Bax、Livin和Survivin在非小細胞肺癌組織中的表達

韓寶林 李立芳 武 陽

肺癌是威脅人類健康最主要的惡性腫瘤之一，病理類型中非小細胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）占絕大部分。肺癌的發生發展涉及多因素的作用、多步驟的形成和多基因的參與，是綜合作用的結果。在這個多階段的演進過程中，細胞增殖和凋亡調控異常起著重要的作用。Bax、Livin和Survivin是3個重要的細胞凋亡調控因子。它們在NSCLC組織中存在不同程度的異常表達，但尚少見有關聯合研究三者在NSCLC組織中的表達及三者之間相互關系的報道。本研究通過檢測NSCLC組織及正常肺組織中Bax、Livin和Sur?vivin蛋白的表達情況，探討其相互之間以及與臨床病理因素的關系，為臨床上NSCLC的診治提供進一步的理論基礎。

1 資料與方法

1.1 一般資料 隨機抽取2006年9月—2008年5月NSCLC切除組織石蠟標本40例為NSCLC組，經有經驗的病理科醫師復習閱片后重新制備切片。所有患者術前均未行放、化療及其他抗腫瘤治療。其中男36例，女4例，中位年齡62歲（38~81歲），吸煙者30例。中心型14例，周圍型26例；腫瘤直徑≤3 cm者11例，>3 cm者29例；鱗癌29例，腺癌11例；中、高分化癌28例，低分化12例；有淋巴結轉移21例，無淋巴結轉移19例。TNM分期：Ⅰ、Ⅱ期27例，Ⅲ、Ⅳ期13例。正常肺組織石蠟標本10例作為對照組。

1.2 方法 采用免疫組化非生物素二步法（PV），光鏡下觀察結果，用已知陽性組織切片做陽性對照，用PBS替代一抗做空白對照。結果判定參考Falleni等[1]的半定量計數方法，根據腫瘤組織細胞的染色率和染色強度進行判定。選10個高倍視野，計數至少500個腫瘤細胞，取其平均值計算陽性細胞百分率。腫瘤細胞陽性率≤5%為0分，6%~25%為1分，26%~50%為2分，51%~75%為3分，>75%為4分。根據染色強度分為4級，0分：無染色；1分：淡黃色；2分：黃色；3分：棕黃色或棕褐色。陽性細胞率與染色強度得分相乘為每一例積分。規定0~1分為陰性（-），積分≥2為陽性，其中2~4分為弱陽性（+），5~8分為中度陽性（++），9~12分為強陽性（+++）。

1.3 統計學方法 應用SPSS 12.0統計軟件對結果進行分析，計數資料組間比較采用卡方檢驗，相關性采用校正卡方檢驗、Spearman等級相關分析，以α=0.05為檢驗水準。

2 結果

2.1 Bax、Livin和Survivin在2組中的表達 對照組與NSCLC組中Bax、Livin和Survivin陽性表達率比較差異均有統計學意義（P<0.05），見表1。

Table 1 The positive expression of Bax,Livin and Survivin in two groups表1 2組Bax、Livin和Survivin的陽性表達情況 例（%）

2.2 Bax、Livin和Survivin蛋白表達與NSCLC臨床病理參數的關系 有無腫瘤淋巴結轉移和不同臨床TNM分期Bax、Livin的表達差異有統計學意義（P<0.05），不同腫瘤病理分化程度Survivin的表達差異有統計學意義（P<0.05）。患者不同的性別、年齡、吸煙史、腫瘤部位、大小的Bax、Livin和Survivin的表達差異無統計學意義（P>0.05），見表2。

2.3 Bax、Livin和Survivin在NSCLC組織中的相關性 NSCLC中Bax和Livin的表達呈負相關（rs=-0.429 4，P<0.05），Bax和Survivin的表達，Livin和Survivin的表達均無相關性（rs分別為-0.050 6，0.104 8，均P>0.05）。

Table 2 Comparison of expression of Bax,Livin and Survivin and clinicopathological factors in patients with non-small cell lung cancer表2 Bax、Livin和Survivin蛋白表達與NSCLC臨床病理參數的關系 例（%）

3 討論

肺癌的發生與癌基因突變、細胞異常增殖和凋亡調控機制失常等有關，機體細胞凋亡受一系列因子的正性或負性調控，其中較為明確的有Bcl-2家族（如Bax、Bcl-2）、IAP家族（如Livin、Survivin）和Caspases家族（Caspases-3、7、9）等，研究Bax、Livin和Survivin在NSCLC中的表達對其診治有著重要的意義。

Bax是bcl-2家族中重要一員，為凋亡促進基因，Bax通過其自身形成Bax同二聚體和（或）與Bcl-2形成Bax-Bcl-2異二聚體，抑制Bcl-2功能，加速細胞死亡[2]。Bax的異常表達與NSCLC及其他多種腫瘤相關，但其在NSCLC中的表達各家報道結果并不一致。王鴻程等[3]報道Bax蛋白在肺良性病變和NSCLC中表達差異沒有統計學意義。佟旭等[4]則報道Bax在NSCLC組織中低表達，與其在正常肺組織中的表達比較差異有統計學意義。Wang等[5]也發現NSCLC組織Bax蛋白的表達明顯低于正常肺組織。本研究正常肺組織及NSCLC組織中Bax的陽性表達率高于正常肺組織，與上述文獻結論一致。Bax在NSCLC中表達下調提示其可能在肺癌的發生、發展中起著重要的作用，可用于NSCLC的檢測。本組研究還發現有無腫瘤淋巴結轉移、不同臨床TNM分期Bax的表達差異有統計學意義，提示Bax的表達對評估NSCLC的預后也有一定意義，支持Bax表達的下降，腫瘤細胞的凋亡抑制作用減弱，侵襲作用增強的觀點。

Survivin是迄今發現的作用最強的凋亡抑制因子，它可以通過有絲分裂促進細胞增殖,抑制細胞凋亡。研究表明，Sur?vivin在NSCLC組織高表達，而在癌旁組織或正常組織中不表達或低表達，提示該基因對NSCLC的發生發展起重要作用，可用于NSCLC的診斷[6-7]。Survivin在正常組織中低表達或不表達的特性也有望使其成為肺癌基因治療的新靶點。Sur?vivin的表達還對NSCLC預后的評估也有一定的價值[8-11]。石敏等[10]研究發現Survivin在Ⅲ~Ⅳ期肺癌組織中表達率顯著高于其在Ⅰ~Ⅱ期肺癌組織中的表達。朱叢中等[11]研究發現Survivin的表達與組織學分級、臨床分期和有無淋巴結轉移有關。本研究結果中正常肺組織及NSCLC組織中Survivin的陽性表達率分別為0和50.00%，中高分化與低分化患者的Survivin表達率分別為39.29%、75.00%，也提示Survivin具有評估預后的潛在價值。

Livin是與腫瘤發生發展密切相關的凋亡抑制蛋白家族中一個較新發現的成員，在多種腫瘤中高表達，而相應的正常組織中卻沒有或者僅有極低水平的表達[12-13]。本研究中Livin在正常肺組織及NSCLC組織中的表達率分別為10.00%和65.00%，表明Livin高表達與NSCLC的發生、發展密切相關，由于其表達的特異性可用于NSCLC的診斷并有望成為NSCLC治療的新靶點。此外本組研究結果還提示Livin在NSCLC組織中表達陽性率隨著淋巴結轉移、臨床TNM分期的進展而升高，提示其可能對NSCLC的預后評估有一定價值。

本組研究中Bax和Livin在NSCLC組織中的表達呈負相關，機制可能為：Bax和Livin在細胞凋亡調控過程中存在某些共同途徑，如Livin可與Caspase-3、Caspase-7、Caspase-9結合，而Bax可能通過Caspase-3這個作用點間接對抗Livin的抗凋亡作用；另外是否存在Bax直接作用于Livin抑制其抗凋亡作用的途徑，目前尚少見相關報道。Survivin與Livin、Bax的表達均無相關性，提示它們可能存在不同作用途徑，具體機制需進一步深入研究。Bax和Livin在NSCLC組織中的表達的負相關性為研究者今后開展聯合檢測用于NSCLC的診斷和評估預后提供了可能。Bax、Livin和Survivin在NSCLC的診斷和預后評估中的價值仍有待進一步深入研究。

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