高效液相色譜法同時測定解風酒中阿魏酸、原兒茶酸和桂皮醛

王 寧

(湖南省懷化市食品藥品檢驗所，湖南懷化418000)

解風酒是由當歸、狗脊、桂枝、獨活等多味中藥制成的復方制劑。處方源于經驗方，具有祛風除濕，舒經通絡止痛的作用。用于風濕性關節炎及類風濕性關節炎。其現行質量標準只對制劑中活性成分當歸、狗脊、桂枝進行薄層色譜鑒別，無相關的定量測定標準，為了更有效控制本品內在質量，采用高效液相色譜法對方中的阿魏酸、原兒茶酸及桂皮醛進行定量測定。

1 儀器與試藥

島津高效液相色譜儀，包括LC-20AT輸液泵，SPD-M20Avp二極管陣列檢測器，LCsolution工作站;AUW220D十萬分之一電子天平(日本島津公司)，CBL9960A超聲波清洗器(上海科導超聲儀有限公司)。

阿魏酸(批號:110773-200612)、原兒茶酸(批號:110810-200506)、桂 皮 醛 (批 號:110710-200513)對照品(均由中國藥品生物制品檢定所提供);解風酒(湖南懷化市中醫院制劑，批號為100322、100902、101003);甲醇、乙腈、冰醋酸均為色譜純;水為超純水;其它試劑均為分析純。

2 方法和結果

2.1 色譜條件 kromasil C18色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm);流動相 A乙腈-B 0.1%冰醋酸溶液，梯度洗脫(0～35 min，75%B ～55%B);體積流量1.0 mL/min;柱溫30℃;檢測波長260 nm;進樣量10 μL。按阿魏酸峰計算，理論板數不低于4000;按原兒茶酸、桂皮醛計算，理論板數不低于5000。

2.2 對照品溶液制備 精密稱定經減壓干燥18 h的阿魏酸 12.13 mg，原兒茶酸 12.51 mg，桂皮酸對照品5.24 mg，置100 mL量瓶中，用甲醇定容至刻度，作為混合對照品溶液，避光備用。

2.3 供試品溶液的制備 精密量取解風酒20 mL，置50 mL量瓶中加70%甲醇適量溶解，超聲處理(功率250 W，頻率40 kHz)25 min，再加70%甲醇至刻度，搖勻，過濾，取續濾液即得。

2.4 陰性供試品溶液的制備 按處方比例稱取缺當歸、狗脊及桂枝以外的其余藥材，按制備工藝制成陰性制劑，再按2.3項下的方法制備陰性供試品溶液。

2.5 方法學考察

2.5.1 專屬性試驗 分別精密吸取陰性供試品溶液、混合對照品溶液、供試品溶液各10 μL注入液相色譜儀，依法測定。阿魏酸、原兒茶酸及桂皮醛的保留時間分別約為 12.8，21.2，27.6 min，與混合對照品溶液的色譜保留時間一致;陰性供試品溶液在該色譜條件下對測定無干擾。見圖1。

2.5.2 線性關系考察 精密吸取上述混合對照品溶液 2、4、6、8、10、20 μL 分別注入液相色譜儀，測定峰面積，以進樣量(μg)為橫坐標，峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，得阿魏酸、原兒茶酸、桂皮醛的回歸方程分別為 A=2.33×106C－3.21×104(r=0.9999)，A=2.42 × 106C － 1.39 × 104(r=0.9999)，A=1.47 × 106C － 2.67 × 103(r=0.9999)。結果表明阿魏酸、原兒茶酸、桂皮醛分別在 0.02426 ～ 0.2426 μg、0.02502 ～ 0.2502 μg、0.01048 ～0.1048 μg 范圍內，進樣量與峰面積呈良好的線性關系。

2.5.3 精密度試驗 精密吸取同一混合對照品溶液，按2.1項下的方法連續進樣6次，分別測定阿魏酸、原兒茶酸、桂皮醛的峰面積，峰面積RSD分別為 0.48%、0.99% 、0.93%。

2.5.4 重復性試驗 取同一批號解風酒(批號:100322)6份 ，按2.3項下方法制備供試品溶液，依法測定，計算，結果阿魏酸、原兒茶酸、桂皮醛的RSD 分別為 1.01%、0.69%、0.98%。

圖1 解風酒HPLC色譜圖Fig.1 HPLC chromatograms of Jiefeng Wine

2.5.5 穩定性考察 吸取供試品 (批號:100322)，按2.3項下的制備條件，于室溫放置0、4、8、12、24 h后按2.1項下的色譜條件進行，分別測定阿魏酸、原兒茶酸、桂皮醛的峰面積，RSD分別為0.74%、0.80%、0.65%，表明供試品溶液在 24 h 內基本穩定。

2.5.6 加樣回收率試驗 精密吸取同一批號樣品(批號 100322，含阿魏酸 2.55 mg/瓶;原兒茶酸4.12 mg/瓶;桂皮醛 1.27 mg/瓶;每瓶 500 mL)10 mL，共9份，分別置50 mL量瓶中，分別精密加入混合對照品溶液(阿魏酸0.01213 mg/mL、原兒茶酸0.01251 mg/mL 和桂皮醛 0.00524 mg/mL)5.0，6.0和7.0 mL，按2.3項下的方法制備供試品溶液，并按2.1項下的色譜條件，依法測定，計算平均回收率，結果見表1。

2.5.7 樣品測定 取3批樣品，按2.2和2.3項下的方法分別制備對照品溶液和供試品溶液，依次對3批次樣品(批號:100322，100902，101003)進行測定，結果見表2。

3 討論

3.1 檢測波長的選擇 對阿魏酸、原兒茶酸及桂皮醛進行紫外全波段掃描，三者均在260 nm波長處有較大的紫外吸收，故采取260 nm為檢測波長。

表1 加樣回收率結果Tab.1 The results of Recovery test

表2 解風酒中阿魏酸、原兒茶酸、桂皮醛測定結果(n=3)Tab.2 Test results of samples(n=3)

3.2 提取溶劑與提取時間的選擇 本實驗分別采用50%甲醇、70%甲醇、甲醇作為提取溶劑，結果發現70%甲醇提取的樣品含有量較其他溶劑高，且雜質影響較小;同時還考察了 15、25、35、45 min不同提取時間對樣品的影響，結果25 min時提取最完全，且所測成分穩定。

3.3 柱溫的設定 本方法采用的是梯度洗脫，在測定中不設柱溫，色譜峰基線漂移較嚴重，樣品峰拖尾明顯，設定柱溫后，可減少拖尾，基線漂移得到改善，峰形對稱，但柱溫設定不易過高，過高峰形變差，故柱溫設定為30℃為佳。

3.4 流動相及洗脫方式的選擇 參閱相關文獻［1-11］，分別使用了甲醇-0.1%冰醋酸溶液、乙腈-0.1%冰醋酸溶液、乙腈-0.1%磷酸溶液等不同類型、比例的流動相進行實驗，選用乙腈-0.1%冰醋酸溶液且進行二元梯度洗脫，結果表明，此洗脫相能更好地分離阿魏酸、原兒茶酸與桂皮醛峰，各主峰之間的分離度均大于1.5，且陰性樣品對測定無干擾。

3.5 該品種為臨床常用制劑，為完善其質量標準，用本法同時測定解風酒中阿魏酸、原兒茶酸和桂皮醛，方法簡便、準確，能夠有效控制解風酒的內在質量，為臨床用藥提供安全保障。

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［4］魯健武，曾俊芬，宋金春.HPLC法同時測定復方川芎膠囊中阿魏酸和川芎嗪的含量［J］.中國藥師，2008，11(7):814-816.

［5］劉忠民，郭利民.反相高效液相色譜法測定強肝糖漿中阿魏酸含量［J］.中國藥業，2006，15(4):18.

［6］張 雪，褚文靜，劉偉娜，等.高效液相色譜-二極管陣列檢測法測定冠心寧注射液中丹參素、原兒茶酸、原兒茶醛、阿魏酸、迷迭香酸和丹酚酸 B［J］.中草藥，2010，35(2):1425-1429.

［7］楊 濱，屈巧玲，王謙鵬，等.急支糖漿中原兒茶酸等4種成份的含量測定［J］.中國中藥雜志，2007，12(9):565-569.

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