云南引種瑪咖對小鼠非特異性免疫、抗疲勞、耐缺氧功能的影響*

文金隆，何芳雁，韓春妮，李 艷，代 蓉，林 青

(云南中醫學院，云南昆明 650500)

瑪咖 (Lepidium meyenii Walp.)是原產于秘魯海拔3500m以上安第斯山脈的一種十字花科獨行菜屬植物，其栽培和食用歷史悠久，在安第斯山脈地區瑪咖塊根作為食物，也作為傳統藥物使用［1］?，F代研究表明，瑪咖有多種營養成分，具有抗疲勞、改善性功能、抗氧化、緩解更年期綜合癥、抑制癌細胞、增加骨密度等多種功效，近年來因其具有抗疲勞及性保健等特殊功效已受到世界保健食品行業的廣泛關注［2］。由于我國瑪咖產品及原料均主要來源于國外，為進一步開發利用瑪咖，本項目組2004年從秘魯引種栽培，目前已在云南種植成功3種色型的瑪咖品種，并形成了一定規模和產量。營養成分的化學成份研究表明云南栽培瑪咖含有的營養成分類型與秘魯產瑪咖無明顯區別，但3種色型瑪咖的總生物堿含量有顯著差異，為探究生物堿含量與功效之間是否有相關性，本研究根據瑪咖傳統功效及近年的活性研究成果，按照《保健食品功能評價程序與經驗方法規范》［3］，觀察云南栽培的紫、白、黃3種色型瑪咖對小鼠非特異性免疫、抗疲勞、耐缺氧功能的影響，比較3種色型瑪咖的功效特點，為其開發保健食品和進一步研究提供實驗依據。

1 實驗材料

1.1 動物

昆明種小鼠，清潔級，雌雄各半，體重18～22g，均購至四川省醫學科學院實驗動物研究所，合格證號:SCXK(川)2008－24，生產批號:Dossy－2010－12。

1.2 受試物、藥品和試劑

瑪咖:塊根顏色分別為紫色、黃色、白色的3種色型瑪咖原料均來源于中國林科院資源昆蟲研究所在云南省的引種栽培試驗地，自然曬干后每種隨機取樣1kg，粉碎后過100目篩，常溫下密封避光保存，臨用前按劑量現配至所需濃度;匹多莫德:太陽石 (唐山)藥業有限公司，批號100506;非諾貝特膠囊:法國利博福尼制藥公司，批號13523;注射用環磷酰胺:百特醫療貿易有限公司，批號07101621;一得閣墨汁:北京一得閣墨業有限責任公司。

1.3 儀器

瑞士普利賽斯XS125A型分析天平;Hitachi Koki Co.，Ltd CF16RXⅡ型冷凍高速離心機;瑞士Tecan公司Infinite M200 PRO型酶標儀。

2 方法

2.1 碳粒廓清實驗

［4］方法，設正常組、模型組、匹多莫德對照組和紫、白、黃瑪咖組，將小鼠按體重隨機分組，每組20只，雌雄各半，所有動物按0.2mL/10g體重灌胃給予受試物，其中正常組和模型組灌胃給予蒸餾水，匹多莫德組按1.04g/kg體重、瑪咖組5.0g/kg體重，連續灌胃14d，第11天除正常組腹腔注射等量生理鹽水外，其余各組小鼠按50mg/kg(0.1mL/10g)體重注射環磷酰胺，連續給藥3d，至14d末次灌胃30min后，各組小鼠按0.1mL/10g體重尾靜脈注入經生理鹽水稀釋20倍并經過濾的一得閣墨汁，2min(t1)和10min(t2)時分別從眼底靜脈叢定量取血20μL迅速加到2mL經離心的0.1%Na2CO3溶液中，振搖均勻后取150μL加到96孔酶標板上600nm波長處測定吸光度值OD1(2min取血所測吸光度值)和OD2(10min取血所測吸光度值)，以0.1%Na2CO3溶液調零，取血后的小鼠迅速解剖取肝臟和脾臟稱重，按下式計算碳粒廓清指數K和校正吞噬指數α。K=(lgOD1－lgOD2)/(t1－t2)α=K1/3×體重/(肝重+脾重)

2.2 抗疲勞實驗

參考文獻［5］方法，實驗前預先對所有正常小鼠進行負重游泳篩選，尾根部負荷5%體重的馬桶膠，水深 25cm，水溫 (12±0.5)℃，加入0.3mL表面活性劑，記錄小鼠自落水開始至鼻孔沉入水面下5s不浮出水面的時間作為小鼠游泳時間(min)，篩選出游泳時間相近的小鼠按性別隨機分配到正常組和紫、白、黃瑪咖組，灌胃劑量和方法同2.1，連續給藥16d，于末次灌胃30min后負重游泳，記錄游泳時間。

2.3 常壓耐缺氧實驗

參考文獻 ［6－7］方法，設正常組和紫、白、黃瑪咖組，灌胃劑量和方法同2.1，連續給藥19d，于末次灌胃30min后將小鼠放入盛有5g鈉石灰的150mL磨口廣口瓶中，涂適量凡士林密封瓶口，以呼吸停止為標準，記錄小鼠自進入廣口瓶到呼吸停止的時間。

2.4 統計方法

數據符合正態分布、方差齊者用one－factor ANOVA，組間比較用LSD檢驗;數據符合正態、方差不齊者用Tamhane'T2檢驗;數據不符合正態者用秩和檢驗。

3 結果

3.1 碳粒廓清實驗結果

表1 紫、白、黃瑪咖對環磷酰胺誘導免疫低下小鼠碳粒廓清能力的影響 ()

表1 紫、白、黃瑪咖對環磷酰胺誘導免疫低下小鼠碳粒廓清能力的影響 ()

與正常組相比:△△△P ＜0.001，△△P ＜0.01; 與模型組相比:＊＊P ＜0.01，*P ＜0.05(下同)

由表1可見，與正常對照組相比，模型組校正吞噬指數α值明顯低于正常組 (P＜0.001)，表明用此劑量的環磷酰胺能造成小鼠非特異性免疫低下模型，與模型組相比，紫、白、黃瑪咖均能顯著提高該模型小鼠吞噬指數α(P＜0.01)。

3.2 抗疲勞實驗結果

表2 紫、白、黃瑪咖對小鼠負重游泳時間的影響 ()

表2 紫、白、黃瑪咖對小鼠負重游泳時間的影響 ()

與正常組相比:△△△P ＜0.001;△△P＜0.01

由表2可見，與正常對照組相比，紫、白、黃瑪咖均能明顯延長小鼠負重游泳的時間 (P＜0.01或P＜0.001)，紫瑪咖的延長率最高，其次是黃瑪咖。

3.3 常壓耐缺氧實驗結果

表3 紫、白、黃瑪咖對小鼠常壓缺氧存活時間的影響 ()

表3 紫、白、黃瑪咖對小鼠常壓缺氧存活時間的影響 ()

與正常組相比:△△△P ＜0.001;△△P＜0.01

由表3可見，與正常對照組相比，紫、黃瑪咖均能明顯提高小鼠常壓下缺氧存活時間 (P＜0.001)，紫瑪咖組的延長率高于黃瑪咖，白瑪咖未見明顯影響 (P＞0.05)。

4 討論

近年來我國居民慢性非傳染性疾病成為主要健康問題，因此開發具有確切功效的保健食品成為目前研究的熱點?，斂б蚓哂卸喾N功效和藥食兩用的特性成為具有良好保健食品開發前景的新資源，2005年中國林業科學研究院資源昆蟲研究所據調查研究結果選取了云南幾個山區成功栽培并繁殖了秘魯瑪咖多代，形成一定的規模和產量。但種植環境的改變是否會影響或改變瑪咖的化學成分和功效，是云南瑪咖是否能作為保健品開發利用的關鍵。因此本研究依據中國衛生部2003年發布的《保健食品檢驗與評價技術規范》，選擇了非特異性免疫、抗疲勞、耐缺氧方面的功能學評價指標對云南引種的3種色型瑪咖作了初步研究。

機體抗疲勞、耐缺氧、提高免疫功能，這些抗應激作用能使機體在各種不利的內外環境條件下提高生存時間和生存率。小鼠碳廓清實驗中所測得的吞噬指數 (α)反映單核－巨噬細胞的吞噬能力，而單核巨噬細胞的吞噬功能是衡量機體非特異性免疫功能的指標之一。本實驗結果表明3種色型瑪咖均能顯著提高免疫低下小鼠的非特異性免疫功能，提示云南引種瑪咖具有開發為增強抵抗力、抗感染、抗腫瘤以及維持自身生理平衡與免疫有關的保健食品的可能性;疲勞是防止機體發生機能衰竭而產生的一種保護性反應，運動耐力的提高是抗疲勞能力加強最有力的宏觀表現，目前多采用小鼠游泳實驗評價運動耐力。研究表明3種色型瑪咖均能明顯提高小鼠游泳耐力，可增強動物在體力負荷時的承受能力，具有顯著的抗運動性疲勞作用。瑪咖作為新資源食品，在消除疲勞、改善運動能力實踐中具有獨特的優勢和潛力;缺氧是高原、航空、潛水等特殊環境最普遍的應激因素，過強或長期的缺氧應激影響機體氧化供能，最終導致機體的心、腦等主要器官缺氧供能不足而死亡。實驗研究表明，紫瑪咖和黃瑪咖具有耐缺氧的功效，可減弱缺氧對機體的損傷，使機體在缺氧環境中盡可能維持較正常的生理機能。上述實驗結果表明，云南引種的3種色型瑪咖與原產秘魯的瑪咖一樣具有增強非特異性免疫、抗疲勞、耐缺氧的功效，且發現不同色型瑪咖在以上功能評價實驗中表現出一定的差異，紫色瑪咖功效優于黃色和白色瑪咖，本課題組前期曾報道紫色瑪咖總生物堿含量高于黃色和白色瑪咖。因而我們認為，3種色型瑪咖中紫、黃瑪咖具有開發以上保健功能的優勢，不同色型瑪咖功效的差異可能和總生物堿含量相關，其確切機制有待于進一步實驗證實。

［參考文獻］

［1］胡天祥.南美高原植物瑪咖的研究進展 ［J］.中醫臨床研究，2011，3(19):116－117.

［2］李磊，周昇昇.瑪咖的食品營養與安全評價及開發前景 ［J］.食品工業科技，2012，33(5):376－378.

［3］中華人民共和國衛生部.保健食品檢驗與評價技術規范實施手冊 ［S］.2003版.

［4］陳奇.中藥藥理實驗方法學 ［M］.第2版，北京:人民衛生出版社，2006:759－761.

［5］余龍江，金文聞.瑪咖 (Lepidium meyenii.)干粉的營養成分及抗疲勞作用研究 ［J］.食品科學，2004，25(1):164－166.

［6］魏偉，吳希美，李建元.藥理實驗方法學 ［M］.4版，北京:人民衛生出版社，2010:1025.

［7］王曉波，襲榮剛，姚文，等.耐力膠囊抗疲勞耐缺氧作用的實驗研究 ［J］.解放軍藥學學報，2011，27(2):122－127.