銀芩片質量標準初步研究

卞金輝，余蔥蔥，李從菊，林偉，陳娜，郭力

銀芩片是根據原國家藥品標準銀芩膠囊（標準號WS-10183(ZD-0183)-2002）改劑而成。該藥立法嚴謹，選藥精準，藥味不多（由金銀花、黃芩、三七葉、魚腥草四味藥組成），符合中醫藥理論和傣醫用藥特點，具有較強的清熱解毒和發散風熱作用，在治療風熱感冒和傣醫用藥方面有較大的優勢，是一個較理想的中藥感冒用藥。但該藥原標準中只有金銀花、三七葉的定性檢測和黃芩苷的定量檢測，致使擬訂的標準偏低，產品質量的可控性差，而且采用的膠囊常出現內容物形狀不均勻、易分層等缺點，從而造成裝量不準確。因此我們按照SFDA頒布的《藥品注冊管理辦法》的有關規定進行研究，擬將膠囊劑改成片劑，從而改變該方原有劑型的上述缺點。為了確保本品質量，我們對其進行了質量標準研究，對方中的金銀花、黃芩、三七葉、魚腥草進行了改進的TLC鑒別[1]。結果表明該方法簡便、準確、可靠，能較好地控制本產品的質量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

AE240型萬分之一電子天平(梅特勒一托利多儀器有限公司)；PHS一3C型精密pH計(上海圖新電子科技有限公司)；ZF-20D型暗箱式紫外分析儀（北京金歐亞科技發展有限公司）；硅膠G(青島海洋化工廠提供)等。

1.2 試藥

綠原酸對照品（批號：110753-200212）、金銀花對照藥材（批號：121060-200303）、黃芩苷對照品 (批號：110715-200212)、人參皂苷Rb1對照品（批號：110704-200318）、魚腥草對照藥材（批號：121046-200402）等均由中國藥品生物制品檢定所提供；銀芩片及陰性對照品均為自制；水為重蒸餾水，其余所用試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 金銀花的TLC鑒別

金銀花為方中君藥，含有黃酮類、肌醇、綠原酸、異綠原酸、皂苷及揮發油等[2～4]。其中現代藥理學證明其抗菌的有效成分以綠原酸和異綠原酸為主。按銀芩膠囊原質量標準試驗，結果顯示，供試品色譜中斑點較對照斑點有一定拖尾現象。為改善效果，根據文獻資料，選用5%磷酸二氫鈉調制硅膠G薄層板，結果顯示，供試品色譜中斑點由3個相近斑點組成。

2.1.1 供試品溶液的制備 取中試樣品一批(041201)2片，去包衣，研細，取粉末0.2 g，加甲醇5 mL，超聲處理10 min，濾過，取續濾液作為供試品溶液。

2.1.2 陰性對照溶液的制備 取不含金銀花藥材按制法制備缺金銀花陰性樣品，同前法制備陰性對照溶液。

2.1.3 綠原酸對照品溶液的制備 取綠原酸對照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作為對照品溶液。

2.1.4 金銀花對照藥材溶液的制備 取金銀花對照藥材粉末0.1 g，加甲醇5 mL，超聲處理30 min，濾過，取續濾液作為對照藥材溶液。

照薄層色譜法（《中華人民共和國藥典》2005年版一部附錄VIB）試驗，吸取對照品溶液和對照藥材溶液各5 μL，陰性對照溶液和供試品溶液10 μL，分別點于同一以5%磷酸二氫鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以醋酸丁酯－甲酸－水(7:2.5:2.5)的上層溶液為展開劑，在室溫下展距約12 cm，取出，晾干，置紫外光燈(365 nm) 下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點，陰性無干擾，薄層色譜見圖1。

2.2 三七葉的TLC鑒別

三七葉的化學成分主要含揮發性成分、皂苷類、氨基酸類等其他成分。其特征性成分為人參皂苷Rb1。按銀芩膠囊原質量標準，試驗用人參皂苷Rb1為對照，結果顯示，供試品和投料藥材色譜中斑點和對照斑點一致，但供試品和投料藥材色譜中斑點較大，有拖尾現象。根據文獻資料，對供試樣品的提取方法進行了篩選，比較了甲醇提取、正丁醇提取、D101大孔樹脂純化，結果顯示：經D101大孔樹脂純化后的樣品效果較好，斑點清晰。

2.2.1 供試品溶液的制備 取中試樣品一批(041201)8片，去包衣，研細，取粉末2 g，加20%乙醇10 mL，超聲30 min，濾過，濾液濃縮到2 mL，加于D101大孔樹脂柱（100～120目，5 g，內徑10～15 mm）上，先后用水和20%乙醇各10 mL洗脫，再于70%乙醇洗脫，收集洗脫液10 mL，水浴蒸干，殘渣加甲醇1 mL 使溶解，作為供試品溶液。

2.2.2 陰性對照溶液的制備 取不含三七葉藥材按制法制備缺三七葉陰性樣品，同前法制備陰性對照溶液。

2.2.3 人參皂苷Rb1對照品溶液的制備 取人參皂苷Rb1對照品適量，加甲醇制成每1 mL含1 mg 的溶液，作為對照品溶液。

2.2.4 三七葉投料藥材溶液的制備 三七葉投料藥材粉末0.1 g，加甲醇5 mL，超聲處理30 min，濾過，取續濾液作為投料藥材溶液。

照薄層色譜法（《中華人民共和國藥典》2005年版一部附錄VIB）試驗，吸取上述四種溶液各5 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇-水-冰醋酸(13:7:2:1.5) 為展開劑，在10 ℃以下展開約14 cm，取出噴以10%硫酸乙醇溶液，在105 ℃加熱至斑點顯色清晰，立即置紫外光燈(365 nm) 下檢視。在供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點，陰性無干擾，薄層色譜見圖2。

2.3 魚腥草的TLC鑒別

魚腥草含有揮發性成分、黃酮類化合物、有機酸及脂肪酸、無機鹽類等[5]，原銀芩膠囊質量標準無魚腥草鑒別，試驗選擇了魚腥草對照藥材的乙酸乙酯部位作對照，結果表明供試品色譜中顯與對照品色譜相同斑點。

2.3.1 供試品溶液的制備 取中試樣品一批(041201)8片，去包衣，研細，取粉末2 g，加水10 mL使溶解，用NaOH試液調pH=10，加乙酸乙酯20 mL，分3次萃取，取乙酸乙酯層，合并，水浴蒸干，殘渣加1 mL乙酸乙酯使溶解，作為供試品溶液。

2.3.2 陰性對照溶液的制備 取不含魚腥草藥材按制法制備缺魚腥草陰性樣品，同前法制備陰性對照溶液。

2.3.3 魚腥草對照藥材溶液的制備 取魚腥草對照藥材粉末2 g，加水20 mL回流1 h，過濾，濾液用NaOH試液調pH=10，加乙酸乙酯20 mL，分3次萃取，取乙酸乙酯層，合并，水浴蒸干，殘渣加1 mL乙酸乙酯使溶解，作為對照藥材溶液。

照薄層色譜法（《中華人民共和國藥典》2005年版一部附錄VIB）試驗，吸取上述三種溶液各10 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水(20:10:1:1)的上層溶液為展開劑，在室溫下展開約12 cm，取出，晾干，置紫外光燈(365 nm)下檢視。在供試品色譜中，在與對照品色譜相應方法的位置上，顯相同顏色的熒光斑點，陰性無干擾，薄層色譜見圖3。

3 討論

3.1 本品在研究金銀花、三七葉、魚腥草的薄層色譜鑒別時，曾還分別采用了正丁醇-冰乙酸-水(4:1:2)、正丁醇-乙酸乙酯-水（8:2:10）、氯仿-乙酸乙酯-乙醚(6:1:3)作展開劑，均有較好的適宜性，但前面所述各薄層鑒別中所采用的展開劑展開效果更好，斑點更集中，方法更簡便。

3.2 本品對方中黃芩按照藥典標準及相關文獻資料進行了薄層色譜研究[6～7]，試驗了甲苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（10:8:1:2）、乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水（5:3:1:1）兩種展開系統，在與對照品色譜相應的位置上，雖顯相同顏色的熒光斑點，但有拖尾現象，色譜識別不明顯，對本品中黃芩的鑒別適宜性較差，因此未將黃芩的薄層鑒別列入質量標準。

綜上所述，本品采用TLC法對方中金銀花、三七葉、魚腥草進行定性鑒別，所得圖譜清晰，各斑點分離較好。本品所制定的質量標準方法簡便、準確、可靠、重現性好，能有效地控制本品的質量。

[1] 國 家藥典委員會.中華人民共和國藥典一部[S].北京:化學工業出版社,2005,附錄VB.

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