血清IL-6和IL-8檢測在化療卵巢癌患者預后評估中的價值

吳建軍，劉繼斌

(1.海門市第五人民醫院，江蘇 海門 226131;2.南通市腫瘤醫院，江蘇 南通 226361)

卵巢癌是惡性程度極高的婦科腫瘤，發病率居婦科腫瘤的第5位，死亡率居首位，對女性生命造成嚴重的威脅。由于多數患者確診時已是發展期，因此尋找靈敏而可靠的指標對卵巢癌診治及預后評估是亟待解決的問題。白介素－6(IL-6)是一種多功能細胞因子，其除參與免疫應答、炎性反應以及淋巴細胞成熟和分化外，還與某些惡性腫瘤的形成和發展有關;白介素－8(IL-8)是免疫效應細胞生長刺激因子。有研究［1－6］報道IL-6、IL-8在卵巢癌中高表達 ，同時還影響對化療的敏感性。作者應用酶聯免疫吸附法(ELISA)測定卵巢癌患者、卵巢良性疾病患者和健康體檢者血清中IL-6和IL-8水平，探討其與臨床病理、化療療效以及預后的關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇南通市腫瘤醫院2009年月1月至2010年1月收治的40例卵巢上皮性惡性腫瘤(包括漿液性腫瘤，黏液性腫瘤，子宮內膜樣腫瘤)患者，年齡35～68歲，平均年齡52歲;均經病理證實且手術前未經過化療、放療、內分泌及生物治療。手術病理分期按FIGO(2006)標準，Ⅰ、Ⅱ期3例，Ⅲ、Ⅳ期37例。患者入院后均接受腫瘤細胞減滅手術+鉑類為主的化療。40例卵巢上皮性惡性腫瘤患者為卵巢癌組;40例卵巢良性疾病患者為卵巢良性疾病組，年齡36～69歲，平均年齡51歲;同時選擇健康體檢者40例作為對照組，年齡33～66歲，平均年齡49歲。3組患者的年齡、地區來源等具有可比性。所有研究對象近半年內未服用過免疫調節劑和激素類藥物。

1.2 標本收集及主要試劑 所有受試人員均晨起空腹抽取外周靜脈血，其中手術患者在術后2周留取第2次血清標本，化療患者在第2療程結束留取第2次血清標本，3000 r·min－1離心5～10 min ，分離血清，－80℃低溫冰箱凍存，供檢測用。IL-6和IL-8檢測均采用ELISA法，試劑購自上海信然生物技術有限公司，操作嚴格按說明書進行。

1.3 操作步驟 IL-6和IL-8檢測步驟類似，操作過程如下:1)加入稀釋好后的標準品50 μL、待測樣品50 μL于反應孔內，立即加入50 μL的生物素標記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育45 min;2)甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30 s，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作4次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數增加1次;3)每孔加入100 μL的親和鏈酶素－HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30 min;4)同步驟2);5)每孔加入底物A、B各50 μL，輕輕振蕩混勻，37℃溫育5 min。避免光照;6)取出酶標板，迅速加入50 μL終止液，立即測定結果;7)在450 nm波長處測定各孔的OD值。

1.4 統計學處理 采用SPSS 10.0進行數據分析，數據用表示，比較用t檢驗，檢驗水準α=0.05。

2 結果

2.1 3組患者血清IL-6、IL-8水平比較 對照組、卵巢良性疾病組及卵巢癌組患者血清IL-6水平分別為(49.96 ± 9.35)ng·L－1、(61.45 ± 10.53)ng·L－1、(161.57 ±6.87)ng·L－1，總體比較差異有統計學意義(P＜0.05);對照組、卵巢良性疾病組及卵巢癌組患者血清 IL-8 水平分別為 (53.56±11.59)ng·L－1、(78.58 ±9.67)ng·L－1、(222.52 ± 11.87)ng·L－1，總體比較差異有統計學意義(P＜0.05)。見表1。

表1 3組血清IL-6、IL-8水平化比較 ng·L－1

2.2 卵巢癌血清IL-6、IL-8水平與臨床分期的關系 卵巢癌患者血清IL-6、IL-8水平隨臨床分期增加而逐漸升高，各分期間的IL-6、IL-8水平比較差異均有統計學意義(P均＜0.05)。見表2。

表2 卵巢癌患者血清IL-6、IL-8水平與臨床分期的關系ng·L－1

2.3 血清IL-6、IL-8水平檢測與卵巢癌患者預后關系 40例卵巢癌患者中，16例復發或轉移。復發或轉移患者與穩定患者血清IL-6、IL-8水平比較差異均有統計學意義(P均＜0.05)。見表3。

表3 卵巢癌患者血清IL-6、IL-8水平與復發、轉移的關系ng·L－1

2.4 卵巢癌患者化療前后血清IL-6、IL-8水平變化 卵巢癌患者化療前IL-6、IL-8水平明顯高于化療后(P ＜0.05)。見表4。

表4 卵巢癌患者化療前后血清IL-6、IL-8水平ng·L－1

3 討論

卵巢癌的病因以及發病機制并不十分清楚，細胞因子的異常表達在上皮性卵巢癌發生、發展中的作用成為目前研究的熱點，有研究［1］認為卵巢癌與細胞因子失調關系密切。卵巢癌患者高表達IL-6和IL-8，IL-6水平升高與卵巢癌的預后不良有關，而IL-6和IL-8水平的同時升高則與化療初敏感性差有關。IL-6體外可阻止順鉑誘導的卵巢癌細胞凋亡，但不能改變抗凋亡Bcl-2蛋白的表達［7］。IL-6和IL-8均是細胞因子網絡中的多效應炎性介質，對相關細胞的生長、分化或基因表達都有一定影響。IL-6和IL-8等細胞因子對腫瘤轉移及腫瘤血管新生有作用，在許多腫瘤組織都已證實IL-6和IL-8基因表達活躍，各種因子分泌增加［8］。腫瘤細胞在自身生長過程中可直接刺激細胞分泌IL-6和IL-8［9］，IL-6還可增加卵巢癌細胞的黏附性、趨化性和(或)化學促進性以及總的侵襲力［10］。

Yamada等［11］發現IL-6水平的上升與疾病預后不良關系密切。腫瘤細胞能產生IL-8，刺激腫瘤新生血管生成，從而加速腫瘤的生長［12］。本文結果顯示，卵巢良性疾病組與對照組相比較lL-6和IL-8水平也明顯的增高;卵巢癌組較對照組以及卵巢良性疾病組lL-6和IL-8水平增高更明顯。卵巢癌血清IL-6、IL-8水平隨臨床分期而逐漸升高。復發或轉移者與穩定者相比血清IL-6、IL-8水平也有明顯的差異。Chan等［6］研究發現，多酚化合物可增加卵巢癌細胞CAOV-3對順鉑的敏感性，這種細胞產生高水平的IL-6，對順鉑的敏感性較差，多酚化合物可抑制CAOV-3細胞產生IL-6，提示順鉑與多酚化合物協同作用的可能機制是減少內源性IL-6的產生。本文結果顯示，卵巢癌患者化療前IL-6和IL-8水平明顯高于化療后(P＜0.05)。總之IL-6和IL-8在卵巢癌中高表達，在卵巢癌的發生、發展中起重要作用，同時還影響其對化療的敏感性。

［1］Penson RT，Kronish K，Duan Z，et al.Cytokines IL-1beta，IL-2，IL-6，IL-8，MCP-1，GM-CSF and TNFalpha in patients with epithelial ovarian cancer and their relationship to treatment with paclitaxel［J］.Int J Gynecol Cancer，2000，10(1):33 － 41.

［2］Toutirais O，Chartier P，Dubois D，et al.Constitutive expression of TGF-bêta1，interleukin-6 and interleukin-8 by tumor cells as a major component of immune escape in human ovarian carcinoma［J］.Eur Cytokine Netw，2003，14(4):246 －255.

［3］Wang Y，Yang J，Gao Y，et al.Regulatory effect of e2，IL-6 and IL-8 on the growth of epithelial ovarian cancer cells［J］.Cell Mol Immunol，2005，2(5):365 －372.

［4］王越，楊潔，高燕，等.雌激素與IL-6、IL-8在卵巢癌細胞中的調節作用［J］.中華微生物學和免疫學雜志，2008，28(9):799－804.

［5］Yang J，Wang Y，Gao Y，et al.Reciprocal regulation of 17beta-estradiol，interleukin-6 and interleukin-8 during growth and progression of epithelial ovarian cancer［J］.Cytokine，2009，46(3):382－391.

［6］Chan MM，Fong D，Soprano KJ，et al.Inhibition of growth and sensitization to cisplatin-mediated killing of ovarian cancer cells by polyphenolic chemopreventive agents［J］.J Cell Physiol，2003，194(1):63－70.

［7］Ishioka S，van Haaften-Day C，Sagae S，et al.Interleukin-6(IL-6)does not change the expression of Bcl-2 protein in the prevention of cisplatin-induced apoptosis in ovarian cancer cell lines［J］.J Obstet Gynaecol Res，1999，25(1):23 －27.

［8］佟書娟，王寧萍，尹清云.胃癌患者血清 TNF-α、IL-6、IL-8和sIL-2R的檢測及意義 ［J］.寧夏醫學雜志，2005，27(2):97－99.

［9］Ito R，Kitadai Y，Kyo E，et al.Interleukin 1 alpha acts as an autocrine growth stimulator for human gastric carcinoma cells［J］.Cancer Res，1993，53(17):4102 －4106.

［10］Obata NH，Tamakoshi K，Shibata K，et al.Effects of interleukin-6 on in vitro cell attachment，migration and invasion of human ovarian carcinoma［J］.Anticancer Res，1997，17(1A):337 －342.

［11］Yamada T，Hisanaga M，Nakajima Y，et al.Serum interleukin-6，interleukin-8，hepatocyte growth factor，and nitric oxide changes during thoracic surgery［J］.World J Surg，1998，22(8):783 －790.

［12］Smith DR，Polverini PJ，Kunkel SL，et，al.Inhibition of interleukin 8 attenuates angiogenesis in bronchogenic carcinoma［J］.J Exp Med，1994，179(5):1409 －1415.