中性粒細胞堿性磷酸酶活性與系統性紅斑狼瘡病情活動的研究

孫明麗，陳美璞，王艷軍

(山東聊城第二人民醫院 1血液科，2風濕科，山東 聊城 252601)

中性粒細胞堿性磷酸酶活性與系統性紅斑狼瘡病情活動的研究

孫明麗1※，陳美璞2，王艷軍1

(山東聊城第二人民醫院1血液科，2風濕科，山東 聊城 252601)

目的探討系統性紅斑狼瘡(SLE)患者的中性粒細胞堿性磷酸酶活性與病情活動的關系。方法100例SLE患者根據SLE疾病活動指數計分按病情分為穩定組、輕度活動組、中度活動組及重度活動組，采用AS-BI法對外周血涂片進行中性粒細胞堿性磷酸酶(NAP)染色，觀察NAP陽性率及陽性積分，并與對照組進行比較。結果穩定組與對照組比較差異無統計學意義(P＞0.05)，但輕度活動組、中度活動組、重度活動組顯著低于對照組，差異有統計學意義(P＜0.01)。輕度活動組NAP陽性率及陽性積分低于穩定組，高于中度活動組及重度活動組，差異有統計學意義(P＜0.01)。中度活動組與重度活動組比較，差異無統計學意義(P＞0.05)。SLE各組總體與對照組相比NAP陽性率、陽性積分均有統計學意義(P＜0.01)。結論NAP活性可反映SLE患者病情活動的程度，是評定治療反應與效果的重要參考指標之一。

紅斑狼瘡;系統性;中性粒細胞堿性磷酸酶;病情活動

系統性紅斑狼瘡(systemic lupus erythematosus，SLE)是一種以過量產生多種自身抗體和多器官受累為特征的自身免疫性疾病。SLE患者血液系統常受累，可伴發白細胞減少。對粒細胞功能的研究發現，SLE患者不僅粒細胞數目降低，粒細胞的吞噬和調理功能也異常［1］。中性粒細胞堿性磷酸酶的活性與粒細胞吞噬功能有關。本研究對2003年1月至2009年12月我院就診的SLE患者，根據SLE疾病活動指數進行分組，并對各組患者中性粒細胞堿性磷酸酶(neutyophil alkaline phosphatase，NAP)活性進行分析研究，旨在探討NAP活性在SLE發生中的意義及與疾病活動性的關系，為SLE的臨床診治提供一種新的參考指標。

1 資料與方法

1.1 一般資料 我院自2003年起對確診為SLE并納入NAP檢測初步研究階段的患者進行跟蹤，資料完整的SLE患者共計100例次納入研究，其中，女87 例次，男13 例次，年齡(29.76 ±9.20)歲。所有病例符合美國風濕病學會(ACR)1997年修正的SLE分類診斷標準［2-3］。疾病活動度判斷根據SLE 疾病活動指數計分法［4］，參照 Gladman 等［5］制訂的標準判斷：0～4分為基本無活動;5～9分為輕度活動;10～14分為中度活動，≥15分為重度活動。對照組為2005年我院健康查體者30例，年齡(28.2±8.6)歲。

1.2 方法

1.2.1 病例分組 根據SLE疾病活動指數計分，按病情把這些病例分為4組：穩定組、輕度活動組、中度活動組及重度活動組。所有病例均于確診當日采新鮮血涂片行中性粒細胞堿性磷酸酶檢測。中性粒細胞堿性磷酸酶檢測采用AS-BI法染色。患者每2周門診復診一次，除常規檢查狼瘡活動性指標外，均常規檢查NAP陽性率及陽性積分，同時記錄有無感染經過及用藥情況。對照組為2005年我院健康查體者30例。

將上述病例資料分類輸入SPSS 11.5版本軟件中并建立數據庫。從中性粒細胞堿性磷酸酶積分及血常規相關項水平來分析總結各組中性粒細胞堿性磷酸酶積分及血常規的變化特點。

1.2.2 治療方法 確診后的患者均首先應用糖皮質激素治療，根據病情特點分別選用靜脈或口服。患者病情較嚴重或口服藥物有禁忌者選用靜脈方案：甲潑尼龍40～80 mg，1次/d，靜脈滴注;危重患者甚至應用500 mg/d，靜脈滴注沖擊治療;一般患者門診口服潑尼松，15～60 mg，1次/d。同時根據病情需要應用免疫抑制劑環磷酰胺、硫唑嘌呤、硫酸羥基氯奎、來氟米特、嗎替麥考酚酯、環孢素等，治療過程中根據患者情況給予補鈣，保護胃黏膜及其他對癥處理的藥物。所有患者無論住院或門診詳細記錄病情及有無感染史。

1.2.3 觀察指標以NAP陽性率與NAP陽性積分作為NAP活性的觀察指標 實驗操作均在本院血液實驗室由同一人按照本室質控標準進行標本取材、染色、閱片，每例標本均取3張以上血涂片，選取材、涂片、染色良好者統計算分。觀察組與對照組均采用新鮮血涂片，采用AS-BI法［6-7］染色。每例標本染色時采用細菌性感染患者的新鮮血涂片作對照，對照血片染色呈強陽性時，認為觀察標本染色無誤差。NAP陽性率(%)：計數100個成熟中性粒細胞(包括中性桿狀核細胞)，記錄呈陽性反應的細胞數。陽性反應為胞質中可見藍色顆粒。陽性反應強度分級標準見表1。

表1 NAP陽性反應強度分級標準

1.3 統計方法 采用SPSS 11.5統計軟件對數據進行分析。計量資料以均值±標準差(±s)表示，采用F檢驗，各組間比較采用LSD-t檢驗，P＜0.01為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 各調查組間NAP陽性率及陽性積分的比較SLE各組總體與對照組相比NAP陽性率、陽性積分均有統計學意義(P＜0.01)(表2)。

表2 病情活動組與對照組間NAP陽性率及陽性積分的比較

2.2 各組間NAP陽性率及陽性積分比較 各組間NAP陽性率及陽性積分比較均有統計學意義。穩定組與對照組比較無統計學意義，輕度活動組、中度活動組、重度活動組顯著低于對照組，有統計學意義。輕度活動組NAP陽性率及陽性積分低于穩定組，高于中度活動組及重度活動組，有統計學意義。中度活動組與重度活動組比較無統計學意義(表3、表4)。

表3 各組NAP陽性率的兩兩比較

表4 各組NAP陽性積分的兩兩比較

3 討論

NAP存在于成熟的中性粒細胞的胞質中，其活性與白細胞總數無關，與細胞的成熟程度有關。關于NAP的調節，目前尚不十分明了。本研究通過總結文獻及臨床觀察，認為有以下幾點可以證實NAP活性與粒細胞吞噬功能有關：①電鏡下發現中性粒細胞的胞質中存在一種區室，而NAP只存在于粒細胞的這種區室的膜上，是其膜標志，同時發現這種區室代表了中性粒細胞的吞噬泡的特征［8］，可以說區室是中性粒細胞吞噬功能的基本單位，NAP可能是這種吞噬功能的基本成分。②眾所周知，中性粒細胞越成熟，其吞噬功能越強，同時，研究證明，中性粒細胞越成熟，NAP活性越高，間接證明以上觀點。③文獻表明，NAP活性與腎上腺皮質激素、性激素有關［9］。在各種應激狀態下，垂體腎上腺皮質功能加強，NAP活性相應增強，同時其中性粒細胞的吞噬功能也是活躍的［10］。因此，從理論上講，中性粒細胞堿性磷酸酶活性應該與SLE的病情變化有一定相關性。

SLE引起粒細胞減少的病因可能有：①藥物反應，即治療SLE的免疫抑制劑如環磷酰胺、硫唑嘌呤、甲氨蝶呤等所致的粒細胞減少。②粒細胞抗體導致粒細胞破壞及骨髓產生粒細胞減少。實驗研究發現，在SLE患者的粒細胞表面能檢測到高水平的IgG，提示粒細胞減少系抗體介導所致。其次，體外實驗發現SLE患者T細胞能抑制骨髓粒細胞及巨噬細胞集落形成單位，而致粒細胞產生減少，此系細胞免疫異常所致。同時對粒細胞功能研究發現，活動期SLE患者粒細胞的趨化因子產生減少，吞噬和調理功能降低［1］。

此外，SLE多見于生育期的女性，性激素在SLE的發病機制和病程中發揮重要的作用。在SLE的女性和男性患者及他們的一級親屬中，16α羥雌酮和雌三醇增高，16α羥雌酮為活性很強的雌激素，與蛋白結合后有很強的抗原性，可影響細胞功能并產生抗雌激素抗體。NAP的活性受腎上腺皮質激素、雌激素等的影響較大，凡使上述物質增多的因素都可使NAP活性增高［11］。由此推斷，SLE患者NAP活性應該是增高的，但事實并非如此。研究還發現，16α羥雌酮的水平與SLE的活動性并無關系，而SLE的活動性與雄激素水平的低下有關。睪酮的17位碳的氧化速度加快，使代謝產物活性降低。SLE婦女雄激素水平下降，狼瘡活動時水平最低。雄激素水平下降，對機體的影響減低，相對地表現出雌激素對機體的影響提高。因此，是否可以認為NAP活性降低主要與雄激素水平降低有關，而不是與雌激素水平相對升高有關，還需要進一步研究證實。

新近的研究顯示，SLE患者外周血B細胞和單核細胞自身產生的白細胞介素(interleukin，IL)-10較正常對照組明顯升高;外周血單個核細胞中非T細胞亞群的IL-10轉錄表達增加，而且，SLE患者血清中IL-10水平較對照組也高［12］(878)。而IL-10可抑制腫瘤壞死因子α、IL-1β和IL-8的釋放，還破壞IL-1β從脂多糖激活的中性粒細胞上轉錄。IL-1β可促使髓過氧化物酶釋放，IL-8是一種非常強效的中性粒細胞吸引劑和激活劑，因此IL-10對中性粒細胞促進炎癥進程起限制作用［8］(794)。上述因素是否是NAP活性降低的原因，有待進一步考證。

本研究結果顯示，NAP活動度及陽性積分在SLE患者穩定組與對照組中比較，差異無統計學意義，輕度活動組、中度活動組、重度活動組均顯著低于對照組，差異有統計學意義。中度活動組、重度活動組與輕度活動組比較，差異有統計學意義。中度活動組與重度活動組比較無明顯差異。隨著SLE病情加重，NAP陽性率和陽性積分降低。這提示NAP活性可在一定程度上反映SLE的病情變化。

本研究中，對病情活動度的分類采用了等級分類法，更能客觀地評價和反映病情的真實活動性，而以往相關文獻絕大多數把病情活動度分為活動期與穩定期(是疾病活動譜的兩個極端)來統計分析的，有可能增加組間差異。當然，僅憑NAP活性來判斷SLE的病情活動性是有限的，必須結合臨床表現和其他實驗室指標(如血常規、紅細胞沉降率、補體C3、補體C4)對每位患者病情活動性進行綜合評價，才能客觀地評價和反映病情的真實活動性。

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Study of the Relationship between Neutrophilic Alkaline Phosphatase Activity and the Disease Activi-ty of the Systemic Lupus Eryhematosus

SUN Ming-li1，CHEN Mei-pu2，WANG Yan-jun1.(1.Department of Hematology，2.Department of Rheumatology，Liaocheng Second People's Hospital，Liaocheng252601，China)

ObjectiveTo study the relationship between neutrophilic alkaline phosphatase activity and the disease activity of the systemic lupus erythematosus(SLE).Methods100 SLE cases were divided into 4 groups according to the disease activity based on SLE DAI，i.e.basically inactive group，slightly active group，moderately active group and heavily active group.AS-BI method was used to NAP staining of peripheral blood smear，positive rate and positive score of NAP was observed，and compared with the control group.ResultsThe positive rate and positive score of NAP in basically inactive group and the control group were not statistically different(P＞0.05)，but those in slightly active group，moderately active group and heavily active group were decreased than the control group(P＜0.01).The positive rate and positive score of NAP in slightly active group were decreased than that in basically inactive group but improved than those in moderately active group and heavily active group(P＜0.01).That had no statistical significance in moderately active group than that in heavily active group(P＞0.05).Their levels had statistical significance in different groups of SLE and the control group(P＜0.01).ConclusionNAP activity can reflect disease active degree of SLE patients，which is one of the important reference indexes for judging the treatment response and effectiveness.

Erythema lupus;Systematical;Neutrophilic alkaline phosphatase;Disease activity

R593.241

A

1006-2084(2012)13-2113-03

2011-12-05

2011-01-28 編輯：樓立理