原子熒光法測定桑蟬止咳方中甘草砷汞的含量*

蒲星宇，徐靜逍，畢 云，熊麗娟，魏丹霞

(1.云南省藥物研究所，云南昆明 650111;2.云南中醫(yī)學(xué)院，云南昆明 650500;3.昆明醫(yī)科大學(xué)，云南昆明 650500;4.昆明市中醫(yī)醫(yī)院，云南昆明 650011)

甘草為豆科植物甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch.、脹果甘草Glycyrrhiza inflata Bat.或光果甘草Glycyrrhiza glabra L.的干燥根。具有補(bǔ)脾益氣，清熱解毒，祛痰止咳，緩急止痛，調(diào)和諸藥等功效。桑蟬止咳方是昆明醫(yī)科大學(xué)在研課題六類新藥臨床前研究項(xiàng)目中的處方，臨床用于治療燥熱型咳嗽。甘草作為方中的重要組成藥物，起著祛痰止咳及處方佐使藥的雙重功效。隨著藥材種植過程中農(nóng)藥化肥的廣泛使用及環(huán)境污染，重金屬污染已經(jīng)嚴(yán)重影響到了藥品質(zhì)量與安全性評價，特別是其中所含的砷和汞等元素對人體有害，在桑蟬止咳方的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制定和質(zhì)量監(jiān)控中，對其重金屬含量水平的控制及檢測尤為重要。本實(shí)驗(yàn)通過原子熒光法測定桑蟬止咳方中原料甘草的砷和汞含量，成本低廉，方法準(zhǔn)確可靠。

1 儀器和試劑

1.1 儀器

FA2004N電子分析天平，上海精密科學(xué)儀器有限公司;Speedwave MWS－3無接觸紅外測溫微波壓力消解系統(tǒng)，德國 BERGHOF公司;AFS－3100雙道原子熒光光度計(jì)，北京科創(chuàng)海光儀器有限公司;AS－10自動進(jìn)樣器，編號91929，北京科創(chuàng)海光儀器有限公司;IFS－30雙泵斷續(xù)流動系統(tǒng)，編號9189，北京科創(chuàng)海光儀器有限公司;As空心陰極元素?zé)簦幪朅H951244，北京科創(chuàng)海光儀器有限公司;Hg空心陽極元素?zé)簦幪朆H0A2371，北京科創(chuàng)海光儀器有限公司。Easy－Q DI8純水器 (上海生儀)，Milli－Q Advantage A10(Millipore公司)，可調(diào)式電熱板 (型號:ML—3—4，北京市永光明醫(yī)療儀器廠)。10—100μL移液槍(北京大龍興創(chuàng)實(shí)驗(yàn)儀器有限公司)。所有的玻璃器皿、容器、量具都用20%硝酸浸泡24h以上，取出后用去離子水沖洗干凈備用。

1.2 試劑

純氬，99.99%，昆明梅塞爾氣體產(chǎn)品有限公司;硼氫化鈉 (AR)，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號:F20051130;氫氧化鈉 (GR)，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號:F20081021;鹽酸(GR)，西隴化工股份有限公司，批號:1004262;硝酸 (GR)重慶川東 (集團(tuán))有限公司化學(xué)試劑廠，批號:20101008;硫脲 (AR)，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號:20090212;抗壞血酸(AR)，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號:20080107。實(shí)驗(yàn)用水為超純水。1000μg/mL砷(As)標(biāo)準(zhǔn)液 ［GBW(E)080586 SDS332山東省冶金科學(xué)院］、1000 μg/mL汞 (Hg)標(biāo)準(zhǔn)液［GBW(E)ZBR802濟(jì)南眾標(biāo)科技有限公司］。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)品的配置

取砷標(biāo)準(zhǔn)品母液用2%的硝酸分別配置為5μg/L，10μg/L，15μg/L，20μg/L 的標(biāo)準(zhǔn)品備用;再取汞標(biāo)準(zhǔn)品母液用2%的硝酸分別配置為0.5μg/L，1μg/L，1.5μg/L，2μg/L的標(biāo)準(zhǔn)品備用。

1.4 還原劑和載液的配制

用去離子水配制含2%NaBH4和0.5%NaOH的溶液作為還原劑，再用去離子水配制5%的鹽酸溶液作為載液。

1.5 藥材

甘草購于云南藥材有限公司中藥飲片廠;批號0902127;產(chǎn)地:內(nèi)蒙古。

2 樣品的前處理

精密稱取供試品甘草約0.5g 3份各放入聚四氟乙烯罐中再加5mL硝酸 (GR)，蓋上蓋子，旋緊，放置過夜，第2天補(bǔ)液2mL硝酸 (GR)，按微波消解裝樣指導(dǎo)放入Speedwave MWS－3無接觸紅外測溫微波壓力消解系統(tǒng)中，按表1程序進(jìn)行消解:

表1 樣品消解條件

待消解完畢后取出消解罐，冷卻1～2h冷卻到室溫，小心緩慢的打開消解罐，將消解完畢的液體倒入潔凈的250mL三角瓶中，放置在電熱板上，緩慢加熱，至瓶內(nèi)液體只有約2～3mL時候，加1～2mL去離子水，待煙霧由黃變白，至不冒煙霧再緩慢加熱0.5h，放冷至室溫轉(zhuǎn)移到25mL容量瓶中，用5%硫脲－5%抗壞血酸的溶液定容到刻度，待測。

3 檢測條件

使用前先將砷和汞元素?zé)纛A(yù)熱20min以上，待燈能量穩(wěn)定后，使用去離子水裝樣，運(yùn)轉(zhuǎn)20min左右以清洗管道。將標(biāo)準(zhǔn)品和樣品裝樣，上機(jī)，按下表的條件進(jìn)行檢測:

表2 標(biāo)準(zhǔn)品梯度 μg/L

表3 儀器條件

表4 測量條件

表5 繼續(xù)流動程序

4 方法與結(jié)果

4.1 方法學(xué)考察

4.1.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

按照上述檢測條件，分別做As和Hg的標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到結(jié)果如下:

4.1.2 儀器精密度實(shí)驗(yàn)

取As和Hg低濃度的標(biāo)準(zhǔn)液，按相應(yīng)的方法重復(fù)進(jìn)樣6次，As和Hg熒光強(qiáng)度的RSD分別為:0.9%，2.5%.

表6 標(biāo)準(zhǔn)曲線參數(shù)

4.1.3 重復(fù)性試驗(yàn)

精密稱取樣品6份，按相應(yīng)元素的方法制備，再通過相應(yīng)的方法測定，As和Hg的RSD分別為:1.2%和2.2%.

4.1.4 加標(biāo)回收率

在一定量的樣品中加入標(biāo)準(zhǔn)液，定容，進(jìn)行加標(biāo)回收試驗(yàn)，根據(jù)測定值計(jì)算回收率，見下表:

表7 回收試驗(yàn)結(jié)果

4.2 樣品的檢測

根據(jù)2、樣品的前處理和3、檢測條件，處理提供的樣品，分別測定As和Hg的含量，根據(jù)熒光強(qiáng)度計(jì)算重金屬含量 As和 Hg分別為:0.3857mg/Kg;5.8274μg/Kg。

5 討論

氫化物發(fā)生－原子熒光法是基于化學(xué)反應(yīng)后，將分析元素轉(zhuǎn)化為在室溫下為氣態(tài)的氫化物。反應(yīng)所生成的氫化物被引入石英爐中，并且被原子化，受空心陰極燈激發(fā)，原子外層電子躍遷到較高能級，并在回到較低能級的過程中輻射出原子熒光。熒光強(qiáng)度與溶液中被測元素的濃度成正比。硼氫化鈉 (鉀)是氫化物反應(yīng)中最重要的試劑，應(yīng)保證足夠純度及不含有被測元素。且將硼氫化鈉 (鉀)溶于一定量的氫氧化鈉中以保證硼氫化鈉 (鉀)的穩(wěn)定性。

樣品溶于硫脲－抗壞血酸中，既是砷從五價態(tài)還原到三價態(tài)的還原劑，同時也是抗干擾的掩蔽劑。

藥典中測Hg為冷蒸汽吸收法，而根據(jù)此法，Hg也可點(diǎn)火爐絲后測量，甚至可以配混標(biāo)和As同時測量。根據(jù)中國藥典2010版［1］一部甘草項(xiàng)下規(guī)定:As不得超過百萬分之二，Hg不得超過千萬分之二。桑蟬止咳方中甘草As、Hg含量都符合規(guī)定，通過原子熒光測定As，Hg成本低廉，方法準(zhǔn)確可靠。

中藥重金屬Hg、Ag等元素被人體吸收后，當(dāng)蓄積至一定量時可起到免疫系統(tǒng)障礙，神經(jīng)、內(nèi)分泌、肝、腎功能受損，而引起一系列嚴(yán)重的中毒癥狀，某些元素還能引起腫瘤，因而世界各國對這些有害元素在藥品和食品中的含量制定了嚴(yán)格的限量標(biāo)準(zhǔn)［2］。本實(shí)驗(yàn)通過原子熒光法測定桑蟬止咳方中原料甘草的砷和汞含量，從源頭嚴(yán)格質(zhì)量把關(guān)，提高了制劑的臨床使用安全性。

［1］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典 (一部)［M］.北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:80.

［2］陸宇照，龔躍剛，王興文，等.中藥提取物中重金屬的研究 ［J］.云南中醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2001，1(24):1.