汕頭大學醫學院附屬第一醫院耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）耐藥譜分析

劉幸平 彭青

（1.汕頭大學醫學院機能學實驗室，廣東 汕頭 515041；2.汕頭大學醫學院藥理學教研室，廣東 汕頭 515041）

耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）是我國院內感染的重要原因之一，MRSA感染已成為臨床抗感染治療的巨大挑戰［1－2］。MRSA除攜帶編碼PBP2’蛋白的mecA基因外，還可攜帶其他抗生素耐藥基因而造成多重耐藥［3］。本研究就我院第一附屬醫院分離的MRSA進行了耐藥譜分析，以了解該院MRSA的耐藥情況，為臨床合理使用抗生素提供參考。

1 材料與方法

1.1 菌株及試劑

92株金黃色葡萄球菌由汕頭大學醫學院附一醫院檢驗科分離獲得，經法國生物－梅里埃公司VITEK－60AMS全自動微生物分析系統鑒定為MRSA。金葡菌ATCC25923由汕頭大學醫學院附一醫院檢驗科細菌室贈送。

MH瓊脂及肉湯、LB瓊脂及肉湯均購自中國檢驗檢疫科學研究院北京陸橋技術有限責任公司。苯唑西林、頭孢呋辛、頭孢唑啉、頭孢噻肟、多西環素、米諾環素、慶大霉素、利福平、頭孢吡肟、四環素、紅霉素、氯霉素及環丙沙星均購自中國藥品生物制品檢定所。亞胺培南（美國默沙東藥廠）；氨芐西林（山東魯抗醫藥有限公司）；萬古霉素（美國禮來公司）；司帕沙星（上海新先鋒藥業有限公司）。

1.2 方法

最低抑菌濃度測定（MIC）方法參照CLSI2009［4］，采用瓊脂二倍稀釋法用無菌蒸餾水配制各種抗菌藥物原液濃度為5120μg·ml－1，分別取2ml稀釋好的抗菌液，加入一系列內徑為90mm的平板內，再取融化后已在50℃水浴中平衡0.5h的MH瓊脂18ml加進平板內，邊加邊搖晃平板，使藥物和培養基充分混勻，使各抗生素終濃度為0.0312－256μg·ml－1。每個平板接種菌液105cfu·ml－1，將平板置35℃孵育過夜。以完全抑制菌落生長的最低藥物濃度為該藥對檢測菌的MIC。單一菌落生長可忽略不計。

2 結果

不同抗生素對MRSA的MIC值及耐藥率見表1。92株MRSA對于β－內酰胺類抗生素，慶大霉素、大環內酯及喹諾酮類抗生素的耐藥率均在80～90%以上，部分抗生素耐藥率達到100%。對利福平的耐藥率為42.39%，對四環素的耐藥率也高達97.83%，而對人工合成的四環素如多西環素和米諾環素耐藥率較低，分別為5.56%和0%，沒有發現萬古霉素耐藥的金黃色葡萄球菌（VRSA）。

3 討論

耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）從發現至今感染幾乎遍及全球，已成為院內感染的重要病原菌之一。產生低親和力的青霉素結合蛋白PBP2a（由mecA基因編碼）是MRSA對β－內酰胺類抗生素耐藥的主要原因，PBP2a相對分子質量為78 kDa，具有PBPs的轉肽酶活性。當β－內酰胺類抗生素與MRSA接觸后，藥物以共價鍵與PBPs結合，使其失活，此時PBP2a可代替其他4種PBPs完成細胞壁的合成［3］。MRSA還可通過改變抗生素作用靶位，產生修飾酶，降低膜通透性，增加主動外排作用，產生大量PABA等不同機制而對氨基糖苷類、大環內酯類、四環素類、氟喹喏酮類、磺胺類及利福平等產生不同程度的耐藥［5］。

表1 17種抗生素對92株MRSA的MIC值和耐藥率

對當地臨床分離的MRSA耐藥譜進行調查，可為臨床醫生選擇抗菌藥物治療MRSA感染提供參考。本研究結果顯示，本院附一醫院的MRSA耐藥情況比較嚴峻。MRSA對包括亞胺培南在內的所有β－內酰胺類抗生素均已產生耐藥，92株MRSA對實驗中所有β－內酰胺類抗生素的耐藥率均在80%以上，有的甚至高達100%。絕大部分菌株對氨基糖苷類、大環內酯類、氟喹諾酮類也不敏感。但值得注意的是，超過半數的MRSA菌株對利福平保持敏感，對氯霉素，多西環素及米諾環素也普遍敏感，未發現耐萬古霉素的MRSA菌株。該結果與文獻報道的MRSA耐藥譜基本相符［6－7］。雖然 MRSA對大多數抗生素耐藥，但萬古霉素仍是MRSA的首選用藥。而半合成的四環素類，如多西環素及米諾環素對MRSA仍然具有良好的抗菌活性，可考慮用于臨床MRSA的抗感染治療。

綜上所述，我院第一附屬醫院的MRSA呈多重耐藥，但對氯霉素，半合成四環素及萬古霉素仍然敏感。本研究對臨床治療MRSA感染具有一定的指導意義。

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