BRCA-1和TopoII在乳腺癌中的表達及臨床病理關系分析

彭 芳,張功亮,王 建,郭廣秀,黃金長,肖軍蘭,鐘 斌

(1、贛州市人民醫院病理科，江西 贛州 341000;2、贛南醫學院第一附屬醫院藥劑科，江西 贛州 341000)

乳腺癌成為危害女性健康的主要惡性腫瘤之一,最近幾年有年輕化趨勢,其發病率在逐步上升[1、2]。乳腺癌的發生是一個復雜的多步驟、有多種生物學指標參與的過程。BRCA-1 基因為人類乳腺癌易感基因，BRCA-1 基因編碼的蛋白在細胞周期調控、DNA 損傷修復、基因的轉錄調節、細胞凋亡和泛素化等方面起著重要的生物學功能，是重要的腫瘤抑制基因[3，4]。TopoII 基因是一個與惡性腫瘤預后有密切關系的基因，其在多種腫瘤中均有改變[5，6]。TopoII 編碼的蛋白是控制DNA的拓撲狀態的一類酶蛋白，存在于細胞核內，其作用的機制為催化DNA 鏈的斷裂和結合，它是一些化療藥物的特定靶點，這些藥物結合TopoII-DNA的復合物，抑制了DNA的重新連接，導致斷裂的雙鏈DNA的無法重新連接，從而誘導癌細胞的凋亡[5,6]。

本實驗采用免疫組化法檢測BRCA-1和TopoII 在乳腺癌和乳腺正常組織中的表達，并對其與乳腺癌臨床病理指標之間的關系進行分析，來評估BRCA-1和TopoII 在乳腺癌發生、發展過程中所起的作用。

1 材料與方法

1.1 一般資料 選取我院2010年1月至2012年6月行手術切除的經病理確診的未做過任何治療的乳腺癌標本共92例，組織學類型為浸潤性導管癌。患者均為女性，年齡32～71歲，中位年齡46歲。所有標本經4%中性甲醛固定，石蠟包埋，常規制備3μm 厚切片。

1.2 實驗方法 BRCA-1和TopoII 抗體購自福建邁新公司，采用免疫組織化學Envision 法，常規脫蠟，水化，檸檬酸高溫抗原修復，3%H2O2溶液孵育，二氨基聯苯胺(DAB)顯色，蘇木素復染細胞核，脫水，透明，封片觀察結果。

1.3 結果判斷標準 BRCA-1 陽性表達于細胞核或細胞漿，TopoII 陽性表達于細胞核。兩者判定標準均為：腫瘤細胞核陽性細胞數的比例<10%為陰性，陽性細胞數10%～25%為(+)，～75%為(++)，>75%為(+++)，結果判定采用顯微鏡下雙盲對照法觀察。

1.4 統計學處理 采用SPSS 13.0 統計軟件進行χ2檢驗和Spearman等級相關分析，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 BRCA-1 在乳腺癌中的表達 BRCA-1 在92例乳腺癌患者組織中陽性表達21例，陽性表達率為23%(其中9%表達“+++”，9%表達“++”，5%表達“+”)，癌旁正常乳腺組織陽性表達率為65.1%。癌組織中BRCA-1表達較癌旁正常乳腺組織明顯降低(P＜0.05)(見圖1、2和表1)。

2.2 TopoII 在乳腺癌中的表達 TopoII 在92例乳腺癌組織中陽性表達80例，陽性表達率為87%(其中36%表達“+++”，41%表達“++”，10%表達“+”)，癌旁正常乳腺組織表達陽性率為8.1%。癌組織中TopoII表達率較癌旁正常乳腺組織明顯升高(P＜0.05)(見圖1、3和表1)。

2.3 乳腺癌組織BRCA-1和TopoII的陽性表達相關性 癌組織中BRCA-1和TopoII表達無明顯相關升高(P＞0.05)。

2.4 乳腺癌組織BRCA-1和TopoII的表達與臨床病理特征的關系 BRCA-1和TopoII 在乳腺癌中的表達與臨床病理參數的關系見表l。乳腺癌中BRCA-1的陽性表達與腫瘤的大小、組織學分級和淋巴結轉移率呈負相關。TopoII 陽性表達率與腫瘤的大小、組織學分級和淋巴結轉移率呈正相關。

3 討論

表1 乳腺癌組織與正常乳腺組織中BRCA-1和TopoII表達與臨床特征關系

圖1 乳腺浸潤性導管癌(HE 染色×400)

圖2 BRCA-1 陽性表達于細胞核或細胞漿(免疫組織化學Envision 法×200)

圖3 TopoII 陽性表達于細胞核(免疫組織化學Envision 法×400)

大部分乳腺癌呈散發性，約5%～10%的乳腺癌具有遺傳易感性，表現為家族聚集性[1]。有研究表明[3、4]30%～40%的家族性乳腺癌是BRCA-1 基因突變引起，BRCA-1 基因定位于人17q21,編碼1863個氨基酸的蛋白質。BRCA-1 在調節細胞周期進程、DNA 損傷修復、細胞生長與凋亡及轉錄活化與抑制等多種生物學途徑都起重要作用。DNA 損傷后，首先由DNA 損傷傳感器進行探測并發出損傷信號。此后在BRCA-1的招募下，多個修復蛋白形成復合體，共同定位到損傷部位并進行修復[3，4]。BRCA-1 基因突變或BRCA-1表達降低均可能導致細胞功能失控和惡性進展[3，4]。本研究結果顯示,BRCA-1 在乳腺癌組織中陽性表達率為23%比癌旁正常乳腺組織中陽性率65.1%明顯降低,這與其它研究者的研究結果[1，4]相符，推測可能是組織中BRCA-1 基因表達降低抑制組織中受損基因的修復而導致其癌變，提示BRCA-1 基因表達降低可能與乳腺癌的發生有關系。并且本研究結果提示乳腺癌中BRCA-1的陽性表達與腫瘤的大小、組織學分級和淋巴結轉移率呈負相關。提示BRCA-1 蛋白表達的降低與乳腺癌的浸潤性生物學行為，如腫瘤大小、分級和淋巴結轉移等不良預后有關。推測隨著進一步研究的深入,BRCA-1 蛋白的檢測將有可能作為評估乳腺癌生物學行為和預后的新因素。

TopoII 又稱促旋酶，TopoII 是一種能催化DNA雙鏈拓撲異構體相互變換的基本核酶,有兩種同工酶TopoIIα和TopoIIβ，在DNA 復制、轉錄和染色體分離中起重要作用，是腫瘤化療的重要靶酶。細胞內TopoII 水平直接影響TopoII 抑制劑的抗腫瘤活性，它的表達下調會降低化療藥物的敏感性[6、7]。TopoII 在細胞增殖期表達增高，其表現呈周期性變化。有研究證實，細胞S期、G2期TopoII表達明顯升高，有絲分裂后期(G1、G0期)降低[7]。由于腫瘤細胞增殖活躍，故可推測TopoII與腫瘤的發生有關。研究中還發現，TopoII的表達越高，腫瘤的惡性生物學行為越明顯，患者的預后越差[6]。本研究結果顯示，TopoII 在乳腺癌組織中的表達陽性表達率為87%高于正常組織8.1%，而且隨著細胞核異形性的明顯增加，其染色程度越強烈，說明TopoII的表達與惡性進展和增殖活性的病理分級一致。因此，TopoII 能夠較為客觀地反映乳腺癌的增殖活性，可作為對病理學分級補充的較客觀的指標相符。

臨床上在乳腺癌診斷中應用的免疫標志很多，乳腺癌組織中檢測BRCA-1和TopoII 有望作為評估乳腺癌生物學行為和預后的新因素。

[1]Cree IA,Kurbacher CM,Lamont A,et al.A prospective randomized controlled trial of tumour chemosensitivity assay directed chemotherapy versus physician's choice in patients with recurrent platinum-resistant ovarian cancer [J].Anticancer Drugs,2007,18(9):1093-1101.

[2]Harris LN,Broadwater G,Abu-Khalaf M,et al.Topoisomerase II amplification does not predict benefit from dose -intense cyclophosphamide,doxorubicin,and fluorouracil therapy in HER2-amplified early breast cancer:results of CALGB 8541/150013[J].J Clin Oncol,2009,27(21):3430-3436.

[3]胡 震，沈鎮宙.邵志敏.BRCA-1和BRCA-2 基因突變相關性乳腺癌的普查和預防[J].實用臨床醫藥雜志，2003，7(2)：121.

[4]李 輝.BRCA-1、BRCA2 突變與乳腺癌關系[J].中外健康文摘,2008,5(6)：28-29.

[5]Orlando L,Del Curto B,Gandini S,et al.Topoisomerase IIalpha gene status and prediction of pathological complete remission after anthracycline-based neoadjuvant chemotherapy in endocrine nonresponsive Her2/neu-positive breast cancer [J].Breast,2008,17(5):506-511.

[6]李占文,楊華鋒,胡云鏘,等.P-gp、GST-π、TopoⅡ在乳腺癌中的表達及其意義[J].浙江醫學,2007,29(9):919-921.

[7]張 靜,寧殿賓,趙玉哲,等.乳腺癌原發灶及淋巴結轉移灶中Pgp、GST-π、TopoⅡ的表達及臨床意義[J].腫瘤防治研究,2008,35(3):181-183.