VEGF與Notch1在乳腺癌浸潤和轉移中的作用及其相關性

曹文慶，趙峰霞，趙玉哲，張 靜

(河北省人民醫院普外一科，河北 石家莊 050051)

乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一，發病率和死亡率均很高。盡管乳腺癌綜合治療不斷進展，但仍有相當一部分患者復發。目前Notch信號通路被認為是引起乳腺癌復發的重要因素之一［1］。Notch1是Notch信號通路受體之一，在調控腫瘤細胞的生長、發育、增殖和凋亡等過程中起重要作用［2］。血管內皮生長因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)是重要的血管生成調節因子，其與相應受體結合，啟動腫瘤血管生成，與惡性腫瘤的發生、發展、浸潤及轉移有密切關系［3］。作者應用免疫組化(S-P)法檢測VEGF及Notch1蛋白在乳腺癌組織中的表達，分析其與臨床病理學特征的關系，并探討兩者與乳腺癌浸潤和轉移之間的關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 60例乳腺癌組織和20例癌旁正常乳腺組織選自我院2010年1月至2010年12月手術切除經病理確診的石蠟標本，具有完整的臨床資料，均為女性，年齡35～70歲，術前均未行放療、化療或其他抗腫瘤的治療，病理類型均為浸潤性導管癌。

1.2 主要試劑 兔抗人VEGF單克隆抗體購于北京中杉金橋生物技術有限公司;兔抗人Notch1多克隆抗體購于Abcam公司;S-P免疫組化染色試劑盒及DAB顯色試劑盒均購于福州邁新生物技術有限公司。

1.3 檢測方法 石蠟標本切成4 μm切片，采用免疫組化S-P法檢測60例乳腺癌組織、20例癌旁正常乳腺組織中VEGF和Notch1蛋白的表達。用已知陽性切片作為陽性對照，以PBS代替一抗作為陰性對照。

1.4 結果判定 VEGF和Notch1蛋白陽性信號均位于細胞質。染色結果采用半定量積分法，隨機選擇5個高倍鏡視野觀察，每個視野計數200個腫瘤細胞。按陽性細胞百分比判斷:≤5%為0分，6% ～25%為1分，26% ～50%為2分，51% ～75%為3分，＞75%為4分。按染色強度判斷:無色為0分，淺棕色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。陽性細胞百分比與染色強度的乘積，0～3分為陰性表達，記作“－”;4～12分為陽性表達，記作“+”。閱片采用雙盲法，每張切片均由2名病理醫生判讀。

1.5 統計學處理 采用SPSS 13.0進行統計分析，率的比較采用χ2檢驗或連續性校正χ2檢驗，相關性檢驗采用Spearman相關分析，檢驗水準α=0.05。

2 結果

2.1 VEGF表達及其與乳腺癌臨床病理學特征的關系 VEGF在乳腺癌組織中的表達高于癌旁正常乳腺組織(P＜0.05)。VEGF的表達與乳腺癌的淋巴結轉移、組織學分級、臨床分期有關(P＜0.05)，而與腫瘤直徑、患者年齡無關(P均＞0.05)。見表1、2。

2.2 Notch1蛋白的表達及其與乳腺癌臨床病理學特征的關系 Notch1蛋白在乳腺癌組織中的表達高于癌旁正常乳腺組織(P＜0.05)。Notch1蛋白的表達與乳腺癌的淋巴結轉移、組織學分級有關(P＜0.05)，而與臨床分期、腫瘤直徑、患者年齡無關(P均＞0.05)。見表 1、2。

2.3 VEGF和Notch1蛋白在乳腺癌組織中表達的相關性 乳腺癌組織中VEGF表達與Notch1蛋白表達呈正相關關系(r=0.414，P=0.001)。見表 3。

表1 VEGF和Notch1蛋白在乳腺癌組織及癌旁正常乳腺組織中的表達

3 討論

腫瘤的生長與血管生成關系密切，豐富的血管為腫瘤細胞生長提供了充足的營養物質，并為其浸潤和轉移提供了必要的物質條件。腫瘤的浸潤和轉移是影響乳腺癌患者預后的重要指標。VEGF信號通路和Notch信號通路是調節胚胎血管發育和腫瘤血管生成的2個最重要的信號通路，作者推測其可能在乳腺癌的浸潤和轉移中發揮著重要作用。

VEGF作為血管生成最重要的因子，能特異性作用于血管內皮，與血管內皮細胞相應受體結合，從而刺激血管內皮細胞增殖，增強血管通透性，為腫瘤細胞轉移提供基質。近年來，大量對胃癌、前列腺癌和肝癌等腫瘤組織中VEGF作用的研究均證實了VEGF與惡性腫瘤的發生、發展、浸潤及轉移有密切關系［3－5］。本文研究結果顯示:VEGF在乳腺癌組織中的表達高于癌旁正常乳腺組織，提示VEGF在乳腺癌的發生、發展有重要作用，且VEGF的表達與淋巴結轉移、組織學分級、臨床分期有關。VEGF可能通過促進腫瘤血管生成進而促進腫瘤的侵襲和轉移。

表2 VEGF及Notch1蛋白的表達與臨床病理學特征的關系

表3 VEGF蛋白與Notch1蛋白的相關性

Notch信號通路廣泛存在于無脊椎動物和哺乳動物中，是保守進化的細胞內信號通路，調節細胞增殖、分化和控制細胞，在胚胎發育、腫瘤血管生成中發揮重要調節作用［6］。目前，在哺乳動物中發現4個Notch受體(Notch1～Notch4)和至少5個Notch配體(Jagged1、Jagged2、DLL1、DLL3和 DLL4)。其中 Notch1最常在腫瘤組織中被檢測到，異常的Notch1在腫瘤細胞的生長、代謝及凋亡等過程中起重要調控作用［2］。研究［7］發現Notch1在乳腺癌組織中表達高于癌旁正常乳腺組織，且與腫瘤淋巴結轉移、臨床分期及腫瘤直徑有關。Wang等［8］研究發現減少Notch1的表達會降低乳腺癌細胞的侵襲和轉移，提出乳腺癌中以Notch1為靶目標有重要治療價值。本文結果顯示，Notch1在乳腺癌組織中高表達，且與淋巴結轉移、臨床分期有關，提示Notch1可能與促進乳腺癌侵襲和轉移有關。

Joo等［9］對舌癌的研究發現，VEGF、Notch1 與淋巴結轉移及腫瘤浸潤深度有關，且兩者的表達呈正相關，提示兩者在舌癌的浸潤和轉移中起一定作用，可能成為影響舌癌預后的重要指標。張安華等［10］發現VEGF、Notch1在胃癌組織中高表達，均與浸潤深度、淋巴結轉移及遠處轉移有關，且兩者表達具有明顯正相關性，推測兩者可能共同調控腫瘤血管新生，參與胃癌的侵襲和轉移。本文結果顯示，VEGF、Notch1在乳腺癌組織中的表達呈正相關，且均與淋巴結轉移和臨床分期有關，提示兩者的表達不僅促進腫瘤的發生，且在乳腺癌增殖、生長及浸潤、轉移中起一定的作用，為乳腺癌的綜合治療提供了新的理論依據。

［1］Korkaya H，Wicha MS.HER-2，notch，and breast cancer stem cells:targeting an axis of evil［J］.Clin Cancer Res，2009，15(6):1845－1847.

［2］Bolós V，Grego-Bessa J，de la Pompa JL.Notch signaling in development and cancer［J］.Endocr Rev，2007，28(3):339 －363.

［3］Yonemura Y，Endo Y，Fujita H，et al.Role of vascular endothelial growth factor C expression in the development of lymph node metastasis in gastric cancer［J］.Clin Cancer Res，1999，5(7):1823－1829.

［4］Keledjian K，Borkowski A，Kim G，et al.Reduction of human pros-tate tumor vascularity by the alpha1-adrenoceptor antagonist terazosin［J］.Prostate，2001，48(2):71 － 78.

［5］Ng IO，Poon RT，Lee JM，et al.Microvessel density，vascular endothelial growth factor and its receptors Flt-1 and Flk-1/KDR in hepatocellular carcinoma［J］.Am J Clin Pathol，2001，116(6):838－845.

［6］Radtke F，Fasnacht N，Macdonald HR.Notch signaling in the immune system［J］.Immunity，2010，32(1):14 －27.

［7］Ma D，Dong X，Zang S，et al.Aberrant expression and clinical correlation of Notch signaling molecules in breast cancer of Chinese population［J］.Asia Pac J Clin Oncol，2011，7(4):385 －389.

［8］Wang J，Fu L，Gu F，et al.Notch1 is involved in migration and invasion of human breast cancer cells［J］.Oncol Rep，2011，26(5):1295－1303.

［9］Joo YH，Jung CK，Kim MS，et al.Relationship between vascular endothelial growth factor and Notch1 expression and lymphatic metastasis in tongue cancer［J］.Otolaryngol Head Neck Surg，2009，140(4):512－518.

［10］張安華，孫華文，蘇錦松，等.Notch1/DLL4信號通路與VEGF在胃癌浸潤和轉移中的作用及其相關性［J］.中華普通外科雜志，2010，19(4):374 －378.