白芍原藥材與不同炮制加工品的薄層對比研究

馬玉，郭力，黃玉慧，周勤梅，許莉

白芍為毛茛科植物芍藥Paeonia lactiflora Pall.的干燥根，主要含芍藥苷、牡丹酚、芍藥苷內酯等萜類成分及黃酮、鞣質、氨基酸、苯甲酸等成分。白芍一般需經凈制切片或炮制后入藥。2010年版《中國藥典》規(guī)定的白芍加工炮制品為白芍飲片、清炒白芍和酒白芍。炮制方法不同，白芍的功效作用也有差異。

本文對白芍原藥材和不同炮制加工品[白芍飲片、酒白芍、麩炒白芍、發(fā)酵白芍]進行研究分析，新增了發(fā)酵白芍，采用薄層色譜法對其中的芍藥苷、氨基酸、苯甲酸進行化學成分對比分析，比較發(fā)酵法與其他方法的異同，為進一步高效液相色譜分析做輔助研究。

1 儀器與材料

1.1 儀器

超聲波清洗機(KQ3200E型)；10×20cm硅膠G板；玻璃點樣毛細管0.3mm(華西醫(yī)科大學儀器制造廠)；紫外分析儀；真空干燥箱（DZG-6050型，上海森信實驗儀器有限公司）。

1.2 藥材與試劑

藥材：白芍原藥材、飲片、酒白芍、麩炒白芍、發(fā)酵白芍均由亳州千草藥業(yè)飲片廠提供，由成都中醫(yī)藥大學鑒定教研室李敏教授鑒定確認。

對照品：芍藥苷對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：110736-200320）。

試劑：苯甲酸（生物試劑）；薄層層析硅膠G（青島海洋化工廠）；層析用試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 白芍不同炮制品薄層色譜鑒別

2.1.1 溶液的制備 供試品溶液的制備：取五種樣品粉末各0.5g，分別加乙醇l0mL，振搖5分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙醇1mL使溶解，作為供試品溶液。對照品溶液的制備：取芍藥苷對照品適量，加乙醇制成每1mL含1mg的溶液，作為芍藥苷對照品溶液；另取苯甲酸適量，精密稱定，加甲醇制成每1mL含0.1mg的溶液，作為苯甲酸對照品溶液。

2.1.2 芍藥苷薄層色譜鑒別 分別吸取芍藥苷對照品和上述供試品溶液2μl，點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(40∶5∶10∶0.2)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛-硫酸溶液，加熱至斑點顯色清晰。如圖1。

圖1 芍藥苷薄層色譜圖

2.1.3 氨基酸薄層色譜鑒別 分別吸取上述供試品溶液2μl，點于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇-冰醋酸-水（3∶1∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2%茚三酮溶液，加熱至斑點顯色清晰。如圖2。

圖2 氨基酸薄層色譜圖

2.1.4 苯甲酸薄層色譜鑒別 分別吸取苯甲酸對照品和上述供試品溶液2μl，點于同一硅膠GF254薄層板上，以石油醚-正己烷-乙酸乙酯-冰醋酸（6∶4∶3∶0.5）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（254nm）下檢視。如圖3。

圖3 苯甲酸薄層色譜圖

2.1.5 結果 從圖1可知，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同的藍紫色斑點，麩炒白芍中芍藥苷斑點色稍淺，此外，白芍原藥材、白芍飲片、酒白芍、麩炒白芍及發(fā)酵白芍薄層中存在大量的共有斑點，且發(fā)酵白芍的斑點較多。從圖2可知，白芍原藥材、白芍飲片、酒白芍、麩炒白芍及發(fā)酵白芍原藥材中存在多種氨基酸，且含量以藥材和發(fā)酵品為多。從圖3可以看出，白芍原藥材、酒白芍、麩炒白芍的苯甲酸含量相對較少，而白芍飲片、發(fā)酵白芍的苯甲酸含量相對較高。

3 討論

3.1發(fā)酵是在常溫、常壓條件下進行的生物轉化過程，能最大限度地保護中藥的活性成分。微生物在發(fā)酵過程中將許多人體不能直接吸收利用的大分子有效活性物質降解成小分子的活性物質，使發(fā)酵中藥在人體中可以較快的被吸收，且吸收較完全。采用發(fā)酵法對白芍進行加工能最大限度保護對白芍中成分的破壞，并因為發(fā)酵的作用產生轉化出新的成分。因此在三個色譜中都出現了發(fā)酵白芍的斑點較多的情況，從而推斷發(fā)酵法應該是比較好的方法，但還需進一步的研究開發(fā)。

3.2 芍藥苷薄層色譜中，麩炒白芍芍藥苷顏色淺于其它樣品的原因可能是由于麥麩吸附成分，致使芍藥苷含量相對較低。而發(fā)酵白芍斑點較多則可能是經發(fā)酵后，微生物在生長過程中產生各種酶，將藥物的成分分解轉化產生了一些新物質。

3.3 氨基酸薄層色譜，顯示存在大量氨基酸，這與之前的文獻報道相符[1]。但在薄層上只能粗略看出幾種藥材之間氨基酸含量的差異，而未能找出其種類的差異。白芍原藥材由于只經簡單的初加工，其氨基酸含量明顯比其他炮制品高。此外發(fā)酵白芍的氨基酸斑點較其他白芍炮制品多，提示發(fā)酵后白芍有新的氨基酸產生，值得進一步研究。

3.4 苯甲酸可增加肝臟的解毒負擔，攝入一定量會產生不良反應，故被視為存在安全隱患的有毒物質。其為芍藥苷的分解產物之一，炮制加工對苯甲酸含量有一定影響，炮制品間差異不大，但炮制后均較生藥低[2]。發(fā)酵白芍中由于微生物的作用，可能增強了芍藥苷的分解，而導致苯甲酸含量比其它炮制品高。發(fā)酵白芍除了苯甲酸含量較高外，比較多的斑點也顯示有其它成分的存在。另外文獻報道不去皮品均大于去皮品，其中鮮品含量最高[3]。而所用白芍飲片未去皮，這可能是導致白芍飲片苯甲酸含量高的原因。

[1] 薛建海,王仁川.亳白芍不同炮制品中氨基酸成分分析[J].中國中藥雜志,1992,17(2):408.

[2] 吳巧鳳,來平凡,陳京,等.杭白芍生品與炮制品種芍藥甙、苯甲酸和元素含量的對比分析[J].中國中醫(yī)藥科技,2005,12(5):299.

[3] 王康才,張榮榮,方陣,等.杭白芍不同加工品苯甲酸含量分析[J].中藥材,2008,31(10):1476.