HPLC法測定小兒麻甘顆粒中黃芩苷的含量

徐瑞超，馬云桐，，羅莉

小兒麻甘顆粒收載于《中華人民共和國衛生部藥品標準》[1]中藥成方制劑第八冊，標準編號WS3-B-1493-93，由麻黃、黃芩、甘草、紫蘇子等8味中藥組成，具平喘止咳、利咽祛痰之功效，用于小兒肺炎喘咳、咽喉炎癥等病癥。

原質量標準中無含量測定，有文獻報道[2～3]測定小兒麻甘顆粒中鹽酸麻黃堿的含量。黃芩具有清熱燥濕，瀉火解毒，止血，安胎，降血壓功效。黃芩含多種黃酮類化合物，主要為黃芩苷、黃芩素、漢黃芩苷、漢黃芩素等，其中黃芩苷具有抗炎、鎮靜、降壓等作用[4]。《中國藥典》[5]2010年版一部中，黃芩藥材及多種中藥制劑收載有黃芩苷的含量測定項目，如兒童清肺丸、九味羌活丸、九味羌活顆粒、三九胃泰顆粒、三黃片、小兒百部止咳糖漿、小兒肝炎顆粒、小兒瀉痢片、小兒熱速清口服液、小兒清肺止咳片、小兒清肺化痰口服液、小兒感冒寧糖漿、小兒解表顆粒等。為了進一步加強產品質量的可控性，作者建立了HPLC法測定小兒麻甘顆粒中黃芩苷含量的方法。

1 儀器與試藥

島津SPD-20A液相色譜儀（LC-20AT），電子分析天平（德國賽多利斯公司BP2110），黃芩苷對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號200512），乙腈、甲醇為色譜級，其余試劑均為分析純，小兒麻甘顆粒（四川巴中普瑞制藥有限公司提供）。

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統適用性試驗

芩的陰性對照品，按供試品溶液制備方法制成陰性對照品溶液。

2.3 方法學考察

色譜柱：Kromasil C18（250×4.6 mm，5 μm）；流動相：甲醇-水-冰醋酸（50︰50︰1）；檢測波長：277 nm；流速：1.0 mL.min-1；柱溫：25 ℃；進樣量：10 μL。理論塔板數按黃芩苷峰計算均不低于3500。見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取經五氧化二磷減壓干燥 24 h的黃芩苷對照品3.14 mg，置50 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品儲備液（0.0628 mg.mL-1）。精密量取對照品儲備液1 mL，置100 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，即得每1 mL含黃芩苷6.28 μg的黃芩苷對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 取約4 g小兒麻甘顆粒，精密稱定，研細，置具塞錐形瓶中，精密加入50%的甲醇25 mL，密塞稱定重量，超聲處理（功率250 W；頻率40 kHz）30 min，放冷，用50%的甲醇稀釋至刻度，搖勻，靜置后精密量取上清液20 mL，置100 mL的量瓶中，加50% 的甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續濾液即得供試品溶液。

2.2.3 陰性對照溶液的制備 取小兒麻甘顆粒處方中除黃芩外的其它7味，按標準項下制備方法制得缺黃

2.3.1 線性關系考察 量取濃度為6.28 μg.mL-1的黃芩苷對照品溶液，置量瓶中，搖勻，即得對照品溶液，分別精密吸取2,4,8,12,16,20 μL，注入色譜儀，依法測定，以峰面積為縱坐標，黃芩苷的量為橫坐標，作線性回歸，得回歸方程：y = 334331x –348.6，R2 = 0.9998（n=7）。結果表明，樣品進樣量在0.0125～0.1256 μg內，黃芩苷峰面積值與進樣量呈現良好的線性關系。見圖2。

圖2 標準曲線圖

2.3.2 精密度試驗 取黃芩苷對照品溶液（6.28 μg.mL-1），依法連續測定6次。結果峰面積的RSD為0.61%（n=6），表明儀器精密度符合要求。

2.3.3 重復性試驗 取同一批（批號為100806）樣品6份，按供試品溶液制備方法制備溶液并依法測定。結果黃芩苷的平均含量為6.644 mg.g-1，RSD為1.23%（n=6），表明方法重現性良好。

2.3.4 穩定性試驗 取同一供試品溶液，室溫密閉放置，分別于制備后0，2，4，8，12，24 h進樣測定。結果黃芩苷峰面積的RSD為2.25%（n=6），表明供試品溶液在24 h內穩定。

2.3.5 加樣回收率試驗 取已知含量的樣品約2 g（批號為100806），共 9份，按供試品溶液制備方法制備溶液并定容至200 mL，各取1 mL，分別加入定量的對照品溶液（6.28 μg.mL-1）2.0、2.5、3.0 mL（約相當于樣品量的80%、100%、120%）各3份，分別按“2.1”項下色譜條件測定，計算回收率，測得平均回收率為99.89%，RSD為0.76%。結果見表1。

表1 小兒麻甘顆粒中黃芩苷回收率實驗結果

2.4 小兒麻甘顆粒樣品含量測定(批號為100806，100810，100812)

取3批小兒麻甘顆粒樣品，按“2.1”項下色譜條件測定。結果3批樣品中，黃芩苷含量分別為6.436，6.645，7.016 mg.g-1（n=3），與2010年版《中國藥典》規定的黃芩藥材中黃芩含量不得少于90%相吻合。

3 討論

本文對小兒麻甘顆粒中黃芩苷的含量進行測定，通過色譜條件的考察和系統適用性實驗，以及對照品和供試品的高效液相色譜圖，顯示上述色譜條件有很好的分離效果，使黃芩苷與其他成分達到了基線分離。此外，通過線性考察、精密度試驗、穩定性試驗、重復性試驗、加樣回收率試驗等一系列方法學考察，證明本法簡便、準確、快速、重復性好。因此，建議將該法作為小兒麻甘顆粒中黃芩苷的質量控制方法。

本試驗比較了不同提取溶劑（如乙醇、甲醇等）、不同提取方法（如超聲、回流、直接溶解過濾等）的提取效果，結果以70%乙醇直接溶解過濾提取的總體效果為佳，且操作簡便、快速。在流動相系統的選擇中，分別以甲醇-水-磷酸、甲醇-水-冰醋酸、乙腈-水-磷酸、乙腈-水-冰醋酸等不同體積分數、不同比例的流動相系統進行等度和梯度洗脫試驗，結果以甲醇-水-冰醋酸（50︰50︰1）進行等度洗脫為佳，峰形對稱且分離度較好，基線較平穩、不易漂移。

試驗中還對Kromasil C18（250×4.6 mm，5μm）色譜柱及Diamonsil C18（150×4.6 mm，5μm）不同品牌型號的色譜柱進行比較，色譜行為基本一致，但是前者分離度較高。

[1] 衛生部藥品標準[S].中藥成方制劑.第八冊,1993,23.

[2] 王啟硯.HPLC法測定小兒麻甘顆粒中鹽酸麻黃堿的含量[J].中國藥師,2008,11(8):994.

[3] 管玉云,程正.HPLC法測定小兒麻甘顆粒中鹽酸麻黃堿的含量[J].現代中藥研究與實踐,2007,21(5):32.

[4] 文敏,李雪.黃芩苷藥理作用研究新進展[J].沈陽藥科大學學報,2008,25(2):158.

[5] 國家藥典委員會.中國藥典.2010年版一部[S].北京:中國醫藥科技出版社,2010:282.