HPLC法測定頭孢唑肟鈉氯化鈉即配型輸液中頭孢唑肟的含量

李金菊， 朱 平，， 原慶泓， (山西天星制藥有限公司化驗室， 太原 03003;山西華元醫藥集團;通訊作者，E-mail:zp836@sohu.com)

頭孢唑肟鈉氯化鈉即配型輸液是依據中國專利注射劑組合［1］研制而成的組合式即配型輸液，是將注射用頭孢唑肟鈉(規格:1.0 g，按頭孢唑肟計)，與氯化鈉注射液(軟袋裝，規格 100 ml∶0.9 g)、無菌輸液加藥器三者相容性試驗符合要求后，組合在一起而成。臨床靜脈滴注時，將頭孢唑肟鈉氯化鈉即配型輸液中的注射用頭孢唑肟鈉與氯化鈉注射液，用無菌輸液加藥器連通，使注射用頭孢唑肟鈉溶解于氯化鈉注射液中，配制成可供靜脈滴注的溶液。該溶液符合臨床用藥濃度、合理用藥要求和對藥液的質量要求，減少了常規配制過程中的二次污染。

本文參考中國藥典2010版收載的頭孢唑肟鈉含量測定方法，參考有關藥物研究的指導原則和文獻［2－4］，研究建立了將頭孢唑肟鈉氯化鈉即配型輸液配制成可供靜脈滴注的溶液后，高效液相色譜法(high performance liquid chromatography，HPLC)測定該溶液中頭孢唑肟含量的方法。

1 材料與儀器

1.1 材料 頭孢唑肟鈉氯化鈉即配型輸液(注射用頭孢唑肟鈉 1.0 g、氯化鈉注射液 100 ml∶0.9 g、無菌輸液加藥器 1只，批號:110301、110302、110303，自制)，頭孢唑肟對照品(含量 98.1%，批號:130504－200701，中國藥品生物制品檢定所);水(超純水)，乙腈(色譜純)，磷酸氫二鈉、枸櫞酸、磷酸二氫鉀(均為分析純)。

1.2 儀器 島津高效液相色譜儀:LC-10ATVP泵、SPD-10A VP紫外檢測器(島津儀器蘇州有限公司);N2000色譜工作站(浙江大學智能信息工程有限公司)。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 色譜柱:依利特 SinoChrom ODSBP C18柱(4.6 mm ×200 mm，5 μm)，流動相:pH 3.6緩沖液(取枸櫞酸1.42 g、磷酸氫二鈉 2.31 g，加水溶解并稀釋至1 000 ml)－乙腈(9∶1);流速:1.0 ml/min;進樣量:20 μl;檢測波長:254 nm;柱溫:25℃。

2.2 溶液的配制 取磷酸二氫鉀3.63 g、磷酸氫二鈉14.33 g，加水溶解并稀釋至1 000 ml，作為 pH 7.0磷酸鹽緩沖液;取頭孢唑肟鈉氯化鈉即配型輸液，配制成可供靜脈滴注的溶液，精密量取2 ml，置200 ml量瓶中，加pH 7.0磷酸鹽緩沖液，稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液;取頭孢唑肟鈉氯化鈉即配型輸液中氯化鈉注射液，精密量取2 ml，同法制成不含頭孢唑肟的溶液，作為空白溶液;取頭孢唑肟對照品適量，精密稱定，加pH 7.0磷酸鹽緩沖液，制成每1 ml中約含0.1 mg頭孢唑肟的溶液，作為對照品溶液。

2.3 系統適用性試驗 稱取頭孢唑肟對照品5 mg，置10 ml量瓶中，加0.1 mol/L氫氧化鈉溶液1 ml，放置30 min，用pH 7.0磷酸鹽緩沖液稀釋至刻度，搖勻;取20 μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，頭孢唑肟峰與其相對保留時間約0.8處堿降解物峰的分離度應不小于3.0，見圖1。

圖1 系統適用性試驗Fig 1 The system suitability test

2.4 空白試驗 取空白溶液20 μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結果表明，空白試驗無干擾，具有專屬性，見圖2。

圖2 空白試驗Fig 2 The blank test

2.5 線性相關性試驗 取頭孢唑肟對照品約20 mg，精密稱定，置100 ml量瓶中，加 pH 7.0磷酸鹽緩沖液稀釋至刻度，搖勻;分別精密量取3.0，4.0，5.0，6.0，7.0 ml，分別置10 ml量瓶中，加 pH 7.0 磷酸鹽緩沖液稀釋至刻度，搖勻，制成 60.04，80.05，100.05，120.07，140.09 μg/ml的溶液。精密量取上述溶液各20 μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。見表1。

表1 線性相關性試驗結果Tab 1 Results of linear correlation analysis

以頭孢唑肟對照品峰面積A為縱坐標(Y)，以濃度c為橫坐標(X)，按最小二乘法進行線性回歸，得回歸方程為Y=20 920X+31 143(r=0.999 9)。

結果表明，頭孢唑肟在 60.04 －140.09 μg/ml濃度范圍內，峰面積與濃度線性關系良好，見圖3。

圖3 頭孢唑肟標準曲線圖Fig 3 The calibration curve of ceftizoxime

2.6 精密度試驗 照2.2項下的方法配制成對照品溶液，精密量取20 μl，注入液相色譜儀，重復6次，分別記錄色譜圖，計算RSD。結果表明，精密度良好，見表2。

表2 精密度試驗結果Tab 2 Results of precision test

2.7 重復性試驗 取頭孢唑肟鈉氯化鈉即配型輸液，配制成可供靜脈滴注的溶液，精密量取6份，每份2 ml，分別照2.2項下的方法配制成供試品溶液;再照2.2項下的方法配制對照品溶液，按外標法測定每份供試品溶液中頭孢唑肟的含量，計算RSD。結果表明，本測定方法重復性良好，見表3。

表3 重復性試驗結果 (%)Tab 3 Results of repeatability test (%)

2.8 回收率試驗 取頭孢唑肟鈉氯化鈉即配型輸液中注射用頭孢唑肟鈉16，20，24 mg各3份，精密稱定，分別置200 ml量瓶中，各加頭孢唑肟鈉氯化鈉即配型輸液中氯化鈉注射液2 ml溶解，再分別加pH 7.0磷酸鹽緩沖液稀釋至刻度，搖勻，分別精密量取上述溶液各20 μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。照2.2項下的方法配制頭孢唑肟對照品溶液，精密量取20 μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。按外標法計算含量，計算回收率、平均回收率、RSD。結果表明，本測定方法回收率良好，見表4。

表4 回收率試驗結果Tab 4 Results of recovery test

2.9 穩定性試驗 取頭孢唑肟鈉氯化鈉即配型輸液，配制成可供靜脈滴注的溶液，按2.2項下的方法，配制成供試品溶液，室溫放置，于 0，2，4，6，8，10 h分別精密量取20 μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，計算RSD。結果表明，室溫下，供試品溶液在10 h內穩定性良好，見表5。

表5 穩定性試驗結果Tab 5 Results of stability test

2.10 樣品含量測定 取頭孢唑肟對照品、樣品，按2.2項下的方法，配制對照品溶液和供試品溶液。精密量取對照品溶液、供試品溶液各20 μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標法計算，得頭孢唑肟鈉氯化鈉即配型輸液配制成可供靜脈滴注的溶液后，該溶液中頭孢唑肟的含量，見表6。

表6 樣品含量測定結果 (%)Tab 6 Results of sample assay (%)

3 討論

本文研究的是組合的即配型輸液中活性成分的含量測定方法，目前還沒有這方面的文獻報道。頭孢唑肟鈉氯化鈉即配型輸液中頭孢唑肟的含量，指的是將頭孢唑肟鈉氯化鈉即配型輸液配制成可供靜脈滴注的溶液后，該溶液中頭孢唑肟的含量。

系統適用性試驗采用的是主成分經堿破壞后的試驗，重點考察主成分頭孢唑肟經堿破壞后，頭孢唑肟峰與其堿降解物峰的分離度?？瞻自囼炆V圖中所出現的峰，是pH 7.0磷酸鹽緩沖液所產生的峰，對本文研究建立的測定方法沒有影響。

本文研究建立的HPLC測定法，主成分峰分離度好、空白無干擾，線性關系、精密度、重復性良好，測定溶液穩定，回收率高，既可用于頭孢唑肟鈉氯化鈉即配型輸液組合前相容性試驗中的頭孢唑肟含量測定，又可用于組合后成品檢驗中的頭孢唑肟含量測定。

［1］ 山西天星制藥有限公司.注射劑組合［P］.中國:ZL 200720138312.4，2008 －09 －24.

［2］ 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典，二部［S］.2010年版.北京:中國醫藥科技出版社，2010:204－205，附錄194－附錄195.

［3］ 山西天星制藥有限公司提出，國家食品藥品監督管理局發布.國家食品藥品監督管理局標準:注射用頭孢唑肟鈉，YBH21882005［S］.

［4］ 朱平，李娜，原慶泓.高效液相色譜法測定氟羅沙星葡萄糖注射液中氟羅沙星的含量［J］.山西醫科大學學報，2008，39(2):152－154.