青錢柳地上部分的化學成分研究*

何 艷 ，殷志琦 **，張 健 ，葉文才 ，3，方升佐

1中國藥科大學 天然藥物化學教研室，南京 210009；2江蘇省中醫藥研究院 轉化醫學實驗室，南京 210028；3暨南大學 中藥及天然藥物研究所，廣州 510632；4南京林業大學 森林資源與環境學院，南京 210037

青錢柳 Cyclocarya paliurus（Batal.） ljinskaja.又名青錢李（江西）、山麻柳（四川）、甜茶樹（貴州）、一串錢（湖北），是胡桃科（Juglandaceae）青錢柳屬植物（見圖1）。它是我國獨有的單種屬植物，是國家重點保護的瀕危植物之一[1]。據《中國中藥資源志要》記載[2]，其樹皮、樹葉具有清熱、解毒、止痛功效，可用于治療頑癬。其葉甘甜滋潤，能生津止渴、清熱解暑，被當地老百姓稱為“甜茶”、“神茶”[3]，用于治療糖尿病、高血壓、冠心病、神經衰弱等。青錢柳的化學成分研究始于20世紀80年代中期，主要含有三萜皂苷、黃酮、甾體、萜類、有機酸、生物堿等成分[4]。本課題組對青錢柳化學成分進行了研究，從中分離鑒定14個化合物（見圖2）；化合物2、3、5和8為首次從青錢柳屬中分離得到。

圖1 青錢柳樹照片

圖2 化合物1～14的化學結構

1 儀器與試劑

X-4熔點測定儀（溫度計未校正）；Bruker AV-500和AV-300型核磁共振儀；Agilent 1100 Series LC/MSD Trap質譜儀。

柱色譜硅膠（青島海洋化工廠）和薄層色譜硅膠 GF254（煙臺化工研究所）；Sephadex LH-20（美國Pharmacia公司）；所用試劑均為市售分析純。

青錢柳藥材為2009年6月采集于鎮江揚子江林業科技有限公司苗圃，經中國藥科大學生藥教研室秦民堅教授鑒定為青錢柳Cyclocarya paliurus（Batal）ljinskaja.的地上部分，標本保存于中國藥科大學天然藥物化學教研室。

2 提取與分離

干燥的青錢柳莖及葉35 kg，80%乙醇加熱回流提取3次，每次2 h，提取液減壓濃縮至無醇味，加水稀釋后依次用氯仿、乙酸乙酯及正丁醇萃取。

乙酸乙酯萃取部位（423 g）經硅膠柱色譜，以氯仿-甲醇梯度洗脫 （100∶5→100∶100），TLC 檢識，合并得到8個流份（Fr.1～8）。Fr.2經Sephadex LH-20柱色譜以純甲醇為洗脫劑純化，結合重結晶得化合物 1（0.85 g）和 11（300 mg）。Fr.4 經硅膠柱色譜以氯仿-甲醇（100∶8→100∶100）梯度洗脫，Sephadex LH-20柱色譜以純甲醇為洗脫劑粗分，再通過ODS柱色譜以甲醇-水梯度洗脫（100∶10→100∶0），結合重結晶得化合物 2（2.4 g）、3（30 mg）、4（0.6 g）和 12（1.6 g）。

氯仿萃取部位（268 g）經硅膠柱色譜，以氯仿-甲醇梯度洗脫（100∶1→100∶100），TLC 檢識，合并得到8個流份（Fr.1～8）。Fr.3經硅膠柱色譜以石油醚-乙酸乙酯（10∶1→1∶2）梯度洗脫，經反復硅膠柱層析，結合重結晶得化合物13（500 mg）。Fr.5經硅膠柱色譜以氯仿-甲醇（100∶1→100∶100）梯度洗脫，經反復硅膠柱層析及ODS柱色譜，得化合物6（20 mg）和 10（5 mg）。Fr.6經硅膠柱色譜以氯仿-甲醇（100∶5→100∶100）梯度洗脫，經反復硅膠柱層析及ODS柱色譜，最后通過HPLC制備得化合物7（6 mg）、8（10 mg）和 9（15 mg）。Fr.7 經硅膠柱色譜以氯仿-甲醇（100∶10→100∶100）梯度洗脫，合并得到 8個流份A～G餾分，餾分D經ODS柱色譜以甲醇-水梯度洗脫 （100∶75→100∶0）， 經反復硅膠柱層析及ODS 柱色譜，得化合物 5（5 mg）和 14（700 mg）。

3 結構鑒定

化合物 1、4、6、7、9、10、11、12、13、14 與文獻比較，數據基本一致，分別鑒定為山柰酚（kaempferol）[5]、山柰酚-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（kaempferol-3-O-β-D-glucopyranoside）[6]、青錢柳酸 B（cyclocaric acid B）[7]、阿江欖仁酸（arjunolic acid）[8]、2α-羥基烏蘇酸（2αhydroxyursolic acid）[7]、齊墩果酸（oleanic acid）、槲皮素（quercetin）、異槲皮苷（isoquercitrin）、β-谷甾醇（β-sitosterol）、胡蘿卜苷（daucosterol）。

化合物2 淡黃色粉末（甲醇），mp 246～248℃，鹽酸-鎂粉反應和Molish反應均呈陽性。ESI-MS（m/z）：433[M+H]+， 分子式為 C21H20O10。1H-NMR（DMSO-d6，300 MHz） δ：12.62（1H，s，5-OH），10.95（1H，s，7-OH），10.22（1H，s，4′-OH），7.75（1H，d，J=8.7 Hz，H-2′，6′），6.95 （1H，d，J=8.7 Hz，H-3′，5′），6.41 （1H，d，J=2.0 Hz，H-8），6.21 （1H，d，J=2.0 Hz，H-6），5.29 （1H，s，Rha-1），0.79 （3H，d，J=5.6 Hz，CH3）。13C-NMR（DMSO-d6，75 MHz） δ：177.7（C-4），164.2（C-7），161.2（C-5），159.9（C-4′）），157.2（C-9），156.5（C-2），134.2（C-3），130.6（C-2′，6′），120.5（C-1′），115.4（C-3′，5′），104.1（C-10），101.8（C-1′′），98.7（C-6），93.7（C-8），71.1（C-4′′），70.5（C-3′′），70.3（C-2′′），70.0（C-5′′），17.4（C-6′′）。與文獻[9]比較，鑒定化合物2為山柰酚-3-O-α-L-吡喃鼠李糖苷（kaempferol-3-O-α-L-rhamnopyranoside）。

化合物3 淡黃色粉末（甲醇），mp 231～233℃，鹽酸-鎂粉反應和Molish反應均呈陽性。ESI-MS（m/z）：447[M-H]－， 分子式為 C21H20O11。1H-NMR（DMSO-d6，300 MHz） δ：12.62（1H，s，5-OH），10.82（1H，s，7-OH），10.18（1H，s，4′-OH），8.06（2H，d，J=8.9 Hz，H-2′，6′），6.87 （2H，d，J=8.9 Hz，H-3′，5′），6.43 （1H，d，J=2.0 Hz，H-8），6.20 （1H，d，J=2.0 Hz，H-6），5.40 （1H，d，J=7.6 Hz，H-1′′of Gal）。13CNMR（DMSO-d6，75 MHz） δ：177.5（C-4），164.2（C-7），161.2 （C-5），159.8 （C-4′），156.4 （C-9），156.3（C-2），133.2（C-3），130.9（C-2′，6′），120.9（C-1′），115.1 （C-3′，5′，103.8 （C-10），101.7 （C-1′′），98.7（C-6），93.7（C-8），75.8（C-5′′），73.1（C-3′′），71.2（C-2′′），67.9（C-4′′），60.2（C-6′′）。 與文獻[10]比較，鑒定化合物3為山柰酚-3-O-β-D-吡喃半乳糖苷（kaempferol-3-O-β-D-galactopyranoside）。

化合物5 淡黃色粉末（甲醇），mp 246～248℃，鹽酸-鎂粉反應和Molish反應均呈陽性。ESI-MS（m/z）：577[M-H]－， 分 子 式 C30H26O12。1H-NMR（DMSO-d6，300 MHz） δ：12.58（1H，s，5-OH），10.19（1H，s，7-OH），δ 7.75 （2H，d，J=8.7 Hz，H-2′，6′）、7.58 （2H，d，J=8.7 Hz，H-5′′′,9′′′）、7.48 （2H，d，J=15.9 Hz，H-3′′′）、7.00 （2H，d，J=8.7 Hz，H-3′，5′）、6.82（2H，d，J=8.6 Hz，H-6′′′，8′′′），6.43（1H，d，J=2.0 Hz，H-8），6.28（2H，d，J=15.9 Hz，H-2′′′），6.23（1H，d，J=2.0 Hz，H-6），5.39 （1H，d，J=1.1 Hz，Rha-1），0.69（3H，d，J=6.2 Hz，Rha-CH3）。13C-NMR（DMSO-d6，75 MHz） δ：177.6 （C-4），166.0 （C-1′′′），164.4（C-7），161.3（C-5），160.2（C-7′′′），159.9（C-4′）），157.6（C-9），156.6（C-2），144.7（C-3′′），133.7（C-3），130.7（C-2′，6′），130.4（C-5′′，9′′′），125.1（C-4′′′），120.4（C-1′），115.6（C-3′，5′），115.3（C-6′′′，8′′′），114.3 （C-2′′′），104.2 （C-10），101.1 （C-1′′），98.8（C-6），93.8（C-8），72.9（C-4′′），70.0（C-2′′），68.0（C-3′′），67.9（C-5′′），17.1（C-6′′）。 與文獻[11]比較，鑒定化合物 5 為山柰酚-3-O-α-L-（4′′-E-p-香豆酰基）吡喃鼠李糖苷[kaempferol-3-O-α-L-（4′′-E-p-coumaroyl）-rhamnopyranoside]。

化合物8 白色無定形粉末 （甲醇），mp 300～304℃，Liebermman-Burchard反應陽性，硫酸香草醛顯藍紫色。 ESI-MS（m/z）：487[M-H]－，分子式為C30H48O5。1H-NMR （C5D5N，300 MHz） δ：5.48（1H，br s，H-12），4.23（3H，m，H-2、23），3.74（1H，d，J=10.5 Hz，H-3），2.63 （1H，d，J=11.2 Hz，H-18），1.16、1.09×3 （each 3H，s，Me-24、25、26、27），0.98（3H，d，J=6.4 Hz，H-29），0.94 （3H，d，J=6.0 Hz，H-30）。13C-NMR（C5D5N，75 MHz） δ：180.2（C-28），139.9 （C-13），126.0 （C-12），78.7（C-3），69.4 （C-2），67.1（C-23），54.1（C-18），48.6（C-1，17），48.4（C-5，9），44.1（C-14），43.1（C-4），40.6（C-8），40.0（C-19），39.9 （C-20），38.8 （C-10），37.9 （C-22），33.7（C-7），31.6（C-21），29.2（C-15），25.4（C-16），24.4 （C-29），24.4 （C-27），24.3 （C-11），21.9 （C-30），19.0（C-6），18.0（C-25），17.9（C-26），14.8（C-24）。 與文獻[12]比較，鑒定化合物 8 為 2α，3β，23-三羥基-12-烯-28-烏蘇酸 （2α，3β，23-trihydroxy-12-ene-28-ursolic acid）。

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