聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)診斷淋病的體會(huì)

閆鑫

(莘縣人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，山東 莘縣 252400)

2009年1月至2011年1月，我科采用聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)(PCR)檢測淋病標(biāo)本1568份，現(xiàn)將檢測結(jié)果報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 研究對象 本組泌尿生殖器分泌物采集標(biāo)本共1568例，均來自于我院泌尿外科和婦科門診病例。其中男性標(biāo)本656例，女性標(biāo)本912例。年齡18～60歲，其中18～30歲526例(33.55%)；31～40歲437例(27.87%)，41～50歲386例(24.62%)，51歲以上者219例(13.97%)，本組均為有淋病癥狀的疑似病人。職業(yè)類別：從事休閑服務(wù)業(yè)如美容美體業(yè)、發(fā)廊、男士或女士會(huì)所、酒店、賓館、足浴、按摩房、洗頭房等從業(yè)人員625例(39.86%)。進(jìn)城務(wù)工人員585例(37.31%)，個(gè)體商戶、企業(yè)老板、經(jīng)理類人員148例(9.44%)，流動(dòng)人口無固定職業(yè)人員178例(11.35%)，公職干部、職員類人員32例(2.04%)。

1.2 研究方法

1.2.1 標(biāo)本采集 女性未婚者取其尿道口及陰道口周圍膿性分泌物，女性已婚患者在拭凈宮頸表面分泌物后，用無菌拭子插入宮頸管1～2cm，轉(zhuǎn)動(dòng)2周取出拭子。男性患者拭凈莖頭后將拭子插入尿道1.5cm 取材。

1.2.2 檢測方法 取分泌物于500μl 生理鹽水中，14000r/min 離心5min，棄上清液，用50μl 裂解液懸浮沉淀，100℃15min，14000r/min 離心5min，取上清液2μl 做PCR反應(yīng)模板。取出已分裝有PCR 混合物的離心管，室溫融化，離心數(shù)秒。在PE480型微電腦擴(kuò)增儀上進(jìn)行擴(kuò)增，條件為94℃45s，55℃45s，72℃45s，共35個(gè)循環(huán)。取10～15μl 擴(kuò)增產(chǎn)物于2%的瓊脂糖凝膠上進(jìn)行電泳，以溴化乙錠染色在紫外線燈下觀察到400bp的DNA 片段即為淋病奈瑟菌(NG)PCR 陽性。每批標(biāo)本擴(kuò)增同時(shí)行陽性對照(2μl 陽性模板)和陰性對照(2μl 雙蒸水)。

2 結(jié)果

2.1 泌尿外科就診的男性受檢者656人，年齡最小18歲，最大60歲，PCR-NG 陽性者246人，陽性檢出率為37.5%；各年齡組陽性率見表1。

2.2 婦科門診就診女性受檢者912例，年齡最小21歲，最大56歲，PCR-NG 陽性312例，陽性檢出率為34.21%；各年齡組陽性率見表2。

2.3 不同類別從業(yè)人員受檢者PCR 結(jié)果顯示：從事美容美體、發(fā)廊、會(huì)所、賓館、足浴、酒店、按摩房等休閑服務(wù)人員PCR-NG 檢出率最高達(dá)47.36%，各職業(yè)人員檢出率見表3。

表1 泌尿外科男性受檢者PCR 結(jié)果

表2 912例婦科門診受檢者PCR 結(jié)果

表3 1568例受檢者PCR 結(jié)果

3 討論

3.1 檢測結(jié)果分析 本組1568例，PCR-NG 陽性558例，陽性率為35.59%，其中男性656例，PCRNG 陽性246例，陽性率為37.5%，女性912例，PCR-NG 陽性312例，陽性率為34.21%；總陽性率男性與女性陽性率之間比較無顯著性差異 (P>0.05)。職業(yè)類別人員分析：休閑服務(wù)業(yè)檢出率最高，為47.36%，其次為進(jìn)城務(wù)工人員，檢出率為30.94%，流動(dòng)人口檢出率為22.47%，個(gè)體企業(yè)人員為24.32%，公職人員為15.63%。本組檢出率最高與最低組比較，有非常明顯性差異(P<0.01)表明休閑服務(wù)人員等是淋病PCR-NG 檢出率較高的人群[1]。本資料符合文獻(xiàn)報(bào)道[2]。

3.2 PCR 技術(shù)的價(jià)值 淋病由淋病奈瑟菌引起，其特點(diǎn)是侵襲黏膜，以生殖泌尿系統(tǒng)黏膜的柱狀上皮與移行上皮為主[3]。其臨床表現(xiàn)相同[4]。因此，單憑癥狀與臨床表現(xiàn)診斷淋病有一定困難[5]。PCR 是一種體外擴(kuò)增特異DNA 片段的檢驗(yàn)技術(shù)，可在短時(shí)間內(nèi)使極微量的核酸片段擴(kuò)增到數(shù)百萬個(gè)特異DNA 序列拷貝。本研究采用PCR 技術(shù)方法，直接檢測標(biāo)本中淋球菌DNA，不需作分離培養(yǎng)，具有特異性強(qiáng)，靈敏度高，簡便快速等優(yōu)點(diǎn)。可為臨床治療提供及時(shí)、準(zhǔn)確、客觀、可靠的診治依據(jù)，具有科學(xué)有效的實(shí)用價(jià)值[6]。

[1]侯建峰.基層醫(yī)院淋病治療面臨的問題調(diào)查[J].中國性科學(xué),2005,14(6):26.

[2]翟文海.淋球菌4種常用檢測方法比較[J].皮膚與性病雜志,23(2):55.

[3]蔣廷武.性傳播疾病常見病原體檢測結(jié)果分析[J].中國誤診學(xué)雜志,2006,6(11):2103.

[4]孫繼英,于晶石,李 陽.淋病患者多部位感染因素調(diào)查[J].中華臨床中西醫(yī)藥雜志,2005,6(9):179-80.

[5]王平江.淋病誤診為前列腺炎，輸卵管炎2例[J].中國誤診學(xué)雜志,2006,6(14):2846.

[6]李愛素,吳相義.聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)在淋病診治中的應(yīng)用[J].中華綜合臨床醫(yī)學(xué)雜志,2001，3(1):48-49.