高效液相色譜法同時測定復方氨氯地平片中苯磺酸氨氯地平和賴諾普利的含量

相文杰 ，葉 靖 ，田志杰 ，韓 潔 ，姚 靜

1南京瑞爾醫藥有限公司，南京 210061；2南京澤恒醫藥技術開發有限公司，南京 210028；3中國藥科大學藥劑教研室，南京 210009

苯磺酸氨氯地平是二氫吡啶類鈣拮抗劑（鈣離子拮抗劑或慢通道阻滯劑），對血管平滑肌具有明顯的舒張作用，且具有抗動脈粥樣硬化作用。賴諾普利是新一代血管緊張素轉換酶抑制劑，主要通過抑制腎素－血管緊張素－醛固酮系統降低血壓，同時亦對低腎素性高血壓有降壓作用。復方氨氯地平片是結合氨氯地平和賴諾普利降壓優勢的新型治療高血壓復方藥物。本文采用高效液相色譜法同時測定兩組分含量，具有快速、準確的優點。

1 材 料

1.1 儀器

戴安Ultimate3000高效液相（包含：Ultimate3000 Pump，Ultimate3000 Autosampler，Ultimate3000 column compartment，Ultimate3000 Various Wavelength Dectector）， 變色龍工作站；pH 計 （Sartorius，PB-10）；電子天平（Sartorius，BSA2245）。

1.2 試藥

復方氨氯地平片（賴諾普利10 mg/片，氨氯地平 5 mg/片，批號：110905、110906、110907，南京瑞爾醫藥有限公司）；苯磺酸氨氯地平對照品（批號：171215－201109，中國藥品生物制品檢定所）；鹽酸賴諾普利對照品（批號：100113－201103，中國藥品生物制品檢定所）；甲醇、乙腈為色譜純；磷酸二氫鈉為分析純；水為重蒸水（自制）。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：賽分 C18柱（6 mm×250 mm，5 μm）；柱溫:50℃；檢測波長:210 nm；流速:1.8 mL·min-1；進樣量：20 μL。 流動相:A 相:乙腈-0.05 mol·L－1磷酸二氫鈉（pH 5.0）=3∶97；B 相：乙腈-0.05 mol·L－1磷酸二氫鈉（pH 5.0）=40∶60；進行梯度洗脫:A 相 1～17.5 min從 100%～85%，17.5～20 min從 85%～100%。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液取賴諾普利對照品21.76 mg，苯磺酸氨氯地平對照品13.86 mg，用流動相B溶解稀釋、定容至100 mL，制備成含賴諾普利0.2 mg·mL－1和氨氯地平 0.1 mg·mL－1的溶液， 作為對照品儲備溶液[1]。

2.2.2 供試品溶液取樣品20片，研細，精密稱取200 mg（相當于賴諾普利無水物10 mg、氨氯地平5 mg），置50 mL量瓶中，用流動相B定容至刻度，振搖5 min，搖勻濾過，取續濾液，即得。

2.3 系統適用性

分別取空白溶劑，氨氯地平和賴諾普利對照品溶液，樣品溶液注入高效液相色譜儀，繪制色譜圖，結果見圖1。空白溶劑不干擾氨氯地平和賴諾普利的測定。

圖1 空白溶劑、樣品和對照品的色譜圖

2.4 耐用性考察

取同一份供試品溶液分別考察柱溫變化（±5℃）、檢測波長變化（±5 nm）、流速變化（±0.1 mL·min-1）、流動相pH變化（±0.2），計算苯磺酸氨氯地平和賴諾普利含量的變化。結果見圖2～5，可見流速和柱溫對賴諾普利的色譜行為有較大影響，在各條件下的苯磺酸氨氯地平和賴諾普利的含量為100.3%±2.31%和99.5%±1.72%，這說明本方法具有一定的耐用性。

圖2 柱溫對色譜行為的影響

圖3 檢測波長對色譜行為的影響

圖4 流速對色譜行為的影響

圖5 流動相pH對色譜行為的影響

2.5 標準曲線制備

精密取苯磺酸氨氯地平和賴諾普利對照品儲備液 0.2、0.4、0.8、1.2、2、3、4 mL 分別置 10 mL 量瓶中，用流動相B稀釋至刻度。分別進樣20 μL測定，以濃度（X，mg·mL-1）為橫坐標，相應的峰面積（Y）為縱坐標，苯磺酸氨氯地平和賴諾普利回歸方程分別為：Y=20.40X-0.1036 （r2=0.9999）；Y=38.17X+4.470（r2=0.9996）；兩種藥物的線性均良好。

2.6 重復性試驗

取同一批樣品的細粉適量，依法測定6次，考察方法重復性。結果苯磺酸氨氯地平和賴諾普利的含量分別為106.6%±0.6%和99.6%±0.17%，表明重復性良好。

2.7 精密度試驗

分別精密量取苯磺酸氨氯地平、賴諾普利的對照品儲備液1 mL，置10 mL量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，連續進樣6次，每次進樣20 μL。記錄峰面積，苯磺酸氨氯地平和賴諾普利的RSD分別為0.87%和0.23%。表明進樣體積與儀器檢測精密度良好。

2.8 回收率試驗

在一定量的空白輔料的樣品中，精密加入對照品適量，混勻，制成低、中、高3個濃度的供試溶液，進樣測定，計算回收率。苯磺酸氨氯地平和賴諾普利平均回收率分別為100.8%±0.7%和 101.4%±0.6%（n=9）。

2.9 供試液的穩定性

供試品溶液置室溫放置 10 h， 在 0、2、4、6、8、10 h時分別測定含量，記錄峰面積，供試品溶液在10 h內基本穩定，苯磺酸氨氯地平的RSD為0.83%，鹽酸賴諾普利的RSD為1.48%，均小于2.0%。

2.10 含量測定

取3批復方苯磺酸氨氯地平片，依法測定，記錄色譜圖，按外標法計算3批不同產品的2個組分的含量。結果見表1。3批樣品氨氯地平和賴諾普利的含量均符合要求。

表1 3批復方苯磺酸氨氯地平片的含量測定結果

3 討 論

3.1 氨氯地平為水難溶性藥物，賴諾普利為易溶于水的藥物，兩者在大多數流動相中的色譜行為差異很大，一般都采用分別測定含量的方法[2-3]。等度洗脫很難在較短時間內對其分離測定，本方采用梯度洗脫對其同時測定。

3.2 通過改變柱溫、檢測波長、流速和流動相pH，對本方法的耐用性進行驗證，可以看出流速和柱溫對賴諾普利的色譜行為有較大影響；氨氯地平在色譜條件有微小的變化，其峰形和保留時間無明顯變化。通過在不同條件下外標法計算含量，苯磺酸氨氯地平和賴諾普利的含量測定的RSD均小于2%。表明本方法具有一定的耐用性。

3.3 采用甲醇、流動相A和B對樣品中的藥物進行提取試驗，結果顯示，以流動相B為溶劑對兩種藥物的提取回收率均大于98%，且處理方法簡單，明顯優于甲醇和流動相A。

[1] 賴 可，晁若冰，李 楠，等.測定復方苯磺酸氨氯地平膠囊的含量[J]. 華西藥學雜志，2010，25（6）：748-9.

[2] 丁逸梅，杜 云.RP－HPLC法控制復方賴諾普利片質量方法研究[J]. 江蘇藥學與臨床研究，2004，12（4）：9-11.

[3] Beasley CA,Shaw J,Zhao Z,et al.Development and validation of a stability indicating HPLC method for determination of lisinopril,lisinopril degradation product and parabens in the lisinopril extemporaneous formulation[J].J Pharm Biomed Anal,2005,37(3):559-67.