葛根素對(duì)短暫性前腦缺血大鼠學(xué)習(xí)能力及神經(jīng)干細(xì)胞增殖的影響

陜西省人民醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科（西安710068） 李志偉 穆 英 郭荷娜 郭生龍 楊 謙

神經(jīng)干細(xì)胞用于治療缺血性腦血管病已成為近年研究熱點(diǎn)，外源性神經(jīng)干細(xì)胞移植存在倫理障礙、取材不足等確定，影響其應(yīng)用。研究發(fā)現(xiàn)雌激素能夠促進(jìn)內(nèi)源性神經(jīng)干細(xì)胞增殖和分化［1］。但長(zhǎng)期應(yīng)用雌激素存在致癌可能，制約其臨床應(yīng)用。葛根素臨床應(yīng)用廣泛，且具有一定的雌激素樣活性［2］，且對(duì)缺血性腦血管病有較明確的治療效果。本研究探討了葛根素對(duì)前腦缺血大鼠空間學(xué)習(xí)能力及神經(jīng)干細(xì)胞增殖的影響。

材料和方法

1 材 料 健康雌性SD大鼠60只，體重240～260g（由西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供），均行雙側(cè)卵巢切除術(shù)。隨機(jī)分為A、B兩組。

2 方 法 Aa組為空白對(duì)照組：予腹腔注射生理鹽水；Ab組為陽(yáng)性對(duì)照組：予腹腔注射葛根素注射液。2周后，兩組參照Edward Preston低血壓聯(lián)合雙側(cè)頸總動(dòng)脈夾閉10min法造短暫性前腦缺血模型，術(shù)后比較兩組大鼠Morris水迷宮找到平臺(tái)的潛伏期時(shí)間及雙側(cè)SVZ區(qū)BrdU陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)。

B組均造前腦缺血模型，術(shù)后分兩組：Ba組：空白對(duì)照組：腹腔注射生理鹽水；Bb組：陽(yáng)性對(duì)照組：腹腔注射丹參酮注射液。2周后比較兩組大鼠Morris水迷宮找到平臺(tái)的潛伏期時(shí)間雙側(cè)SVZ區(qū)BrdU陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)。

3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 所得數(shù)據(jù)用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行兩樣本t檢驗(yàn)，檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)α＝0.05。

結(jié) 果

A組中腹腔注射葛根素組大鼠在腦缺血后Morris水迷宮找到平臺(tái)的潛伏期時(shí)間較生理鹽水組明顯縮短，且雙側(cè)SVZ區(qū)BrdU陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)也明顯增多，具有顯著性差異（P＜0.001），見(jiàn)表1。

表1 A組兩個(gè)亞組大鼠缺血后學(xué)習(xí)能力及BrdU陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)比較

B組中腹腔注射葛根素組大鼠在干預(yù)2周后Morris水迷宮找到平臺(tái)的潛伏期時(shí)間較腹腔注射生理鹽水組明顯縮短，雙側(cè)SVZ區(qū)BrdU陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)也明顯高于生理鹽水組，具有顯著性差異（P＜0.001），見(jiàn)表2。

表2 三組兩個(gè)亞組大鼠缺血后學(xué)習(xí)能力評(píng)分及BrdU陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)比較

討 論

葛根素是從豆科植物野葛根的干燥根中提取的單體－異黃酮化合物的主要成分［3］。本研究發(fā)現(xiàn)在大鼠腦缺血前后應(yīng)用葛根素處理均能縮短Morris水迷宮找到平臺(tái)的潛伏期時(shí)間，并增加其雙側(cè)SVZ區(qū)BrdU陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)。

神經(jīng)干細(xì)胞具有增殖和分化為神經(jīng)細(xì)胞的能力，外源性神經(jīng)干細(xì)胞移植可以改善缺血后大鼠神經(jīng)功能［4］。但該方法存在神經(jīng)干細(xì)胞的提純、移植排斥反應(yīng)、倫理道德問(wèn)題等，限制其廣泛臨床應(yīng)用。內(nèi)源性神經(jīng)干細(xì)胞的增殖和分化受多種因素影響，既往研究發(fā)現(xiàn)雌激素能激活腦內(nèi)神經(jīng)干細(xì)胞，促進(jìn)其增殖和分化［1］。腦缺血本身也可以促進(jìn)內(nèi)源性神經(jīng)干細(xì)胞的增殖，既往研究發(fā)現(xiàn)短暫性全腦缺血和局灶性缺血都能促進(jìn)SVZ區(qū)神經(jīng)干細(xì)胞的增殖。葛根素為臨床上廣泛應(yīng)用的中成藥物，具有明確的雌激素樣活性［2］。在缺血性腦血管病急性期葛根素對(duì)腦組織有較好的保護(hù)作用［5］，而在急性期過(guò)后葛根素可以明顯改善缺血性腦血管病的預(yù)后［6］。本研究發(fā)現(xiàn)葛根素預(yù)處理能改善缺血后大鼠學(xué)習(xí)能力及增加雙側(cè)SVZ區(qū)神經(jīng)干細(xì)胞的增殖；去卵巢大鼠腦缺血后雙側(cè)SVZ區(qū)神經(jīng)干細(xì)胞明顯增多，與既往研究結(jié)果相同。缺血后應(yīng)用葛根素也能顯著改善其學(xué)習(xí)能力，同時(shí)能進(jìn)一步促進(jìn)雙側(cè)SVZ區(qū)神經(jīng)干細(xì)胞的增殖。認(rèn)為葛根素能通過(guò)促進(jìn)內(nèi)源性神經(jīng)干細(xì)胞增殖從而達(dá)到改善大鼠腦缺血后神經(jīng)功能的作用。

［1］ Tanapat P，Hastings NB，Rees AJ，et al .Estrogen stimulates a transient increase in the number of new neurons in the dentate gyrus of the adult female rat［J］.J Neurosci，1999，19：8792－5801

［2］ 鄭高利，張?jiān)佬牛嵔?jīng)偉.葛根素和葛根總異黃酮的雌激素樣活性［J］.中藥材，2002，25（8）：566－568.

［3］ 趙 凱，葛根素治療腦梗賽41例［J］.陜西中醫(yī)，2011，32（10）：1367－1368.

［4］ 劉繼云，魏會(huì)平，李繼紅.骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)為神經(jīng)樣細(xì)胞后對(duì)大鼠腦缺血模型修復(fù)的研究［J］.陜西醫(yī)學(xué)雜志，2007，8：949－952.

［5］ 潘洪平，楊嘉珍.葛根素注射液對(duì)急性腦缺血模型大鼠腦細(xì)胞損傷的保護(hù)作用［J］.中國(guó)中藥雜志，2005，30）：457－459.

［6］ 武祥順，倪崇松.葛根素治療缺血性腦卒中臨床觀察［J］.現(xiàn)代中西結(jié)合雜志，2003，（21）：2295.