MMP-9和VEGF的表達對非小細胞肺癌預后價值的評估

李杰

[摘要] 目的 檢測基質(zhì)金屬蛋白酶-9（MMP-9）和血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）在非小細胞肺癌組織中的表達，并評估其預后價值。 方法 應用免疫組織化學技術(shù)檢測86例非小細胞肺癌和60例正常肺組織中MMP-9和VEGF的表達，分析其在不同臨床特征中的價值，關注其表達對判斷預后的意義。 結(jié)果 非小細胞肺癌中MMP-9和VEGF表達的陽性率明顯高于正常肺組織，MMP-9和VEGF的表達與非小細胞肺癌腫瘤的直徑、胸膜侵犯、分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關，非小細胞肺癌中MMP-9和VEGF的表達呈正相關，生存分析顯示MMP-9和VEGF的表達與患者的預后有關。 結(jié)論 非小細胞肺癌中MMP-9和VEGF高表達，MMP-9可能對腫瘤的血管形成有促進作用，聯(lián)合檢測MMP-9和VEGF的表達可能與非小細胞肺癌患者的預后有關。

[關鍵詞] 非小細胞肺癌；血管內(nèi)皮生長因子；基質(zhì)金屬蛋白酶-9；預后；免疫組織化學

[中圖分類號] R734.2[文獻標識碼] B[文章編號] 1673-9701（2012）16-0058-02

Expression and significance of MMP-9 and VEGF in non-small cell lung carcinoma

LI Jie

Department of Thoracic Surgery, the Second Hospital of Ningbo City, Ningbo 315000, China

[Abstract] Objective To investigate the protein expressions of MMP-9 and VEGF, observe their relationship and clinical significance on development and metastasis of non-small cell lung carcinoma. Methods We detected the protein expressions of MMP-9 and VEGF by IHC in the non-small cell lung carcinoma (86 cases) and normal lung tissues (60 cases). Their expression relationship and different pathological characters in the non-small cell lung carcinoma were analyzed. Results The protein expressions of MMP-9 and VEGF were higher in the neoplasm than in normal lung tissues. Their expressions were correlated with diameter, pleura invasion, differentiation and lymph node metastasis. Positive correlation between MMP-9 and VEGF protein were found in neoplasm. The expressions of MMP-9 and VEGF were correlated with prognosis. Conclusion The higher expressions of MMP-9 and VEGF are found in non-small cell lung carcinoma. The combined detection of MMP-9 and VEGF may be helpful for prognosis of neoplasm.

[Key words] Non-small cell lung carcinoma; VEGF; MMP-9; Prognosis; Immunohistochemistry

非小細胞肺癌在發(fā)生發(fā)展過程中，常存在著旺盛的血管生成。基質(zhì)金屬蛋白酶家族在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中具有重要的生物學作用，而且其相關成員對腫瘤的血管生成有一定促進作用。本實驗應用免疫組織化學技術(shù)檢測非小細胞肺癌中基質(zhì)金屬蛋白酶-9（MMP-9）和血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）的表達，探討腫瘤中MMP-9和VEGF表達的關系及對判斷預后的意義，旨在為臨床探討腫瘤的發(fā)生發(fā)展及治療提供理論幫助。

1 材料與方法

1.1 材料

收集我院2007年1月～2008年10月非小細胞肺癌手術(shù)后預留的蠟塊組織。納入均符合WHO關于肺腫瘤的診斷標準。排除標準[1]：術(shù)前行放療、化療的患者；臨床資料不完整的患者。觀察組共86例，其中男46例，女40例，年齡34～76歲，平均55.9歲。同時選取手術(shù)切緣經(jīng)病理證實為正常的肺組織60例作為對照組，其中男30例，女30例，年齡35～74歲，平均55.1歲。兩組患者的一般臨床特征比較差異無統(tǒng)計學意義，具有可比性。

1.2 免疫組織化學方法

MMP-9和VEGF免疫組化試劑的濃縮液均購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司，在進行實驗前進行預實驗，選擇最佳稀釋比例，所有標本均應用免疫組化SP法進行。具體步聚：脫蠟，水化組織切片，3%H2O2去離子水孵育10 min，以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶；抗原修復后分別滴加一抗，室溫37℃孵育1～2 h或過夜，PBS沖洗，5 min×3次；滴加生物素標記的二抗，室溫37℃孵育20 min，PBS沖洗，5 min×3次；滴加辣根酶標記鏈霉卵白素，室溫37℃孵育20～30 min，PBS沖洗，5 min×3次；應用DAB顯色劑顯色；自來水充分沖洗、復染、脫水、透明、封片。實驗中的檢測均由同一病理技師完成，并在顯微鏡下顯色觀察，嚴格質(zhì)控。

1.3 結(jié)果判定標準[2]

MMP-9和VEGF免疫組化染色結(jié)果均由兩位病理科主治醫(yī)師得出。將MMP-9和VEGF蛋白在細胞漿出現(xiàn)棕黃色定為陽性。切片中找5個典型的高倍視野，計算陽性細胞的百分比。

1.4 統(tǒng)計學方法

數(shù)據(jù)均應用SAS6.12進行統(tǒng)計學分析，兩組間資料的比較采用t檢驗，并行相關性檢驗及生存分析，P ＜ 0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 觀察組與對照組中MMP-9和VEGF表達量的比較

觀察組與對照組中MMP-9（58.14±5.42 vs 38.33±5.25，t = 5.434 6，P = 0.015 5）和VEGF（65.12±7.26 vs 30.00±6.74，t = 11.326 3，P = 0.000 3）的表達量差異有統(tǒng)計學意義。

2.2 觀察組MMP-9和VEGF的表達在不同臨床病理特征中的關系

觀察組中MMP-9和VEGF的表達與腫瘤的直徑（55.46±6.53 vs 60.53±6.03；60.53±7.64 vs 68.54±6.59）、胸膜侵犯（56.52±5.93 vs 62.32±6.57；62.32±5.39 vs 71.64±6.48）、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（56.94±6.52 vs 63.25±5.49；62.41±6.49 vs 72.19±5.86）及分化程度（55.14±6.05 vs 61.14±7.64；63.42±7.54 vs 69.75±6.94）密切相關。見表1。

2.3 觀察組中MMP-9和VEGF表達的相關性

線性相關分析即Pearson法結(jié)果顯示，觀察組中MMP-9和VEGF的表達呈正相關（r = 0.42，P = 0.015 4），而對照組中MMP-9和VEGF的表達未見明顯的相關性（P = 0.243 6）。

2.4 觀察組中MMP-9和VEGF的表達與預后的關系

本組患者隨訪時間為6～60個月，平均31.3個月。MMP-9和VEGF陽性患者的生存明顯短于MMP-9（25.45±5.46 vs 41.20±6.53）和VEGF（24.36±6.04 vs 41.95±5.93）陰性患者（P ＜ 0.05），即MMP-9和VEGF高表達的患者預后差。

3 討論

腫瘤的生物學是當今研究的熱點，而腫瘤的生長、侵襲和轉(zhuǎn)移是重要的生物學行為。腫瘤的生長依靠血管生成，而在侵襲和轉(zhuǎn)移過程中，腫瘤細胞必須穿過由細胞外基質(zhì)和基底膜構(gòu)成的屏障，而在此過程中起作用的是基質(zhì)金屬蛋白酶家族。MMP-9是一種鋅離子依賴的蛋白水解酶，也稱明膠酶B，可由腫瘤細胞和間質(zhì)細胞以酶原形式分泌并經(jīng)水解后激活，具有較強的降解基底膜成份功能，被認為與腫瘤的惡性進程、侵襲和轉(zhuǎn)移密切相關[3，4]。VEGF是由2條相對分子量為23 000的單鏈組成的蛋白質(zhì)，是目前公認的研究較為深入的促血管內(nèi)皮生長因子，對腫瘤基質(zhì)血管形成及腫瘤生物學行為均有重要影響，其表達與腫瘤的預后有關[5]，并能直接作用于血管內(nèi)皮細胞，引起內(nèi)皮細胞的增殖。

本實驗應用對照觀察的方法，采用免疫組織化學技術(shù)，檢測非小細胞肺癌及正常肺組織中MMP-9和VEGF的表達，結(jié)果顯示腫瘤中MMP-9和VEGF的表達陽性率明顯高于對照組，提示二者在非小細胞肺癌的發(fā)生及進展中具有重要作用。實驗結(jié)果顯示觀察組中MMP-9和VEGF的表達均與腫瘤的直徑、胸膜侵犯、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及分化程度密切相關，由于腫瘤體積、胸膜侵犯、分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均與患者的預后有關，因此聯(lián)合檢測腫瘤中MMP-9和VEGF的表達可能對判斷預后有一定意義，而且生存分析直接證實了此結(jié)論。實驗結(jié)果顯示非小細胞肺癌組織中MMP-9和VEGF的表達呈正相關，提示MMP-9和VEGF在蛋白水平上具有協(xié)同正向作用。MMP-9可能作為上游基因，調(diào)節(jié)VEGF的表達，促進腫瘤中新生血管形成，同時VEGF表達增加，可以增加腫瘤間質(zhì)毛細血管壁的通透性。觀察組中的相關性結(jié)論也進一步說明了MMP家族在腫瘤的血管化中發(fā)揮重要作用，而對照組中MMP-9和VEGF的表達無明顯相關性，即MMP-9和VEGF在腫瘤中的協(xié)同作用明顯，對促進腫瘤的進展有重要作用。當MMP-9引起VEGF的激活后，通過與細胞膜上特異性受體結(jié)合而發(fā)揮多種生物學效應：特異性地促進內(nèi)皮細胞分裂增殖，改變內(nèi)皮細胞的基因表達方式，增加微血管的新生[6，7]。因此，MMP-9和VEGF的協(xié)同作用可能是非小細胞肺癌發(fā)生發(fā)展中的通路，具體機制尚有待進一步研究明確。因此，設想阻斷MMP-9和VEGF通路的治療，可能成為非小細胞肺癌治療的新策略。

綜上所述，非小細胞肺癌中MMP-9和VEGF高表達，MMP-9和VEGF可能具有協(xié)同作用，二者對腫瘤的進展有促進作用，聯(lián)合檢測MMP-9和VEGF的表達可能與患者的預后有關。

[參考文獻]

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[3]Hong DY，Lee BJ，Lee JC，et al. Expression of VEGF, HGF, IL-6, IL-8, MMP-9, Telomerase in peripheral blood of patients with head and neck squamous cell carcinoma[J]. Clin Exp Otorhinolaryngol，2009，2（4）：186-192.

[4]戴磊，陳銘伍，冼磊. MMP-9在非小細胞肺癌組織中的表達及意義[J]. 廣西醫(yī)學，2011，33（1）：8-10.

[5]Zhao R，Liu XQ，Wu XP，et al. Vascular endothelial growth factor (VEGF） enhances gastric carcinoma invasiveness via integrin alpha(v)beta6[J]. Cancer Lett，2010，287（2）：150-156.

[6]Liu CJ，Chang KW，Lin SC，et al. Presurgical serum levels of matrix metalloproteinase-9 and vascular endothelial growth factor in oral squamous cell carcinoma[J]. Oral Oncol，2009，45（10）：920-925.

[7]劉愛東，龐久玲，劉士生. 胃癌中基質(zhì)金屬蛋白酶-9和CD105表達關系的研究[J]. 中國老年學雜志，2009，29（7）：886-887.

（收稿日期：2012-01-06）