壓縮氣體微生物檢測技術的改進

摘要：為了真實、準確、有效的掌握啤酒灌裝各環(huán)節(jié)壓縮氣體的微生物情況，通過實驗與傳統(tǒng)氣體檢測法——平皿接觸法，和目前所使用的水吸收法進行對比，摸索出一種既簡單又經(jīng)濟的方法——套袖法。平皿接觸法容易受到外部各種環(huán)境的干擾，造成各項微生物指標誤差較大。水吸收法在氣流調節(jié)不穩(wěn)定的情況下，氣體中的微生物有可能不會全部滯留在生理鹽水中，使檢測結果偏低，不能有效的反應出真實情況。套袖法是用一個類似套袖的一端寬一端窄的布袋，套在取樣口上，起到了暫時與外界環(huán)境隔離的作用。使管路中的空氣直接沉降在平皿上，而免受外部環(huán)境的干擾。

關鍵詞：壓縮氣體 套袖法 平皿接觸法 水吸收法

0 引言

啤酒釀造過程中的壓縮氣體是微生物污染的主要途徑之一，通過麥汁充氧、二氧化碳備壓等環(huán)節(jié)可以將部分微生物帶入啤酒之中。因此，必須定期對無菌空氣、氮氣、二氧化碳進行檢查，以提供必要的參考數(shù)據(jù)，減少污染。目前，國家沒有一個統(tǒng)一的壓縮氣體檢測標準，每個啤酒廠只能根據(jù)原理制定檢測方法，但有的很難準確地定量檢測壓縮氣體的含菌量。

我們所接觸過檢測氣體微生物的方法有四種：平皿接觸法、氣體取樣器法、NBB-B吸收富集法、水吸收法。在日常檢測過程中使用的方法分別是平皿接觸法和水吸收法。如何更加真實、準確的反應壓縮空氣的微生物各項指標，有效的檢測方法是至關重要的。通過與目前使用的幾種方法進行實驗對比，我摸索出一種既簡單又經(jīng)濟的方法——套袖法。

1 實驗器材及試劑

1.1 實驗器材：壓縮氣體收集裝置、環(huán)境空氣取樣器、真空抽濾系統(tǒng)、培養(yǎng)皿、自制棉布套袖、無菌過濾膜、厭氧罐、生化培養(yǎng)箱。

1.2 試劑：培養(yǎng)基、0.85%生理鹽水

2 常用壓縮氣體的檢測方法

2.1 平皿接觸法

該法是比較傳統(tǒng)、原始的檢測方法。

實驗步驟：將培養(yǎng)基水浴后于55℃倒入無菌平皿中，倒置幾小時去除表面水分后待用。將氣體取樣口滅菌后調節(jié)氣體流速，置平皿于取樣口下方，讓平板培養(yǎng)基暴露在氣體流中，旋轉使培養(yǎng)基的所有表面與氣體流接觸，氣體均勻沉降于培養(yǎng)基上2分鐘。直接置37℃恒溫培養(yǎng)2天，進行菌落計數(shù)，即為2分鐘氣體含菌量。

2.2 水吸收法

該方法是目前日常工作中正在運用的取樣方法。

實驗步驟：配置0.85%的生理鹽水200ml于取樣瓶中包裹滅菌待用。待氣體取樣口滅菌后調節(jié)氣體流速后，將取樣瓶上方的膠管與取樣閥連接，使氣體通過導管進入0.85%的生理鹽水中，將氣體中的微生物溶于0.85%的生理鹽水中，被洗滌后的空氣通過排氣口排出，時間是2分鐘。在無菌室將洗滌水通過膜過濾的方法，使微生物附著于過濾膜上進行培養(yǎng)。直接置37℃恒溫培養(yǎng)2天，進行菌落計數(shù)，即為2分鐘氣體含菌量。

2.3 套袖法

顧名思義形狀與套袖相似，所不同的是一頭寬一頭窄，平鋪呈梯形。在窄的一端穿上棉線控制其松緊，便于捆綁，它起到與外界環(huán)境隔離的作用。

實驗步驟：在將取樣口滅菌后，將其套住取樣口，窄的一端向上，收緊棉線打結，然后再調節(jié)氣體的流速，流速為培養(yǎng)基剛好不被氣體吹起。置平皿于布袋中一只手（戴無菌手套）在里面拖住平皿旋轉，另一只手在外面隔著布袋打開里面的平皿蓋，時間是2分鐘。直接置37℃恒溫培養(yǎng)2天，進行菌落計數(shù)，即為2分鐘氣體含菌量。

3 結果與討論

3.1 不同檢測方法測結果的對比

3.1.1 以無菌空氣為例（好氧菌）

控制相同的氣體流速，取樣時間相同（2分鐘），用不同的方法對壓縮空氣進行微生物檢測，同時用環(huán)境空氣取樣器（可以設定取樣空氣量）對環(huán)境空氣進行微生物檢測。結果如下表：

3.1.2 以發(fā)酵風包為例（好氧菌、厭氧菌）

3.2 討論

3.2.1 通過比較上圖中的實驗結果，根據(jù)8次數(shù)據(jù)的對比不難看出，好氧菌和厭氧菌的每種檢測數(shù)據(jù)的曲線形態(tài)基本吻合，三種方法的檢測結果趨勢完全吻合。平皿接觸檢測法的結果數(shù)值偏高，與周圍環(huán)境的影響有一定的關系。水吸收檢測法的數(shù)值偏低，是由于微生物沒有完全被滯留在水中，結果都與檢測方法的干擾有關。

3.2.2 由上表可見同一種壓縮氣體，取樣方法不同，檢測結果相差較大。

①平皿接觸法簡單易行，缺點是受環(huán)境影響因素較大，尤其是在細菌容易滋生的潮濕和溫度較高的環(huán)境中，在吹氣中，外界環(huán)境空氣形成很強的氣流，把環(huán)境空氣中的微生同時也帶入平板中，試驗的數(shù)據(jù)會偏高，其中不乏周圍環(huán)境所造成的危害，導致影響實驗結果的真實性。

②水吸收法的前期準備工作比較繁多，對設備的要求高必須是特別制作的。取樣時氣體速度調節(jié)不穩(wěn)定，不是氣體中所有的微生物都會被滯留在水中，試驗的數(shù)據(jù)有可能偏低，不能有效的反應出真實情況。后期需要回到實驗室進行膜過濾培養(yǎng)，成本較高。

③套袖法比平皿接觸法多了一個布袋，在簡單便捷的基礎上又可以使管路中排出的空氣在短時間內與外界的污染環(huán)境相隔離，相對比較封閉。而與水吸收法相比，它省略了前期的殺菌、配置生理鹽水等工作，取而代之的是對套袖進行滅菌，減少空間。

4 結論

4.1 平板接觸法，操作方便、簡單，但受外界環(huán)境空氣影響較大，檢測結果大大偏離實際（除環(huán)境空氣無菌），此方法不可取。

4.2 水吸收法實驗前期準備較復雜，后期處理樣品步驟繁瑣，過程中增加了對樣品的污染的可能，并且實驗成本高。實驗結果存在一定的誤差，不提倡使用。

以上兩種方法均具有其不可取之處，實驗結果均不能合理有效的正確指導生產(chǎn)。

4.3 套袖法比平皿接觸法多了一個布袋，在簡單便捷的基礎上又可以使管路中排出的空氣在短時間內與外界的污染環(huán)境相隔離，相對比較封閉。而與水吸收法相比，它省略了前期的殺菌、配置生理鹽水等工作，取而代之的是對套袖進行滅菌。此方法更能真實的反應出壓縮氣體微生物的真實情況，能夠正確的指導生產(chǎn)，并且節(jié)省滅菌空間、操作簡單又比較經(jīng)濟，達到了數(shù)據(jù)真實有效的目的。是一種比較合理的、符合企業(yè)實際情況的理想檢測方法。

參考文獻：

[1]昆策.啤酒工藝實用技術[M].中國輕工業(yè)出版社.2008年9月.

[2]無錫輕工業(yè)大學、天津青工業(yè)大學聯(lián)合編制.食品微生物學[M].中國輕工業(yè)出版社. 2006年7月.

[3]付金泉等.中國釀酒微生物研究與應用[M].中國輕工業(yè)出版社.2008年5月.

[4]孫黎瓊.幾種壓縮氣體微生物檢測方法的比較[J].啤酒科技.2002年第1期.