五指山不同級別新鮮苦丁茶游離氨基酸含量的測定

陳 文，王湘君，徐云升，湯世松

(1.瓊州學院理工學院，海南三亞572200;2.瓊州學院生物科學與技術學院，海南三亞572200)

0 引言

海南省五指山苦丁茶屬冬青科的兩個種，即冬青科冬青屬大葉冬青和冬青科冬青屬苦丁茶［1］.苦丁茶是一種中藥，具有清熱解毒、消炎、調節腸胃等功效，是民間一種較為高級的茶品［2］，海南五指山不少地區建立了苦丁茶基地，集種植、加工、銷售于一體，并取得了較好的經濟效益.

氨基酸是既含氨基又含羧基的有機化合物.天然得到的氨基酸大部分是α－氨基酸，其相互間失水形成肽鍵連接形成肽及蛋白質.但β－，γ－，δ－氨基酸等［3］，在生物體內呈游離狀態，并不存在于蛋白質中;植物中還大量存在游離的γ－谷氨酰衍生物［6］.

筆者對五指山一些苦丁茶基地的調查發現，不少苦丁茶中、老茶葉遭到丟棄，不能有效地利用，造成很大的浪費.為此實驗通過測定不同部位苦丁茶葉的游離氨基酸總平均含量，為評價苦丁茶的質量，進一步綜合利用苦丁茶提供一定科學依據.

1 實驗研究

1.1 海南五指山苦丁茶中游離氨基酸含量的測定

1.1.1 材料、設備與試劑

1.1.1.1 苦丁茶樣品

苦丁茶樣品:采摘五指山茶廠人工種植新鮮苦丁茶

一級品苦丁茶:一芽兩葉，肥壯嬌嫩

二級品苦丁茶:靠近一芽兩葉一端的茶葉

三級品苦丁茶:老葉但未脫落的茶葉

四級品苦丁茶:脫落的老葉

將采摘的苦丁茶按四個等級分類，分別用自來水，雙蒸水洗凈，風干.所有樣品均于80°C恒溫干燥8 h，粉碎備用.

1.1.1.2 主要設備

電子調溫電熱套:天津市泰斯特儀器有限公司

電子分析天平(萬分之一):賽多利斯特科學儀器(北京)有限公司

容量瓶:10mL，100mL，1000mL

吸量管:10mL，5mL，2mL，0.5mL

TU－1901型雙光束紫外可見分光光度計:北京普析通用儀器有限責任公司

HH－1數顯恒溫水浴鍋:金壇市開發區吉特實驗儀器廠

常用的化學實驗玻璃儀器

1.1.1.3 主要試劑

(1)谷氨酸標準品:稱取0.5g谷氨酸粉末，用蒸餾水溶解后，定容到100ml配制成標準溶液.

(2)茚三酮溶液:稱取茚三酮1g，溶于25ml蒸餾水中，加氯化亞錫40mg，溶解后搖勻、過濾，濾液置于暗處一天后加水定容至50 ml，存于暗處.

(3)PH8.0磷酸鹽緩沖液:稱取一定量磷酸鹽溶于適量蒸餾水中，用酸度計測溶液ph，然后邊測邊向溶液中加蒸餾水直到溶液ph值接近8時為止.

1.2 實驗方法

1.2.1 苦丁茶游離氨基酸樣品液制備

1.2.1.1 樣品處理

將不同級別新鮮苦丁茶粉碎樣品過80目篩，用0.0001g分析天平準確稱取樣品粉末苦丁茶樣品25.0g置于圓底燒瓶中，加300ml蒸餾水加熱回流2次，每次45min，然后過濾，合并濾液，用蒸餾水定容至500ml，搖勻，備用.

1.2.2 繪制標準曲線

1.2.2.1 標準溶液配制:

準確稱取干燥至恒重的谷氨酸標準品0.5019g，用蒸餾水溶解后轉入100 ml容量瓶中，并定容至刻度，得濃度為5.0 mg/ml標準貯備液，裝入棕色瓶中冰箱保存備用.準確吸取上述標準液10 ml，加水定容至50 ml作為工作液(1ml含茶氨酸1.0 mg).

氨基酸定量標準曲線的制作:分別吸取 0.0 ml、1.0ml、2.0 ml、3.0 ml、4.0 ml、5.0 ml氨基酸工作液于一組25ml容量瓶中，各加水4 ml，茚三酮溶液0.5 ml和PH8.0磷酸鹽緩沖液2 ml，在沸水中加熱15 min，冷卻后加水定容至25 ml，放置10 min后，用5 mm比色杯，在570 nm處，以試劑空白溶液作參比，測定吸光度(A)將測得的吸光度與對應的茶氨酸濃度繪制標準線.

1.2.3 最佳波長的選擇

取標準待測液(7支比色管)在TU－1901紫外－可見分光光度計上，470－650nm波長范圍內進行光譜掃描，取最大吸收波長為檢測波長，最后得到570nm處吸收最大.在570nm的最佳波長處，測定吸光度A.然后以谷氨酸標準品的濃度為橫坐標，以其吸光度A為縱坐標作標準曲線.

1.2.4 苦丁茶樣品氨基酸含量測定

分別準確量取不同級別苦丁茶樣品1.0ml提取液，加入茚三酮溶液0.5ml和PH8.0磷酸鹽緩沖液2ml，在沸水中加熱15min，冷卻后加水定容到25ml，放置10min后，用1cm比色皿，以試劑空白作參比，于波長570nm處測其吸光度.重復測定七次.

1.2.5 實驗數據與實驗結果

1.2.5.1 標準曲線實驗數據與標準曲線圖

表1 谷氨酸標準品標準曲線實驗數據

圖1 谷氨酸標準品標準曲線實驗數據

1.2.5.2 樣品實驗數據與實驗結果

計算公式:①吸光度值代入公式:

求得測量樣液濃度C

②含量計算公式:

V總為樣液總體積，m總為樣品總質量

游離氨基酸是苦丁茶的重要成分之一，也是人體所需的重要營養物質，因此，它與苦丁茶的飲、藥用價值密切相關，經TU－1901紫外－可見分光光度計測定，經數據處理和計算得出不同等級即不同部位海南五指山苦丁茶游離氨基酸總平均含量不一樣，四個等級的五指山苦丁茶中氨基酸總平均含量分別為96.95、92.04、85.64 和78.95mg/g，結果如下表所示.

表2 各等級茶葉樣品實驗數據與結果

實驗發現:一、二級苦丁茶游離氨基酸總平均含量較豐富，三、四級別相對低一些，但整體總平均含量相差不大.

2 實驗結果討論與分析

實驗采用谷氨酸作為基準物質，原料為不同部位等級的海南五指山苦丁茶，采用茚三酮比色法，通過TU－1901型紫外可見分光光度計，測定茶葉中茶游離氨基酸總平均含量，方法簡單快速并具有較好的精密度與準確度，基準物質谷氨酸便宜易得、對儀器條件要求不高的優點.作為一種對于茶葉品質的初步鑒定、快速測定方法，有一定應用價值.

實驗存在以下問題，有待以后繼續研究加以改進.所采用苦丁茶樣品材料的等級級別較少并且等級級數相差不大，數據顯示相差不明顯;另因谷氨酸標準品、茚三酮溶液的穩定性(如受環境如光照、溫度等條件影響較大)較差，對實驗結果有影響，故谷氨酸標準品、茚三酮溶液用于游離氨基酸總平均含量測定時，宜現用現配并注意避光［7］.實驗測量時采用多次平行測定，準確度相對較高，仍具有參考價值.

3 結論

苦丁茶是天然保健綠色食品，有較好的藥用價值［8］.苦丁茶樣品中游離氨基酸總平均含量是:一級品＞二級品＞三級品＞四級品.就游離氨基酸總平均含量來分析，一級品與二級品差別不大，而三級品和四級品則差別較大，尤其四級品含量較低.不同部位的苦丁茶游離氨基酸總平均含量存在著一定的差別，，三級品老葉但未脫落的苦丁茶仍可利用.即未脫落的茶葉及脫落的老葉與幼嫩芽葉加工的苦丁茶相比，游離氨基酸總平均含量相對低一些，但苦丁茶樹年生長量大，成葉葉片大而厚，產量很高，收購價格低，故仍應對老葉加以利用.仍有較大開發利用前景.建議在采摘苦丁茶時，同時采摘未脫落的老葉，以免脫落后成分損失而失去利用價值.

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［2］施思，陳煉紅，伍紅.苦丁茶多糖提取工藝條件的優化研究［J］.西南民族大學學報(自然科學版)，2012，35(6):983－987.

［3］沈強，司輝清，于洋.苦丁茶化學成分研究進展［J］.茶業通報，2010，35(1):21－24.

［4］許旋，羅一帆，盧忠.不同部位苦丁茶葉的微量元素和黃酮含量的測定［J］.微量元素與健康研究，2000，17(2):32－33.

［5］張安興，何瑜.苦丁茶黃酮及游離氨基酸物質動態變化的規律［J］.湖北農機化，2009，12(2):62－64.

［6］陳文，王湘君，趙陽，陳啟芳.海南五指山苦丁茶黃酮含量測定的研究［J］.瓊州學院學報，2011，18(5):14－16.

［7］安玉紅，任廷遠.苦丁茶中活性成分的提取及保健作用的研究現狀［M］.貴州茶葉，2009，16(3):1－3.

［8］董上，王德爐.初始修剪高度對貴州苦丁茶品質和產量的影響［M］.山地農業生物學報，2012，31(2):119－123.