核因子-кB與心力衰竭心功能分級關(guān)系的研究

王晉濱 張雪娥

[摘要] 目的 探討充血性心力衰竭（congestive heart failure，CHF）患者不同心功能分級與外周血單個核細胞（peripheral blood mononuclear cells，PBMC）核因子-кB（NF-кB）表達的關(guān)系。 方法 選取75例心衰患者，并按心功能分為Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ3個組，分別為33例、24例、18例和正常對照組15例。PBMC的NF-кB表達由免疫組化染色檢測。兩組資料差異采用t檢驗，心衰患者心功能與PBMC NF-кB表達的關(guān)系用相關(guān)分析。結(jié)果 心衰組與正常對照組PBMC NF-кB的表達差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P ＜ 0.01），心衰患者心功能分級與PBMC NF-кB的表達呈正相關(guān)（P ＜ 0.01）。 結(jié)論 心衰的程度越重，NF-кB表達越高。

[關(guān)鍵詞] 核因子-кB；充血性心力衰竭

[中圖分類號] R541.6[文獻標(biāo)識碼] B[文章編號] 1673-9701（2012）16-0069-02

The relationship between NF-кB and cardiac function classification in heart failure patients

WANG Jinbin ZHANG Xue''e

Department of Cardiology, Shanxi Medical University Second Affiliated Hospital, Taiyuan 030001, China

[Abstract] ObjectiveTo study the relationship of NF-кB activation on peripheral blood mononuclear cells (PBMC) and cardiac function classification in heart failure patients. Methods Selected 75 cases of patients with heart failure and divided into three groups of Ⅱ, Ⅲ, Ⅳ, according to cardiac function, were 33 cases, 24 cases, 18 cases and normal control group of 15 cases. The activity of NF-кB was measured by immunocytochemical staining. Two sets of data differences were analyzed by t tests; cardiac function of patients with heart failure and expression in PBMC of NF-кB was analyzed by the correlation analysis. Results Difference of PBMC expression of NF-кB was statistically significant in the CHF group compared with the normal control group (P ＜ 0.01). NF-кB expression In PBMC and cardiac function classification was positively correlated (P < 0.01). Conclusion With the more severe the degree of heart failure, the higher the activation of NF-кB.

[Key words] NF-кB; Congestive heart failure

心力衰竭是各種心臟疾病導(dǎo)致心功能不全的一種綜合征。近代研究表明，神經(jīng)內(nèi)分泌-細胞因子（TNF-α、IL-1β、IL-6 血管緊張素Ⅱ、COX-2等）的激活和心室重塑是心衰發(fā)生發(fā)展的兩大基本機制[1-3]。Purcell等[4]的研究表明，NF-κB本身的過度表達可以誘導(dǎo)心肌細胞的肥大導(dǎo)致心肌重塑。相關(guān)研究表明[5]，NF-кB是一種重要的細胞核轉(zhuǎn)錄因子，參與上述炎性細胞因子的調(diào)控，其最初是從B細胞核提取物中發(fā)現(xiàn)的一種能與免疫球蛋白κ輕鏈基因的增強子кB序列（5''-GGG ACTTTCC-3''）特異結(jié)合,并能促進κ鏈基因表達的核蛋白因子，后來發(fā)現(xiàn)其廣泛存在于許多類型細胞中,并在心血管病領(lǐng)域備受關(guān)注。但在外周血細胞中NF-кB表達與心衰的嚴(yán)重程度的關(guān)系報道較少，本實驗是通過測定心衰患者外周血單個核細胞（PBMC）的NF-кB表達，研究NF-кB對不同心功能分級的心衰患者的意義。

1 資料與方法

1.1 研究對象

選擇2010年3～11月 在山西醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)學(xué)院心血管內(nèi)科住院診斷為心衰的患者75 例，男40 例，女 35 例,平均年齡（61.7±11.4）歲，心功能按美國紐約心臟病學(xué)會（NYHA）1928年提出的方案分為Ⅱ～ Ⅳ級,病因為擴張性心肌病、冠心病、高血壓、缺血性心肌病。對照組來自我院門診健康者，共 15 例，男 7例，女8例，平均年齡（63±8.7）歲。所有受試對象均排除嚴(yán)重肝、腎功能不全，風(fēng)濕活動，免疫、感染和腫瘤等疾病。

1.2 方法

無菌采取抗凝血 4 mL 血液加PBS液1:1稀釋后，2:1體積置于淋巴細胞分離液上，2 000 r/min離心20 min ，收集試管中間懸浮的一層乳白色液體，即為PBMC。用5倍體積PBS液洗滌3次，1 500 r/min離心10 min。臺盼藍拒染試驗活細胞比例 > 95 %為有效標(biāo)本。1640培養(yǎng)基調(diào)整細胞數(shù)為2×107，取30 μL細胞混懸液涂于用多聚賴氨酸處理的載波片上，室溫風(fēng)扇吹干，丙酮固定 30 min，干燥后保存于-70℃冰箱待測。NF-кB的免疫組化染色：第一抗體選用兔抗NF-кB p65亞單位的多克隆抗體，抗體稀釋度經(jīng)預(yù)試驗定為1×100，用 SABC法試劑盒進行操作，操作步驟按試劑盒說明書進行。每張涂片于高倍視野下隨機計數(shù)500個細胞，計算細胞核陽性的細胞數(shù)占細胞總數(shù)的百分率。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理

試驗數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間比較采用t檢驗，用相關(guān)分析方法來分析PBMC中NF-кB的活化率與心功能分級以及不同病因的相關(guān)性，P ＜ 0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義，所有數(shù)據(jù)用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件完成。

2 結(jié)果

心衰組總外周血單個核細胞NF-кB活化率（24.7±11.4）%、與正常對照組（7.7±2.4）%，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（t = 8.137，P ＜ 0.01），且明顯高于對照組。心衰組隨著心功能分級的增高，PBMC中NF-кB活化率越高，且兩者呈正相關(guān)（r = 0.972，P ＜ 0.01），見表1，心衰不同基礎(chǔ)心臟病組的NF-кB活化水平無相關(guān)性，即不同基礎(chǔ)心臟病組與NF-кB活化率的聯(lián)系無統(tǒng)計學(xué)意義（r = －0.6，P ＞ 0.05），見表2。

表1 心衰組不同心功能分級外周血單個核細胞NF-кB核染色活化率（x±s）

表2 心衰組不同基礎(chǔ)心臟病外周血單個核細胞NF-кB活化率

（x±s）

3 討論

心力衰竭是冠心病、高血壓、缺血性心肌病、擴張型心肌病等各種心臟病發(fā)展的最嚴(yán)重階段，出現(xiàn)心肌收縮力下降使心排血量不能滿足機體代謝需要，器官、組織血液灌注不足，同時出現(xiàn)肺循環(huán)和（或）體循環(huán)淤血的表現(xiàn)。據(jù)最近中國心血管健康多種新合作研究結(jié)果表明，我國現(xiàn)有心力衰竭患者超過400萬，患病率為0.9％，其中男性0.7％，女性為1.0％，且每年發(fā)病人數(shù)呈現(xiàn)迅速上升趨勢[12]。心力衰竭現(xiàn)在是唯一一種患病率、發(fā)病率和死亡率均增高的心血管病，所以研究心衰的發(fā)病機制，尋找新的治療和預(yù)防途徑非常重要。心力衰竭是以心室重塑為特征，神經(jīng)內(nèi)分泌-細胞因子系統(tǒng)激活，自身不斷發(fā)展的過程。核因子從心肌炎性反應(yīng)、細胞凋亡、心室重塑等方面參與心衰的發(fā)生發(fā)展過程[6]。在靜息狀態(tài)下抑制蛋白кB（IкB）與NF-кB（通常指p65/p50二聚體）結(jié)合形成無活性三聚體存在于胞質(zhì)中，當(dāng)細胞受到外界刺激后，IкB發(fā)生磷酸化而被降解NF-кB暴露進入細胞核與靶基因特異性結(jié)合從而起動基因轉(zhuǎn)錄，調(diào)控基因表達[7]。國內(nèi)外對NF-кB與心血管病的研究較多，研究表明NF-кB與心衰、冠心病、動脈粥樣硬化、高血壓、缺血-再灌注損傷等的發(fā)生發(fā)展均有密切關(guān)系[8]。如冠心病患者的NF-кB細胞率明顯高于無心血管病史的健康者[9]；風(fēng)心病心肌中NF-кB表達呈陽性且與心功能分級呈正相關(guān)[10]；在對自發(fā)性高血壓大鼠動物模型的研究中發(fā)現(xiàn)心肌組織中NF-кB p65蛋白表達明顯高于無高血壓對照組[11]。外周血細胞中NF-кB的表達與心血管疾病的報道較少及考慮到操作簡單易行，本實驗以心衰患者外周血單個核細胞中NF-кB表達來探討對心功能不同分級及4種基礎(chǔ)心臟病所致心衰的影響。本實驗表明，心衰患者的NF-кB染色率明顯高于正常組，說明心衰時NF-кB被激活，可能參與了心衰的發(fā)生發(fā)展過程。本實驗發(fā)現(xiàn)，心衰程度越重，外周血單個核細胞NF-кB染色率越高，推測NF-кB可以作為評價心衰嚴(yán)重程度的指標(biāo)，客觀反映心功能的情況。但受上述四種基礎(chǔ)心臟病的影響不大，即心衰患者的NF-кB表達升高與這些基礎(chǔ)心臟病因無關(guān)，而是心衰自身原因。我們可以推測這四種基礎(chǔ)心臟疾病在發(fā)展到心力衰竭時，都要經(jīng)過NF-кB轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，進而通過啟動或激活心肌的炎性反應(yīng)、心肌細胞凋亡、心肌重塑等方面而導(dǎo)致心衰。

總之，NF-кB在心衰發(fā)生發(fā)展的過程中起著非常重要的作用，可為心衰的早期診斷、評價、治療及預(yù)后提供新的思路和方法。

[參考文獻]

[1]Gao CQ，Saw IG，Suarez-pnzon WL，et al. Matrix metalloproteinase-2 mediates cytokine induced myocardial contractile dysfunction [J]. Cardiovasc Res，2003，57（2）：426-433.

[2]Setsuta K，Seno Y，Ogawa T，et al. Ongoing myocardial damage in chronic heart failure is related to activated tumor necrosis factor and Fas/Fas ligand system[J]. Jpn Circ J，2004，68（8）：747-750.

[3]戴閏柱. 世紀(jì)之交的心力衰竭[J]. 中華心血管病雜志，2001，29（11）：641-64.

[4]Purcell NH，Tang G，Mercurio F，et al. Activation of NF-κB is required for hypertrophic growth of primary rat neonatal ventricular cardiomyocytes[J]. Proc Natl Acad Sci USA,2001,98（12）：6668-6673.

[5]Siebenlist U，F(xiàn)ranzoso G，Brown K. Structure，regulation and function of NF-кB[J]. Annu Rev Cell Biol，1994,10：405-455.

[6]馬莉,楊蘭,陳天鋒，等.核因子-кB與心力衰竭的關(guān)系[J]. 中國循環(huán)雜志，2002，17（4）：315-316.

[7]徐祥，梁華平. 核因子-кB的結(jié)構(gòu)和功能研究進展[J]. 細胞與分子免疫學(xué)雜志，2002，18（1）：92-95.

[8]楊敏烈. NF-кB的作用及在心血管疾病治療中的研究進展[J]. 南通大學(xué)學(xué)報，2008，28（1）：77-78.

[9]裘云仙，戴利成，程震峰，等. 急性冠狀動脈綜合征患者外周血單個核細胞群中NF-кB+細胞率和血漿sICAM-1水平的臨床意義[J]. 檢驗醫(yī)學(xué)，2004，19（5）：465-466.

[10]任崇雷，劉維永，張近寶. 風(fēng)濕性心臟病心肌中核轉(zhuǎn)錄因子的表達及其意義[J]. 中華風(fēng)濕病學(xué)雜志，2005,9（9）：534－536.

[11]呂立華，張玉碧. 木犀草素對自發(fā)性高血壓大鼠心肌組織的保護作用及NF-κB表達的影響[J]. 時珍國醫(yī)國藥，2011，22（7）：1645-1647.

[12]郭暢，劉文嫻. 心力衰竭的流行病學(xué)與防治現(xiàn)狀[J]. 中國健康教育，2010，26（2）：139-140.

（收稿日期：2012-03-15）