P105和PTEN在皮膚鱗狀細胞癌中的表達及相關性研究

方木平 易海英 劉漢忠

[摘要]目的：觀察皮膚鱗狀細胞癌（SCC）中P105和PTEN蛋白的表達情況，探討其表達與臨床病理特征的關系。方法：用免疫組化SP法檢測52例皮膚鱗狀細胞癌組織和10例正常皮膚組織石蠟標本中P105和PTEN蛋白的表達。結果：在SCC標本中，P105蛋白陽性表達率明顯高于正常皮膚組織（P<0.05）；PTEN蛋白陽性表達率明顯低于正常皮膚組織（P<0.001）。在低分化SCC標本中， P105蛋白的陽性表達率高于高中分化組，PTEN蛋白的陽性表達率低于高中分化組（P均<0.001）；P105蛋白的陽性表達與病理分級呈明顯正相關，PTEN蛋白陽性表達與病理分級呈明顯負相關（P均<0.05）。結論：在SCC 組織標本中，P105強表達，PTEN蛋白低表達或不表達，這可能是細胞惡性轉化和增殖的信號，也是腫瘤具有侵襲性的標志。

[關鍵詞]癌，鱗狀細胞；P105蛋白；PTEN蛋白；免疫組化

[中圖分類號]R739.5[文獻標識碼]A[文章編號]1008-6455（2012）01-0061-03

The expression and investigate of P105 and PTEN protein in cutaneous squamous cell

FANG Mu-ping1,YI Hai-ying2,LU Han-zhong3

(1.Department of Dermatology,2.Department of newborn,3.Departmentof pathology,Center Hospital ofXiaogan 432000,Hubei,China)

Abstract:ObjectiveTo investigate the expression and its relation to clinicopathological characteristis of P105 and PTEN protein in cutaneous squamous cell carcinoma.MethodsExpression of P105 and PTEN protein was detected in 52 SCC and 10 normal skin specimens by SP immunohistochemical technique.ResultsThe positive rate of P105 protein significantly higher in SCC specimen than that in normal skin（P<0.05）.The positive rate of PTEN was significantly lower in SCC than that in normal skin (P<0.001) in SCC specimen.The positive rate of P105 protein was higher than them in the high-middle differentiation group,The positive rate of PTEN protein was lower than them in the high-middle differentiation group(P<0.001) in Low differentiation of SCC pecimen.A significant positive relationship was observed between the expression of P105 and significant negative relationship of PTEN protein is relation to pathologicalgrading in SCC(P<0.05).ConclusionsThe enhance ofP105and the decrease or negative prefix deletion of PTEN protein expression will result in the m alignant transformation and proliferation, and tumour has an aggressive marks in SCC specimen.

Key words:cutaneous squamous cell carcinoma;P105 protein;CD105 protein;PTENI protein;immunohistochemistry

皮膚鱗狀細胞癌（cutaneous squamous cell carcinoma，SCC）是起源于上皮組織中角質形成細胞的常見惡性腫瘤，發病率呈逐年上升趨勢，特別是老年人群[1]。P105與Ki-67類似，是一種增殖相關核抗原，在細胞周期調節過程中起重要作用，在增殖細胞和高度惡性腫瘤中表達增強；PTEN是迄今發現的第一個具有雙特異性磷酸酶活性的抑癌基因，主要通過脫磷酸化作用調控細胞內信號傳導通路，從而調節細胞的生長、發育及抑制腫瘤增殖、粘附、轉移。本研究采用免疫組化SP法檢測皮膚鱗狀細胞癌組織和正常皮膚組織石蠟標本中P105和PTEN蛋白的表達情況，試圖探討其表達與臨床病理特征的關系。

1資料和方法

1.1一般資料：收集本院皮膚科和病理科于2005年1月～2011年12月手術切除的52例皮膚鱗狀細胞癌組織標本，均病歷資料完整和病理診斷明確。男23例，女29例；年齡41～80歲，平均（65.2±2.1）歲，病程3個月～11年（平均1.3±0.4年）。按Broders病理分級法將其分為：Ⅰ級12例，Ⅱ級15例，Ⅲ級14例，Ⅳ級11例。Ⅰ級為高分化鱗癌，Ⅱ級為中分化鱗癌，Ⅲ級～Ⅳ級為低分化鱗癌。另選取10例皮膚外科手術室切除的正常皮膚組織標本作為對照組，男4例，女6例。

1.2 方法

1.2.1主要試劑：鼠抗人P105單克隆抗體（克隆號2B3）購自北京英碩力柏科技有限公司，PTEN單克隆抗體（克隆號28H6）和SP免疫組化試劑盒（濃縮型）均購自北京中山生物技術開發有限公司。

1.2.2實驗方法采用免疫組化SP法，實驗步驟嚴格按照試劑盒說明書進行，用PBS液代替一抗作陰性對照，用已知的陽性切片作陽性對照。

1.2.3結果判定：由2位病理科醫師和1位皮膚科病理醫師共同評判。標準如下：①P105與PTEN根據著色強弱，染色強弱以多數細胞的呈色反應為準：不著色為0分，淺黃色為1分，深黃色為2分，棕黃色為3分；②低倍鏡下選取細胞分布均勻的視野，高倍鏡視野下用HMIAS高清晰病理彩色圖像分析系統進行圖像分析，每張切片在×40高倍鏡下隨機選取5個視野，每個視野計數100個細胞，計數陽性細胞數所占的百分比均值：<25%為1分，25%～50%為2分，>50%為3分。根據上述兩項的記分之和將P105和PTEN蛋白陽性結果分為4級：陰性（-）為＜2分，弱陽性（+）為＜3分，陽性（2+）為3～4分，強陽性（3+）為＞4分。

1.3統計學處理：用SPSS13.0軟件，均數均以x±s表示，計數資料采用卡方檢驗，組間比較采用單因素方差分析，用直線相關分析計算相關系數，并判定其相關程度。P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1 P105蛋白在SCC中的表達：見表1～2。P105蛋白主要表達于癌細胞核和細胞漿，在高分化鱗癌中，其分布以癌巢中心細胞為主，漿表達多于核表達（圖1）；在低分化鱗癌中，其分布于整個浸潤癌巢細胞中，核表達增多（圖2）；P105蛋白表達與病理分級呈正相關關系（r=0.444,P<0.05），即病理分級越高，癌分化越差，P105蛋白表達越強（χ2=12.921,P均<0.05）；在增生活躍的正常表皮基底層中，僅有少數弱表達P105蛋白（1例）(10%)，在SCC中，P105蛋白的陽性表達率（61.54%）顯著高于正常皮膚組織（10.00%），差異均有統計學意義(χ2=8.948， P均<0.05)。

2.2 PTEN蛋白在SCC中的表達：見表1～2。PTEN蛋白主要表達于正常細胞（圖3），在SCC中的陽性表達率顯著高于正常皮膚組織(χ2=14.478, P<0.001)，PTEN的表達與病理分級呈負相關關系，即其病理分級越高，癌分化越差，PTEN的表達越弱(χ2=17.990,P<0.001) 。1例Ⅲ級鱗狀細胞癌的PTEN蛋白強表達（圖4）。另外，PTEN蛋白在高和中分化SCC中的表達也顯著高于低分化SCC的表達(χ2=15.070, P<0.001)，差異均有統計學意義（P<0.001）。

2.3 皮膚鱗狀細胞癌中P105和PTEN表達的相關性：在低分化（Ⅲ級+Ⅳ級）SCC中，P105蛋白的陽性表達率高于高中分化組（Ⅰ級+Ⅱ級），而PTEN蛋白的陽性表達率低于高中分化組（Ⅰ級+Ⅱ級），差異均有統計學意義χ2=10.263；χ2=15.070,P均<0.001）。在SCC中，P105蛋白的陽性表達與病理分級呈正相關（r=0.444,P<0.05）,但PTEN蛋白的陽性表達與病理分級呈明顯負相關（r=-0.538，P<0.05）。

3討論

腫瘤的發生、發展和浸潤與多種癌基因強表達和抑癌基因低表達或失表達密切相關,是一種多基因、多因素相關性疾病。P105與Ki-67的分子量為105KD和41KD,在RNA代謝、RNA運輸或細胞周期調節過程中起重要作用，在增殖細胞和高度惡性腫瘤中表達增強，可以識別惡性腫瘤。本研究也顯示，其在SCC中的陽性表達率顯著高于正常皮膚組織，P105的表達與病理分級間存在正相關關系，即病理分級越高，癌分化越差，P105的表達越強。在食管鱗癌中， P105蛋白在細胞核與細胞質強表達，與腫瘤的發展關系密切[2]，本研究結果與之相似。

PTEN是繼p53基因后被發現的一種能識別腫瘤的抑制基因，在細胞的生長、凋亡、黏附、遷移和浸潤等方面有重要作用。PTEN蛋白失表達與一些惡性腫瘤的生物學行為和預后密切相關，陽性表達者多分化好、浸潤較淺、不伴淋巴結轉移和預后良好[3]。而本研究中，有1例低分化SCC強表達PTEN蛋白，其原因不明。Murao 等[4]研究發現，抑癌基因甲基化失活，是SCC發病原因之一。本研究發現，正常皮膚和SCC組織中PTEN蛋白表達于細胞核，這與周樹偉等[5]的研究結果一致，但董曉群等[6]發現PTEN特異性地在皮膚、結腸、乳腺、前列腺中分布于細胞質。正常皮膚組織中PTEN蛋白陽性率高于SCC（χ2=14.478，P<0.001），其病理分級越高，陽性表達率越低，差異均有統計學意義（P均<0.001）。

腫瘤的發生和發展與腫瘤組織細胞異常增生、抑癌基因的失活密切相關。在SCC中，PTEN蛋白陽性表達率越高， P105蛋白的陽性表達率就越低。提示P105蛋白高表達，PTEN蛋白低表達或失表達可能與SCC的發生、發展及病理特征密切相關。故筆者認為，聯合檢測P105和PTEN蛋白可能為SCC的診斷及預后提供依據，可為手術或放射治療SCC提供依據，減輕患者痛苦，有可能也為局部注射抑癌因子治療SCC提供了理論依據。

[參考文獻]

[1]趙天恩,鄭家潤. 皮膚鱗狀細胞癌研究進展[J].國際皮膚性病學雜志，2006,32(4):247-250.

[2]Kang MR, Kim MS, Kim SS,et al. NF-kappaB signalling proteins p50/p105, p52/p100, RelA, and IKKepsilon are over-expressed in oesophageal squamous cell arcinomas[J].cPathology.2009,41(7):622-625.

[3]Depowski PL,Rosenthal SI,Ross JS.Loss of expression of the PTENgene protein product is associated with poor outcome in breast cancer[J].Mod Pathol,2001,14(7):672-676.

[4]Murao K, Kubo Y, Ohtani N,et al. Epigenetic abnormalities in cutaneous squamous cell carcinomas: frequent inactivation of the RB1/p16 and p53 pathways[J]. Br J Dermatol,2006,155(5):999-1005.

[5]周樹偉,陳旻靜. PTEN和P-ERK蛋白在皮膚鱗狀細胞癌中的表達和意義[J].中國美容醫學，2008,17(10):1483-1485.

[6]董曉群,周鋼橋,褚嘉祐,等.PTEN基因與惡性腫瘤[J].國際腫瘤學雜志,2007,34（1）：2.

[收稿日期]2011-06-09 [修回日期]2011-09-26

編輯/張惠娟