 FU Guangyu2 WU Xuewei1

1.Zhengzhou Autobio Diagnostics Co. Ltd. R&D， Zhengzhou 450016， China； 2.National Local Joint Engineering Laboratory of Immunoassay Automation， Zhengzhou 450016，China

[Abstract] Objective To evaluate serum markers Hyaluronic Acid（HA）， Amino—terminal Propeptide of Type III Collagen （PⅢNP）， Type Ⅳ Collagen（CⅣ） and Laminin（LN） of liver fibrosis， which is a practical application for the diagnosis of liver fibrosis. Methods Histopathological examination of liver puncture be defined as golden standard， Seventy patients which were determined by golden standard were detected， which adopting by chmiluminescence reagent of Quantitative detection to Serum markers of liver fibrosis. Then， Sensitivity， specificity and accuracy were calculated and analysed to serum markers. Results Compared with golden standard， the sensitivity of HA， PⅢNP， CⅣ and LN was 83.3%， 58.3%， 66.7 and 50.0%； the specificity was 77.3%， 81.8%， 72.7% and 81.8%； the accuracy was 81.4%， 65.7%， 68.6% and 60.0%， respectively. Conclusion The levels of HA， PⅢNP， CⅣ and LN in serum is well in correlation with liver fibrosis， which would well reflect the level of chronic patients and liver fibrosis. There is importantly actual application value on diagnosis of liver fibrosis.

[Key words] Liver Fibrosis； Chemiluminescence； Hyaluronic acid； Amino—terminal Propeptide of Type Ⅲ Collagen； Type Ⅳ Collagen； Laminin

肝纖維化是由各種致病因子所致肝內(nèi)纖維組織異常增生的病理過程，輕者纖維化，重者使肝小葉結(jié)構(gòu)改建，假小葉及結(jié)節(jié)形成，成為肝硬化。肝纖維化的病理生理過程非常復(fù)雜，主要表現(xiàn)為膠原蛋白為主的細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）大量增生和異常沉積，引起肝纖維化發(fā)生[1]。因此肝纖維化是肝硬化發(fā)生、發(fā)展進(jìn)程中的一個(gè)重要環(huán)節(jié)，如能早期發(fā)現(xiàn)并及時(shí)治療將有助于病情控制及逆轉(zhuǎn)。本文通過對70例經(jīng)肝穿病理學(xué)組織檢查的患者肝纖維化血清標(biāo)志物的檢測，評價(jià)透明質(zhì)酸（HA）、Ⅲ型前膠原N端肽（PⅢNP）、Ⅳ型膠原（CⅣ）、層粘連蛋白（LN）的臨床應(yīng)用價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2007～2009年間解放軍153中心醫(yī)院經(jīng)肝穿病理學(xué)檢查確診的患者共70例作為觀察組，其中男55例，女15例，年齡32～55歲。按照2000年全國傳染病與寄生蟲病學(xué)術(shù)會議修訂的《病毒性肝炎防治方案》診斷標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行臨床分級：慢性肝炎輕度者20例，其中男13例，女7例，年齡32～50歲；慢性肝炎中度者25例，其中男22例，女3例，年齡33～48歲；慢性肝炎重度者15例，其中男10例，女5例，年齡36～51歲；肝硬化患者10例，均為男性，年齡50～55歲。同時(shí)選取健康人群60例作為對照組，其中男43例，女17例，年齡30～58歲。

1.2 檢測方法

空腹抽取所選患者血5 mL，分離血清后—20℃保存。化學(xué)發(fā)光法HA、PⅢNP、CⅣ、LN定量檢測試劑盒及化學(xué)發(fā)光檢測儀由鄭州安圖綠科生物工程有限公司提供，按照說明書操作。

1.3 觀察指標(biāo)

將HA、PⅢNP、CⅣ、LN的檢測結(jié)果及金標(biāo)準(zhǔn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，根據(jù)公式計(jì)算靈敏度、特異性及準(zhǔn)確性：靈敏度（%）=真陽性/（真陽性+假陰性）×100%；特異性（%）=真陰性/（假陽性+真陰性）×100%；準(zhǔn)確性（%）=（真陽性+真陰性）/（真陽性+假陽性+假陰性+真陰性） ×100%

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料以（x±s）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，多組間比較采用方差分析。

2 結(jié)果

2.1 HA、PⅢNP、CⅣ、LN檢測結(jié)果

見表1。輕度組與正常對照組相比， HA、PⅢNP、CⅣ、LN含量差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=—12.2～—4.2，P < 0.05），慢肝中度、重度及肝硬化組HA、PⅢNP、CⅣ、LN含量與正常對照組相比，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t = —16～—5.7，P < 0.01），表明慢肝輕度時(shí)血清HA、PⅢNP、CⅣ和LN含量升高，且隨著肝臟損傷程度的加重呈上升趨勢，尤其是在重度時(shí)明顯升高，與肝功能損傷嚴(yán)重、強(qiáng)烈的炎癥反應(yīng)及纖維化程度一致。

表1 各組慢性肝病患者肝纖維化血清標(biāo)志物測定結(jié)果（x±s，ng/mL）

2.2 觀察組四種肝纖維化血清標(biāo)志物陽性檢出率

見表2。HA、PⅢNP、LN三項(xiàng)陽性率隨著肝病程度加重逐漸升高，中度患者CⅣ陽性率為40%，比輕度低，但重度和肝硬化的陽性率明顯升高。肝硬化組四種標(biāo)志物的陽性率均超過70%。

表2 觀察組四種肝纖維化血清標(biāo)志物陽性檢出率[n（%）]

2.3 四種血清標(biāo)志物檢測靈敏度、特異性和準(zhǔn)確性分析

表3、4為四項(xiàng)血清學(xué)指標(biāo)與金標(biāo)準(zhǔn)對比檢測肝纖維化的結(jié)果。如表5所示，HA檢測肝纖維化的靈敏度最高（83.3%），其余三項(xiàng)的靈敏度均超過70%；各指標(biāo)的特異性均較好，其中PⅢNP和LN達(dá)到81.8%；檢測肝纖維化的準(zhǔn)確性方面HA較好（81.4%），其余三項(xiàng)均較低。

3 討論

目前，肝纖維化的診斷方法主要有組織病理學(xué)、影像學(xué)和血清標(biāo)志物檢測三種。組織病理學(xué)即肝穿刺活檢是一種創(chuàng)傷性診斷方法，雖然是金標(biāo)準(zhǔn)，但患者難以承受，且不能進(jìn)行動(dòng)態(tài)觀察[2，3]；影像學(xué)診斷雖然方便、快捷，但特異性差，無法做出早期診斷[3，4]；血清標(biāo)志物檢測因其無創(chuàng)性，利于動(dòng)態(tài)監(jiān)測且準(zhǔn)確性較高而逐步受到重視并應(yīng)用于臨床。

HA主要由組織中纖維母細(xì)胞合成，通過淋巴系統(tǒng)進(jìn)入血循環(huán)，并由肝臟快速清除。肝纖維化時(shí)，肝星狀細(xì)胞合成HA能力大大升高，同時(shí)內(nèi)皮細(xì)胞清除HA能力下降，雙重原因?qū)е赂闻K中HA水平上升，HA亦成為檢測肝纖維化的最靈敏的指標(biāo)之一[5，6]。PⅢNP是Ⅲ型前膠原經(jīng)氨基端內(nèi)切肽酶的作用脫下多肽，測定慢性肝炎患者血清中的PⅢNP含量可反映Ⅲ型膠原的代謝及肝纖維化的程度[7]。LN 是肝細(xì)胞基底成分中的主要黏蛋白，肝纖維化時(shí)肝竇中 LN 的合成大量增加并過度沉積，血清 LN 升高一定程度反映肝竇毛細(xì)血管化的程度及門脈區(qū)纖維化范圍，與肝組織的病理程度顯著相關(guān)[7]。CⅣ是基底膜網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的主要組成部分，在纖維化早期增生且轉(zhuǎn)化率較快，最后與持續(xù)沉積的 LN 形成完整的基底膜，是反映膠原合成的血清學(xué)指標(biāo)，CⅣ的含量與肝組織病理纖維化程度正相關(guān)[8]。

許多研究已證實(shí)，血清肝纖維化指標(biāo)HA、PⅢNP、CⅣ、LN的含量可反映慢性肝病肝臟病理損害的程度，是判斷慢性肝炎患者肝纖維化程度的可靠指標(biāo)[9]，肝病患者肝組織的炎癥活動(dòng)度與肝纖維化程度呈正相關(guān)，其中 HA 反映炎癥程度較敏感，而PⅢNP在反映肝纖維化積蓄程度上較敏感，LN、CⅣ與肝組織匯管區(qū)和小葉內(nèi)炎癥相關(guān)，亦能很好地反映肝纖維化程度。本研究通過對70例確診肝病患者肝纖維化血清標(biāo)志物的測定，結(jié)果顯示血清HA、LN、PⅢNP、CⅣ水平與肝組織纖維化有良好的相關(guān)性，能較好地反映肝病的慢性化程度和肝纖維化活動(dòng)水平及程度，在肝纖維化診斷中具有重要的應(yīng)用價(jià)值。

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（收稿日期：2012—04—01）