杧果果實(shí)潛伏侵染真菌種類研究

摘 要: 為了探明杧果果實(shí)真菌的潛伏侵染狀況，采用組織分離法對(duì)采自華南6省區(qū)的杧果果實(shí)真菌潛伏侵染進(jìn)行研究，結(jié)果表明，我國(guó)杧果果實(shí)普遍存在真菌的潛伏侵染現(xiàn)象，但不同省區(qū)的帶菌率存在顯著差異，果柄和果實(shí)蒂部的帶菌率極顯著高于果實(shí)中部和端部的帶菌率。共鑒定11種潛伏侵染真菌，分別為膠孢炭疽菌（Colletotrichum gloeosporioides Penz.）、可可球二孢菌（Botryodiplodia theobromae Pat.）、尖孢炭疽菌（Colletotrichum acutatum Simmonds.）、杧果擬莖點(diǎn)霉（Phomopsis mangiferae Ahmad.）、杧果擬盤多毛孢（Pestalotiopsis mangiferae（P. Henn.）Sutton.）、多米尼加小穴殼（Dothiorella dominicana Pet. et Cif.）、杧果大莖點(diǎn)霉（Macrophoma mangiferae Hing. O. P. Sharma）、鏈格孢（Alternaria alternata（Fr．）Keissl.）、曲霉（Aspergillus sp.）、彎孢霉（Curvularia sp.）、鐮刀菌（Fusarrium spp.）。其中，膠孢炭疽菌（C. gloeosporioides）、可可球二孢菌（B. theobromae）為主要潛伏侵染真菌，杧果大莖點(diǎn)霉（M. mangiferae）為首次報(bào)道的杧果潛伏侵染真菌。

關(guān)鍵詞: 杧果； 潛伏侵染； 致病真菌； 中國(guó)

中圖分類號(hào)：Ｓ６６7．7 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：Ａ 文章編號(hào)：１００９－９９８０?穴２０12?雪０1－0105－０6

Investigation of latent infection of pathogenic fungi in mango fruits

HU Mei-jiao1，2，3，4， GAO Zhao-yin1，3，4， LI Min1，3，4， YANG Bo1，2， YANG Dong-ping1，2， ZHANG Zheng-ke1，3，4

（1Environment and Plant Protection Institute， Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences， Danzhou，Hainan 571737 China； 2College of Environment and Plant Protection， Hainan University， Danzhou， Hainan 571737 China； 3Hainan Key Laboratory for Monitoring and Control of Tropical Agricultural Pests， Danzhou， Hainan 571737 China； 4Hainan Engineering Research Center for Biological Control of Tropical Crops Diseases and Pests， Danzhou， Hainan 571737 China）

Abstract: The occurrence of latent infection of pathogenic fungi in mango（Mangifera indica L.） fruits from 6 provinces of South China was studied according to the tissue isolation method. The results showed that the latent infection of fungi comprehensively existed in the healthy mango fruits. However， there were significant differences in latent infection rate among the mango fruits from different provinces（P＜0.05）. The rates of latent infection in the stalk and the stem end were significantly higher than those in the other parts（P＜0.01）. There were 11 pathogenic fungi to be identified， including Colletotrichum gloeosporioides Penz.， Botryodiplodia theobromae Pat.， Colletotrichum acutatum Simmonds.， Phomopsis mangiferae Ahmad.， Pestalotiopsis mangiferae（P. Henn.） Sutton.， Dothiorella dominicana Pet. et Cif.， Macrophoma mangiferae Hing. O.P. Sharma， Alternaria alternata（Fr．） Keissl.， Aspergillus sp.， Curvularia sp. and Fusarrium spp. Among these isolated fungi， both C. gloeosporioides and B. theobromae were the main fungi leading to latent infection in mango. Moreover， M. mangiferae was first reported as one of latent infection fungi in mango fruit.

Key words: Mango； Latent infection； Pathogenic fungi； China

杧果（Mangifera indica L.）以其色、香、味俱佳而享有“熱帶果王”之美譽(yù)，總產(chǎn)量居世界五大水果之列，也是我國(guó)重要的熱帶水果之一，2009年末我國(guó)的種植面積達(dá)13.12萬hm2，總產(chǎn)量達(dá)89.11萬t。然而，杧果果實(shí)采后腐爛損失嚴(yán)重，給杧果的保鮮及貯運(yùn)帶來困難，造成較大的經(jīng)濟(jì)損失[1]。

杧果采后腐爛的重要原因是病害引起，而引起采后病害的病原菌多數(shù)在杧果發(fā)育期間侵入，因果實(shí)采收后抗性降低，可利用的營(yíng)養(yǎng)物增加，病原菌從潛伏狀態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)橹虏顟B(tài)而引起果實(shí)腐爛。有關(guān)杧果果實(shí)的真菌潛伏侵染研究，Baker[2]在1937年首次報(bào)道；Prusky等[3]報(bào)道了鏈格孢菌（A. alternata）在杧果果實(shí)中的潛伏侵染現(xiàn)象及其危害；Jitareerat等[4]用PCR方法檢測(cè)了膠孢炭疽菌（C. gloeosporioides）在綠杧果中的潛伏侵染；Johnson等[5]認(rèn)為鏈格孢（A. alternata）、芽枝狀枝孢（Cladosporium cladosporioides）、多米尼加小穴殼（D. dominicana），杧果小穴殼（D. mangiferae）、小穴殼（Dothiorella sp.）、黑附球菌（Epicoccum purpurascens） 和 擬盤多毛孢（Pestalotiopsis sp.）可在杧果謝花期和著果期開始侵入，而在果實(shí)成熟期引起蒂腐病。在我國(guó)，劉秀娟等[6]首次報(bào)道了我國(guó)海南島杧果果實(shí)的真菌潛伏侵染情況，認(rèn)為杧果果實(shí)中的潛伏侵染真菌有膠孢炭疽菌（C. gloeosporioides）、尖孢炭疽菌（C. acutatum）、色二孢菌（Diplodia sp.）、鏈格孢（Alternaria spp.）等，羅遠(yuǎn)嬋等[7]對(duì)廣西杧果蒂腐病菌潛伏侵染真菌進(jìn)行了研究，認(rèn)為至少有10種潛伏侵染真菌可引起杧果果實(shí)腐爛，其中多米尼加小穴殼（D. dominicana）、可可球二孢（B. theobromae）、色二孢菌（Diplodia sp.）為主要病原菌，杧果擬盤多毛孢（P. mangiferae）、杧果擬莖點(diǎn)霉（P. mangiferae）為次要病原菌，其他真菌只在一定情況下引起蒂腐病癥狀。

明確寄主植物中病原菌的潛伏侵染情況，弄清其種類，了解其潛伏時(shí)期的長(zhǎng)短和限制病原菌癥狀發(fā)展的生理機(jī)制對(duì)弄清病害流行規(guī)律、對(duì)提高病害防治效率和抗病育種具有重要意義[8]。我們于2007—2010年，從海南、廣東、廣西、云南、四川和福建6省區(qū)采集未成熟、健康、無任何癥狀的杧果果實(shí)進(jìn)行研究，旨在探明真菌的潛伏侵染狀況，為指導(dǎo)杧果果實(shí)病害防治和防腐保鮮提供依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 材料

供試材料為未套袋、果實(shí)發(fā)育中期尚未成熟、健康、外表無任何癥狀的杧果果實(shí)，于2007—2010年分別采自海南、廣東、廣西、云南、四川、福建6省區(qū)的杧果園，但極少數(shù)的果實(shí)采自零星種植的杧果樹。

1.2 方法

1.2.1 杧果果實(shí)帶菌率的測(cè)定 用PDA培養(yǎng)基作常規(guī)組織分離[9]。將采集到的杧果果實(shí)用自來水沖洗干凈，自然晾干后，每個(gè)果實(shí)的果柄部位隨機(jī)取組織塊4塊，從果實(shí)蒂部、中部和端部的4個(gè)方位分別取厚1～2 mm、大小3 mm×3 mm的果皮各1塊，表面消毒后將組織塊接種于PDA平板上，恒溫（28±0.5） ℃培養(yǎng)15 d，檢查帶菌組織塊數(shù)量，計(jì)算帶菌率。

1.2.2 真菌的純化及保存 待菌落從組織塊上長(zhǎng)出后，挑取菌落邊緣的菌絲體進(jìn)行純化。根據(jù)其菌落特征，菌絲形態(tài)，產(chǎn)孢結(jié)構(gòu)，孢子形態(tài)、顏色與大小，附著胞形態(tài)等進(jìn)行初步歸類，并統(tǒng)一編號(hào)，保存。

1.2.3 分離菌株的致病性測(cè)定 每一編號(hào)分離物選擇1～3株進(jìn)行致病性測(cè)定。將待測(cè)菌株接種于PDA平板上，恒溫（28±0.5） ℃培養(yǎng)7 d后，用打孔器打孔取菌絲塊（Φ=5 mm）進(jìn)行致病性測(cè)定。采用刺傷接種法，每個(gè)果實(shí)刺傷3個(gè)點(diǎn)，分別位于果實(shí)蒂部、中部和端部，將菌絲塊接種于刺傷點(diǎn)上，每個(gè)菌株接種3個(gè)果實(shí)，以接種無菌PDA培養(yǎng)基為對(duì)照，試驗(yàn)重復(fù)2次。用脫脂棉蘸取無菌水敷于菌絲塊上保濕，24 h后取去脫脂棉，置于常溫下（25～28） ℃待其發(fā)病。48 h、72 h和96 h分別檢查杧果的發(fā)病情況，計(jì)算96 h的發(fā)病率與發(fā)病指數(shù)，并對(duì)發(fā)病組織的病原菌按常規(guī)方法分離，分離獲得與原接種分離物形態(tài)一致的則鑒定為病原菌。病害分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)為0級(jí): 病斑不擴(kuò)展；1級(jí): 病斑直徑0～0.5 cm； 2級(jí): 病斑直徑0.6～1.0 cm ；3級(jí): 病斑直徑1.1～1.5 cm； 4級(jí): 病斑直徑1.6～2.0 cm； 5級(jí): 病斑直徑＞2.0 cm。

1.2.4 致病菌種類鑒定 致病菌接種于PDA培養(yǎng)基上于28 ℃培養(yǎng)，逐日觀察、記錄病原菌的培養(yǎng)性狀。顯微觀察菌絲體、產(chǎn)孢結(jié)構(gòu)及孢子形態(tài)、顏色、大小等特征，參考相關(guān)文獻(xiàn)[10-15]進(jìn)行病原菌鑒定。

2 結(jié)果與分析

2.1 杧果果實(shí)帶菌分析

6個(gè)采集省區(qū)的杧果果實(shí)中均存在真菌的潛伏侵染現(xiàn)象，帶菌率為30.99%～59.36%（47.08%），不同省區(qū)的帶菌率存在顯著差異（P＜0.05），四川最低，僅達(dá)到30.99%，顯著低于福建、廣西和云南的帶菌率，但與海南和廣東無顯著差異，其他地區(qū)的帶菌率無顯著差異（表1）。

從果實(shí)的部位看，不同部位的平均帶菌率存在極顯著的差異（P＜0.01），其中，果柄和果實(shí)蒂部的帶菌率（69.93%和61.81%）極顯著高于果實(shí)中部和端部的帶菌率（34.36%和22.24%），但果柄與蒂部、果實(shí)中部與端部的帶菌率沒有顯著差異（表2）。

2.2 致病性測(cè)定分析

在測(cè)定的18個(gè)分離物中，有11個(gè)具有致病性。其編號(hào)分別為CoG、BoT、CoA、PhM、PeM、DoD、MaM、AlA、As、Cu和Fu，其中，CoG和BoT的分離率最高，分別達(dá)到21.18%和16.65%，其次是CoA和PhM。在11個(gè)分離物中，BoT、PhM、DoD和MaM的發(fā)病率達(dá)到100%，發(fā)病指數(shù)超過40，其次是CoG、CoA和PeM，發(fā)病率分別達(dá)到93.63%、86.75%和89.65%，發(fā)病指數(shù)分別為27.98、19.46和25.61。其他菌株的發(fā)病率和發(fā)病指數(shù)相對(duì)較低（表3）。

2.3 致病菌株的鑒定

根據(jù)致病菌的培養(yǎng)性狀，菌落特征，產(chǎn)孢結(jié)構(gòu)，孢子形態(tài)、顏色與大小，附著胞形態(tài)等特征，共鑒定11種潛伏侵染真菌。

2.3.1 膠孢炭疽病（CoG） 該菌在PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)，菌落圓形，邊緣整齊，初為白色，后轉(zhuǎn)為灰白色、淺褐色或淺粉紅色，有些菌落具同心輪紋，部分菌落在培養(yǎng)過程中有扇變現(xiàn)象；產(chǎn)孢量大的菌落出現(xiàn)大量粉紅色或黑色小顆粒，即分生孢子的黏孢團(tuán)或分生孢子盤，但分生孢子盤上極少產(chǎn)生剛毛。菌絲毛絨狀，圓筒形，有隔膜和分枝。分生孢子產(chǎn)生于分生孢子盤內(nèi)或直接產(chǎn)生于菌絲體上，單胞，無色透明，圓筒形、橢圓形或棍棒形，兩端鈍圓，直或中間略凹，內(nèi)有1～2個(gè)油球，大小6.06～17.72 μm × 3.60～5.52 μm。附著胞深褐色，近圓形或不規(guī)則型，大小6.8～10.1 μm × 5.2～7.3 μm（圖版-A）。

在PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)有時(shí)可獲得其有性態(tài)，產(chǎn)生子囊殼，子囊殼燒瓶形，子囊長(zhǎng)棍棒形，平行排列于子囊殼內(nèi)，大小為42.10～70.78 μm × 8.13～12.11 μm，內(nèi)含8個(gè)子囊孢子。子囊孢子單胞無色，卵圓形或長(zhǎng)橢圓形，稍彎曲，無色，大小15.42～21.34 μm × 4.35～6.89 μm（圖版-B）。

將該菌接種到杧果果實(shí)上，72 h后產(chǎn)生明顯癥狀，圓形或近圓形、凹陷的深褐色至黑色斑塊，潮濕時(shí)病部產(chǎn)生橘紅色黏質(zhì)小點(diǎn)，隨后病斑連成斑塊，最終全果變黑腐爛，并產(chǎn)生大量粉紅色孢子堆。

從致病性測(cè)定的病果上挑取的病原菌孢子及菌絲體與PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)獲得的病原菌孢子及菌絲體形態(tài)基本一致。但病果上未見產(chǎn)生子囊殼、子囊及子囊孢子。

根據(jù)上述特征，將其鑒定為膠孢炭疽菌（Colletotrichum gloeosporioides Penz.），其有性態(tài)為圍小叢殼[Glomerella cingulata （Stonem.） Spauld. Schrenk]。

該菌在6個(gè)省區(qū)的健康杧果中均分離獲得，是一種廣泛分布的杧果潛伏侵染真菌。

2.3.2 可可球二孢菌（BoT） 該菌在PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)，菌落生長(zhǎng)旺盛，圓形，邊緣整齊，菌絲絨毛狀，初期白色，2～3 d后變?yōu)闇\灰褐色，后漸變?yōu)榛液谏梁谏换|(zhì)初期淺黑色，后轉(zhuǎn)為深黑色；黑暗條件下培養(yǎng)20～30 d可產(chǎn)生黑色分生孢子座，2～6個(gè)分生孢子器集中于分生孢子座內(nèi)；分生孢子器黑褐色，有孔口，近球形，大小350～450 μm ×130～200 μm，分生孢子器內(nèi)產(chǎn)生大量分生孢子，分生孢子卵形或橢圓形，未成熟時(shí)無色單胞，內(nèi)含物顆粒狀，成熟的分生孢子黑褐色，有一橫隔，雙胞，表面具縱紋，大小22.32～24.35 μm × 9.74～14.03 μm（圖版-C、D）。

將該菌接種到杧果果實(shí)上，48 h后出現(xiàn)水漬狀、淺褐色病斑，病健交界不明顯，96 h后病斑擴(kuò)展成黑褐色大斑，果肉液化，并滲出粘稠汁液，病斑表面密生灰色菌絲體，10～15 d后，病部集生黑色小粒，質(zhì)粒堅(jiān)硬，即分生孢子器，分生孢子器初期埋生于覆蓋有菌絲體的表皮內(nèi)，近成熟時(shí)才露出表皮外。

根據(jù)上述特征，將其鑒定為可可球二孢菌（Botryodiplodia theobromae Pat.）。

該菌在6個(gè)省區(qū)的健康杧果中均分離獲得，是一種廣泛分布的杧果潛伏侵染真菌。

2.3.3 尖孢炭疽菌（CoA） 該菌在PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)，菌落圓形，邊緣整齊，初為白色，后轉(zhuǎn)為淺灰色、淺橘黃色，氣生菌絲不發(fā)達(dá)，有隔膜和分枝，圓筒形，產(chǎn)生的分生孢子很少成堆聚集，分生孢子單胞，無色，梭形，內(nèi)有1～3個(gè)油球，大小10.02～16.50 μm × 2.20～3.62 μm，分生孢子萌發(fā)有時(shí)產(chǎn)生附著胞，附著胞近圓形或不規(guī)則形，淺褐色或深褐色，大小6.22～10.68 μm × 4.85～7.62 μm（圖版-E）。

將該菌接種到杧果果實(shí)上，其致病力與發(fā)病速度與膠孢炭疽菌（C. gloeosporioides）相似。72 h后病斑明顯，圓形或近圓形、凹陷、黑褐色至黑色的斑塊，潮濕時(shí)病部出現(xiàn)淺黑色小點(diǎn)，并產(chǎn)生大量黑色孢子堆。

根據(jù)上述特征，初步將其鑒定為尖孢炭疽菌（Colletotrichum acutatum Simmonds）。

該菌在海南、云南、廣東和廣西的健康杧果上分離獲得，且分離頻率呈上升趨勢(shì)。主要出現(xiàn)的部位是果柄、果實(shí)蒂部和中部。

2.3.4 杧果擬莖點(diǎn)霉（PhM） 該菌在PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)，菌落圓形，邊緣整齊，白色薄絨狀，疏松，后期為白色或淺黃色，10～15 d長(zhǎng)出黑色小粒，即分生孢子器，分生孢子器近球形、三角形或不規(guī)則形，質(zhì)硬、黑色，直徑121～689 μm；分生孢子梗分枝，產(chǎn)孢細(xì)胞瓶梗型；分生孢子無色透明、單胞；從形態(tài)上可分為α型分生孢子和β型分生孢子。前者多為近梭形或橢圓形，無色透明，內(nèi)有1～2個(gè)油球，大小5.30～8.23 μm × 1.66～3.45 μm；后者多為線形，有的呈鉤狀，一端彎曲，無色透明，大小15.51～35.64 μm×1.26～2.18 μm（圖版-F）。

將該菌接種到杧果果實(shí)上，48 h出現(xiàn)明顯病斑，不規(guī)則，病健交界明顯，淺褐色至黑褐色，果肉液化、流汁、有酸味。后期全果腐爛，果皮上出現(xiàn)大量初為白色后轉(zhuǎn)淡黃色、最后變?yōu)楹谏男×！?/p>

根據(jù)上述特征，將其鑒定為杧果擬莖點(diǎn)霉（Phomopsis mangiferae Ahmad.） 。

該菌在海南、云南、廣東、廣西和福建的健康杧果上分離獲得，主要出現(xiàn)的部位是果柄、果實(shí)蒂部。

2.3.5 杧果擬盤多毛孢（PeM） 該菌在PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)，菌落圓形，邊緣較整齊，氣生菌絲絮狀，白色，后期菌落為氈狀，其上散生許多黑色油滴狀分生孢子盤；分生孢子橄欖形，有4個(gè)分隔5個(gè)細(xì)胞，中間3個(gè)顏色較深，呈暗褐色，其中上部的細(xì)胞比下面2個(gè)色暗，兩端細(xì)胞無色，隔膜之間稍縊縮，大小19.37～27.96 μm×5.22～6.56 μm；頂部著生2～3根附屬絲，長(zhǎng)13.71～19.26 μm（圖版-G）。

將該菌接種到杧果果實(shí)上，72 h病斑明顯，近圓形，黑褐色，病斑表面長(zhǎng)出白色菌絲，病健交界明顯。

根據(jù)以上特征，將其鑒定為杧果擬盤多毛孢[Pestalotiopsis mangiferae（P. Henn.） Sutton.]。

該菌在6省區(qū)的健康杧果上均分離獲得，主要出現(xiàn)的部位是果實(shí)蒂部。

2.3.6 多米尼加小穴殼（DoD） 在PDA培養(yǎng)基上生長(zhǎng)快，菌落近圓形，平鋪，邊緣不整齊，初期暗灰綠色，后轉(zhuǎn)為灰褐色至黑褐色，基質(zhì)墨綠色至黑色，氣生菌絲短毛絨狀，深灰綠色；約15～20 d 產(chǎn)孢，子座黑色，堅(jiān)硬，近球形；多個(gè)分生孢子器集生于子座中，分生孢子器球形，直徑98～236 μm，孔口明顯，分生孢子單胞、無色，長(zhǎng)梭形，少數(shù)棍棒狀、基部平截，大小14.85～22.16 μm × 3.81～6.26 μm（圖版-H）。

將該菌接種到杧果果實(shí)上，48 h即可導(dǎo)致接種部位組織軟腐，淺褐色，病健交界不明顯，隨后病部顏色加深，其上長(zhǎng)出灰綠色的菌絲體。

根據(jù)以上特征，將其鑒定為多米尼加小穴殼（Dothiorella dominicana Pet. et Cif.）。

該菌在海南、廣東、廣西和四川的健康杧果上分離獲得，主要出現(xiàn)的部位是果實(shí)蒂部。

2.3.7 杧果大莖點(diǎn)霉（MaM） 該菌在PDA培養(yǎng)基上生長(zhǎng)緩慢，菌落黑色，邊緣不規(guī)則，有時(shí)呈瓣?duì)睿z匍匐生長(zhǎng)，且對(duì)培養(yǎng)基有很強(qiáng)的穿透能力，形成基內(nèi)菌絲。基質(zhì)黑色，后期在菌落表面產(chǎn)生大量的黑色顆粒，即病原菌的分生孢子器。分生孢子器球形、近球形，壁薄，黑褐色，未見分生孢子梗，分生孢子無色、單胞、橢圓形或卵圓形，大小5.81～8.76 μm× 10.98～15.33 μm，孢子一端具有一根無色附屬絲，長(zhǎng)4.72～12.85 μm（圖版-I、O、P）。

將該菌接種到杧果果實(shí)上，48 h出現(xiàn)黑色、略凹陷的病斑，病健交界不明顯。

根據(jù)以上特征，將其鑒定為杧果大莖點(diǎn)霉（Macrophoma mangiferae Hing. O.P. Sharma）。

該菌在海南的健康杧果上分離獲得，主要出現(xiàn)的部位是果實(shí)蒂部。

2.3.8 鏈格孢（AlA） 該菌在PDA培養(yǎng)基上菌落生長(zhǎng)速度中等，菌落邊緣整齊，初白色，后轉(zhuǎn)為深灰綠色，邊緣灰白色，后期菌落中部隆起，氣生菌絲短絨狀，分生孢子著生在菌絲的分枝上，單生或成鏈，倒棍棒形、倒卵形或橢圓形，具縱橫隔或只見橫隔膜，大小10.5～42.8 μm × 7.3～27.9 μm，常帶有短喙，喙長(zhǎng)2.5～5.6 μm（圖版-K）。

將該菌接種到杧果果實(shí)上，48 h后接種點(diǎn)變黑，96 h即可在病斑上產(chǎn)生分生孢子。

根據(jù)以上特征，該菌被鑒定為鏈格孢[Alternaria alternata（Fr．） Keissl.]。

該菌在海南、廣東、廣西的健康杧果上分離獲得，主要出現(xiàn)的部位是果柄和果實(shí)蒂部。

2.3.9 曲霉（As） 該菌在PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)，菌落初期白色，后變?yōu)楹诤稚苌谏^狀霉層，菌落邊緣不整齊。菌絲有隔膜和分枝，分生孢子梗壁光滑，近無色或淡褐色，頂部形成球形頂囊，上密生梗基及一排小梗，小梗頂端串生分生孢子，分生孢子球形或近球形，單胞，褐色，大小2.78～3.66 μm（圖版-J）。

將該菌接種到杧果果實(shí)上，72 h病斑明顯，淺褐色至黑褐色，不規(guī)則，密布黑色頭狀的霉層。

根據(jù)以上特征，將其鑒定為曲霉（Aspergillus sp.）。

該菌在海南、廣西、云南的健康杧果上分離獲得，主要出現(xiàn)的部位: 果實(shí)蒂部和端部。

2.3.10 彎孢霉（Cu） 該菌在PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)，菌落初期灰白色，后轉(zhuǎn)為灰綠色至墨綠色，菌絲體呈層狀分布，淺毛絨狀；分生孢子近橢圓形，褐色至暗褐色，3個(gè)隔膜，兩端的細(xì)胞色淡甚至無色，中間兩細(xì)胞膨大，并向一側(cè)彎曲（圖版-L）。

將該菌接種到杧果果實(shí)上，72 h后病斑明顯，淺褐色，隨后病斑上產(chǎn)生墨綠色菌絲，鏡檢時(shí)可見大量的分生孢子。

根據(jù)以上特征，將其鑒定為彎孢霉（Curvularia sp.）。

該菌在海南的健康杧果上分離獲得，主要出現(xiàn)的部位: 果實(shí)蒂部。

2.3.11 鐮刀菌（Fu） 該菌在PDA平板上培養(yǎng)，菌落圓形，氣生菌絲絨毛狀，初期白色，后期變?yōu)闇\土黃色，培養(yǎng)基反面呈淺橙紅色或淺紫色。分生孢子直接產(chǎn)生在菌絲體上，聚生，無色，有些菌株產(chǎn)生小型分生孢子，近圓形，有些菌株產(chǎn)生大型分生孢子，鐮刀形，3～5個(gè)隔膜，有些菌落既產(chǎn)生小型分生孢子又產(chǎn)生大型分生孢子（圖版-M、N）。

將該菌接種到杧果果實(shí)上，72 h后接種部位變淺褐色，病斑擴(kuò)展緩慢。

根據(jù)以上特征，將其鑒定為鐮刀菌（Fusarrium spp.）。

該菌在海南、廣西的健康杧果上分離獲得，主要出現(xiàn)的部位: 果柄與果實(shí)蒂部。

3 討 論

我國(guó)杧果果實(shí)普遍存在真菌的潛伏侵染現(xiàn)象，但不同地區(qū)的帶菌率存在顯著差異。這可能與當(dāng)?shù)氐臍夂驐l件、栽培品種、果園管理水平等有關(guān)。

從杧果果實(shí)不同部位的帶菌率分析，果實(shí)不同部位之間的帶菌率存在極顯著差異，果柄與果實(shí)蒂部的帶菌率極顯著高于果實(shí)中部與端部的帶菌率，該研究結(jié)果與劉秀娟等[6]的研究結(jié)果一致。果實(shí)不同部位帶菌率存在差異可能與杧果果實(shí)在自然條件下的生長(zhǎng)狀態(tài)有關(guān)，果實(shí)懸掛在長(zhǎng)長(zhǎng)的果柄上，病原菌隨露水、雨水由果柄向果蒂、果端流下，且易在果柄、果蒂部位處停留。因此加強(qiáng)果園管理、降低果園濕度，果實(shí)發(fā)育早期噴藥和中后期套袋保護(hù)對(duì)有效預(yù)防杧果果實(shí)病菌潛伏侵染具有重要意義。

劉秀娟等[6]對(duì)海南島的杧果果實(shí)潛伏侵染真菌研究時(shí)，鑒定出膠孢炭疽（C. gloeosporioides）、交鏈孢（Alternaria spp.）、色二孢（Diplodia sp.）、尖孢炭疽（C. acutatum）等9種潛伏侵染真菌；羅遠(yuǎn)嬋等[7]認(rèn)為，多米尼加小穴殼（D. dominicana）、可可球二孢菌（B. theobromae）等10種真菌是杧果蒂腐病的潛伏侵染菌；Johnson等[5]認(rèn)為鏈格孢（A. alternata）、芽枝狀枝孢（C. cladosporioides）等7種真菌從杧果謝花期和著果期開始侵入，在果實(shí)成熟期引起蒂腐病；Akem[16]認(rèn)為膠孢炭疽菌（C. gloeosporioides）是杧果果實(shí)上普遍存在的一種潛伏侵染真菌；而Prusky等[17]認(rèn)為鏈格孢（A. alternate）是以色列杧果果實(shí)上的主要潛伏侵染真菌。本研究共鑒定11種潛伏侵染真菌，分別為膠孢炭疽菌（C. gloeosporioides）、可可球二孢菌（B. theobromae）、尖孢炭疽菌（C. acutatum）、杧果擬莖點(diǎn)霉（P. mangiferae）、杧果擬盤多毛孢（P. mangiferae）、多米尼加小穴殼（D. dominicana）、杧果大莖點(diǎn)霉（M. mangiferae）、鏈格孢（A. alternate）、曲霉（Aspergillus sp.）、彎孢霉（Curvularia sp.）、鐮刀菌（Fusarrium spp.），與已報(bào)道的杧果潛伏侵染真菌比較，杧果大莖點(diǎn)霉（M. mangiferae）為首次報(bào)道的杧果潛伏侵染真菌，但在我國(guó)杧果上未發(fā)現(xiàn)芽枝狀枝孢（C. cladosporioides）等真菌的潛伏侵染，我們進(jìn)行采后病害病原菌研究時(shí)發(fā)現(xiàn)，芽枝狀枝孢（C. cladosporioides）引起杧果采后腐爛，該菌在我國(guó)杧果果實(shí)上是否存在潛伏侵染有待進(jìn)一步研究。（本文圖版見封底）

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