膽結(jié)石患者外周血T淋巴細胞的變化及意義

李 平，葉 軍，張立新，丁小平，陳靜波，欒正云

(泰州市人民醫(yī)院普外科，江蘇 泰州 225300)

膽結(jié)石是一種常見病，可發(fā)生于膽囊、肝內(nèi)膽管或膽總管。其發(fā)病因素與種族、遺傳、地理、飲食等因素而不同[1-3]。細胞免疫功能在人體抗感染及內(nèi)環(huán)境自身穩(wěn)定中具有極其重要的作用。膽結(jié)石患者細胞免疫功能有顯著性變化，其局部病理改變與外周血T細胞的變化有明顯關(guān)系，我們對90例膽結(jié)石患者外周血T淋巴細胞亞群進行分析，以了解膽結(jié)石患者外周血T淋巴細胞亞群的變化及其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 非結(jié)石性膽囊炎23例、膽結(jié)石急性發(fā)作49例均來源于我院2011年6～12月門診及住院患者。其中膽囊炎組男14例，女9例，平均(37.8±19.3)歲；膽結(jié)石急性組男28例，女21例，平均(32.5±11.7)歲。正常對照組31例、膽結(jié)石未發(fā)作41例均來源于我院體檢中心。其中正常對照組男22例，女9例，平均(35.6±13.6)歲；膽結(jié)石未發(fā)作組男26例，女15例，平均(34.3±14.1)歲。

1.2 方法

1.2.1 儀器 FACSCalibur流式細胞儀 美國BD公司產(chǎn)品，用CELLQuest軟件(BD公司)獲取和分析實驗數(shù)據(jù)。鞘液用Systmex公司的Cellpack血細胞稀釋液。

1.2.2試劑 CD3-FITC/CD8-PE/CD45-PerCP/CD4-APC(Cat No：340499t)由BD公司提供。

1.2.3 流式細胞儀標本處理 所有受試者均于當天抽取外周靜脈血2 ml，EDTA-K2抗凝，標本在6 h之內(nèi)測定。將試管加入CD3-FITC/CD8-PE/CD45-PerCP/CD-APC 20 μl，將標本充分混勻，加50 μl標本，震蕩器上充分混勻，避光放置15 min；加入溶血素2 ml，充分震蕩，避光放置10 min。1 500 r/min離心5 min棄上清，加入生理鹽水2 ml震蕩，1 500 r/min離心5 min棄上清，加入生理鹽水100μl，充分震蕩混勻，待測。

1.2.4 流式細胞儀器設(shè)置及數(shù)據(jù)分析 用FACSComp調(diào)整儀器FSC、SSC、FL1、FL2、FL3、FL4的電壓及補償。用CELLQuest軟件獲取20 000個淋巴細胞，分析CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+T細胞占淋巴細胞的百分比。

1.3 統(tǒng)計學處理 采用SigmaPlot12.0軟件進行統(tǒng)計分析，兩組樣本間采用t檢驗，三組樣本間比較采用One Way ANOVA Rank Sum Test分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

正常對照組、膽囊炎組、膽結(jié)石急性組CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+T細胞比較差異均無統(tǒng)計學意義(P=0.597，P=0.542，P=0.705)；與正常對照組比較，急性組、未發(fā)作組CD3+T細胞差異均有統(tǒng)計學意義(t=4.611，P<0.01；t=7.022，P<0.01)；膽結(jié)石急性組、膽結(jié)石未發(fā)作組CD3+CD8+T細胞差異亦有統(tǒng)計學意義(t=3.823，P<0.01；t=2.700，P=0.008)；膽結(jié)石急性組、膽結(jié)石未發(fā)作組CD4/CD8細胞差異均無統(tǒng)計學意義(t=1.611，P=0.110；t=2.207，P=0.058)；膽結(jié)石急性組和膽結(jié)石未發(fā)作組比較CD3+、CD3+CD8+T差異有統(tǒng)計學意義(t=12.896，P<0.01；t=7.181，P<0.01)，CD4/CD8比較差異亦有統(tǒng)計學意義(t=4.229，P<0.01)，見表1。

表1 正常對照組、膽囊炎組、膽結(jié)石組T淋巴細胞亞群的比較（±s）

表1 正常對照組、膽囊炎組、膽結(jié)石組T淋巴細胞亞群的比較（±s）

注：與正常對照組比較，#P<0.01；與正常對照組比較，*P<0.01；與急性組比較，△P<0.01。

項目 例數(shù)CD3+T細胞CD3+CD4+T細胞CD3+CD8+T細胞正常對照膽囊炎組膽結(jié)石組膽結(jié)石急性組膽結(jié)石未發(fā)作組31 23 90 49 41 70.71±5.75 71.61±9.69 69.70±9.08 76.44±5.11#61.66±5.51#△37.23±5.73 37.73±9.37 36.18±6.38 37.05±6.86 35.13±5.65 28.40±4.15 30.44±13.21 29.72±9.52 34.64±9.17#23.83±5.95*△

3 討論

白細胞是人體的免疫細胞，其通過不同方式、不同機制消滅病原體，消除過敏原和產(chǎn)生免疫反應(yīng)、產(chǎn)生抗體。白細胞根據(jù)細胞的形態(tài)特征可分為粒細胞、單核細胞和淋巴細胞。淋巴細胞是人體免疫系統(tǒng)的重要組成部分，它不僅具有識別抗原和排除抗原能力，而且對免疫應(yīng)答起重要調(diào)節(jié)作用。其主要包括T淋巴細胞(CD3+)、B淋巴細胞和自然殺傷細胞。T淋巴細胞中包括誘導(dǎo)性/輔助性T細胞(CD3+CD4+)和抑制性/細胞毒性T細胞(CD3+CD8+)。CD3+CD4+T細胞為免疫應(yīng)答中的主要反應(yīng)細胞，CD3+CD8+T細胞可對靶細胞產(chǎn)生細胞介導(dǎo)的細胞毒作用，同時對CD3+CD4+T細胞具有調(diào)節(jié)性抑制作用。CD3+CD4+T細胞與CD3+CD8+T細胞的作用相互平衡，導(dǎo)致正常免疫應(yīng)答。CD3+CD4+T細胞和CD3+CD8+T細胞的失平衡導(dǎo)致免疫病理的發(fā)生。

膽結(jié)石的病因迄今尚未完全明了，一般認為該病是多種因素綜合作用的結(jié)果[4-5]。周玉寶等[6]報道在正常膽囊組織中未見免疫復(fù)合物(IC)，在非結(jié)石性慢性膽囊炎中有l(wèi)例有IC沉積，而83%的膽囊結(jié)石患者可見膽囊膜基底部有IC沉積。IC在損傷基底膜處的沉積以及膽囊結(jié)石組的黏膜損傷更為嚴重，提示膽石病(尤其膽囊結(jié)石)發(fā)生在膽囊的病理改變不同于普通的慢性炎癥，可能有體液免疫應(yīng)答的參與[7-8]。肝膽管結(jié)石時，肝匯管區(qū)的T細胞明顯高于正常，并大量圍繞在小膽管、動脈、靜脈周圍，提示細胞免疫反應(yīng)介入了該病的病理過程。

結(jié)石的產(chǎn)生會出現(xiàn)長期的炎癥刺激，膽道引流不暢及細菌毒素的作用，使膽道上皮細胞的抗原組分暴露，加之變性的膠原組織作用，使T淋巴細胞參與炎癥免疫應(yīng)答。這些T淋巴細胞一部分在炎癥局部參與炎癥反應(yīng)，另一部分參與全身血流循環(huán)。由于參加淋巴細胞再循環(huán)的細胞大多為T淋巴細胞，因此血中以T淋巴細胞為主活化的淋巴細胞以及記憶細胞順淋巴再循環(huán)再次進入肝組織局部，再次增殖、分化變?yōu)樾?yīng)細胞，加重局部炎癥反應(yīng)。不斷的炎癥刺激，使外周血中活化的并具增殖能力的T淋巴細胞持續(xù)增高，形成惡性循環(huán)導(dǎo)致膽結(jié)石患者組織局部的病變不斷加重。我們對23例非結(jié)石性膽囊炎、90例膽結(jié)石患者外周血T淋巴細胞亞群分析顯示，膽囊炎和膽結(jié)石患者外周血中T淋巴細胞各種亞群組份與正常對照組比較差異均無統(tǒng)計學意義，但膽結(jié)石未發(fā)作組CD3+、CD3+CD8+T細胞均顯著低于正常對照組，而急性組CD3+、CD3+CD8+T細胞均顯著高于正常對照組及慢性組。可能是結(jié)石未發(fā)作組，長期的慢性炎癥狀態(tài)，使T細胞和CD3+CD8+T細胞長期募集到炎癥部位，使機體循環(huán)的CD3+CD8+T細胞減少。而在結(jié)石急性期，機體應(yīng)激性的使CD3+CD8+T細胞升高，免疫應(yīng)答增強，從而加重炎癥的狀態(tài)。提示外周血中CD3+CD8+T細胞對膽結(jié)石患者炎癥狀態(tài)起重要作用，可能直接影響患者的臨床表現(xiàn)，通過測定膽結(jié)石患者外周血循環(huán)可了解病變局部的免疫反應(yīng)和病理改變的趨勢。

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