筋骨草初提物調血脂作用研究＊

蔡曉明，劉 云，母 波，曾 梅，楊俊寶，申躍武，陳保鋒，梁素華

(川北醫學院基礎醫學院，四川 南充 637007)

高血脂會誘發心腦血管疾病，加重糖尿病、脂肪肝、腎病綜合征等的發生和發展，對人體的健康非常有害。筋骨草 Ajuga decumbens Thunb.為唇形目唇形科植物，資源豐富，全草均可入藥，性寒、味苦，具有止咳化痰、清熱涼血、解毒消腫、止痢的功效，主要用于治療上呼吸道感染引起的急慢性咽炎、支氣管炎、扁桃體炎以及肺炎、痢疾、咳血、療瘡、癰腫、跌打損傷等癥。筋骨草還有調血脂、降血糖、降血壓、收縮血管、促進紅細胞生成、抗HIV、利膽、抑菌、抗腫瘤、強心等藥理作用。本試驗中研究筋骨草初提液對小鼠調血脂作用效果，為開發筋骨草提供可靠的試驗依據。

1 材料與方法

1.1 材料

四川產筋骨草，將其莖、葉清洗干凈，分別用水提法和醇提法抽取初提物;膽固醇為成都科龍化工試劑廠生化產品。

1.2 試驗方法

取筋骨草的莖、葉樣品，洗凈、切碎后，煎煮2次，各30 min，濃縮制水提液備用。取筋骨草樣品，將莖、葉洗凈，粉碎、勻漿后，加無水乙醇4℃放置過夜，以3000 r/min的速度離心10 min，棄渣，取上清液濃縮，于4℃低溫保存備用。

高血脂小鼠模型用基礎飼料加5%膽固醇、2%豬油建立。模型建立5周后，檢測不同提取方法、不同給藥方法、給藥時間長短的調血脂作用。小鼠靜脈血用摘眼取血法獲取，每組試驗對照、高血脂昆明小鼠雌雄各4只，作好標簽，于川北醫學院附屬醫院檢驗科檢測血清血脂指標，檢測數據由SAS軟件作方差分析。

1.3 高血脂小鼠模型的建立

取川北醫學院試驗動物中心5周齡昆明小鼠，雌雄各50只，其中雌雄各10只作空白對照，另雌雄各40只作建模，空白對照用普通飼料喂養，建模小鼠用高脂飼料喂養。建模小鼠與空白對照小鼠血脂檢驗指標見表1。可見，建模小鼠血脂水平與空白對照相比達到極顯著或顯著差異水平，說明高血脂模型建立成功。

表1 高血脂小鼠及空白對照血脂平均指標(mmol/L)

2 結果與分析

2.1 不同提取方法初提物調血脂作用

取筋骨草的莖、葉樣品3 kg清洗干凈，切碎后煎煮2次各30 min，濃縮至水提液5000 mL。取筋骨草樣品3 kg，將莖、葉清洗干凈，粉碎、勻漿后，加無水乙醇4℃放置過夜，3000 r/min離心10 min，棄渣，取上清液濃縮至5000 mL，于4℃低溫保存。分別將兩種初提液拌入小鼠常規飼料中，喂養模型小鼠，10 d后檢測兩種初提液調血脂效果。結果見表2。可見，水提液調總膽固醇效果比醇提液好，差異有顯著性，而雌雄小鼠間無明顯差異;調甘油三酯效果水提液與醇提液、雌雄小鼠間均無明顯差異;調高密度脂蛋白效果水提液與醇提液無明顯差異、而雌雄小鼠間達顯著差異水平;調低密度脂蛋白效果水提液與醇提液、雌雄小鼠間均無顯著差異;調極低密度脂蛋白效果水提液與醇提液無差異，雌雄小鼠間達顯著差異水平。調總膽固醇效果水提液與醇提液達顯著差異水平，水提液效果較好，可能是兩種提取方法初提液中成分差異的結果。調高密度脂蛋白與極低密度脂蛋白效果雌雄小鼠間達顯著差異水平，高密度脂蛋白雄鼠含量高，極低密度脂蛋白雌鼠含量高，可能是由于兩種提取方法初提液成分差異與雌雄鼠基因差異相互作用的結果。

表2 不同提取方法初提液調血脂作用效果(mmol/L)

2.2 初提物不同給藥方法調血脂作用效果

取筋骨草的莖、葉樣品5kg清水洗凈，切碎后煎煮2次各30 min，濃縮至水提液8000 mL。將濃縮液分成2份各4000 mL，其中用于拌料的直接將4000 mL濃縮液拌入常規飼料中，用于灌胃的4000 mL用烘干法濃縮至2000 mL，每天早、晚由熟練飼養員對小鼠各灌胃1 mL，10 d后檢測兩種初提液調血脂效果。結果見表3。可見，調總膽固醇效果拌料組與灌胃組、雌雄小鼠間均無明顯差異;調甘油三酯效果拌料組與灌胃組、雌雄小鼠間均無明顯差異;調高密度脂蛋白效果拌料組與灌胃組無顯著差異，但雌雄小鼠間達極顯著差異水平;調低密度脂蛋白效果拌料組與灌胃組達顯著差異水平，雌雄小鼠間無明顯差異。調極低密度脂蛋白效果拌料組與灌胃組、雌雄小鼠間均無明顯差異。不同給藥方法試驗表明，調低密度脂蛋白效果拌料組與灌胃組達到顯著差異水平，拌料組效果較好，可能是由于拌料組小鼠攝取藥物量比灌胃組小鼠多的結果。調高密度脂蛋白效果雌雄小鼠間達極顯著差異水平，高密度脂蛋白雄鼠含量高，可能是由于兩種給藥方法小鼠藥物攝食量差異與雌雄鼠基因差異相互作用的結果。

表3 不同給藥方法調血脂作用效果(mmol/L)

2.3 初提物給藥時間長短調血脂作用效果

取筋骨草的莖、葉樣品5 kg清水洗凈，切碎后煎煮2次各30 min，濃縮至水提液8000 mL。全部將初提液拌入小鼠常規飼料中，喂養模型小鼠，給料3 d、10 d后檢測兩種給藥時間調血脂效果。結果見表4?？梢?，調總膽固醇效果3 d組與10 d組未達顯著差異水平，而雌雄小鼠間達極顯著差異水平;調甘油三酯效果3 d組與10 d組未達顯著差異水平，而雌雄小鼠間達顯著差異水平;調高密度脂蛋白效果3 d組與10 d組無明顯差異，而雌雄小鼠間達極顯著差異水平;調低密度脂蛋白效果3 d組與10 d組達極顯著差異水平，而雌雄小鼠間無顯著差異;調極低密度脂蛋白效果3 d組與10 d組達顯著差異水平、而雌雄小鼠間未達顯著差異水平。給藥時間試驗表明，給藥時間長短影響調血脂作用效果。3 d組與10 d組調低密度脂蛋白達極顯著差異、調極低密度脂蛋白效果達顯著差異水平，說明初提物調血脂作用有一個藥效過程，10 d左右血脂可達正常水平。調總膽固醇、甘油三酯和高密度脂蛋白效果，雌雄鼠間達顯著或極顯著差異水平，可能是藥效時間與雌雄鼠基因差異相互作用的結果。

3 討論

高血脂小鼠模型建立試驗表明，總膽固醇高14.83%，低密度脂蛋白建模小鼠平均1.31 mmol/L，比空白對照高523.81%，達極顯著差異水平，說明高血脂模型建立成功。在高血脂小鼠建模過程中發現，隨著建模時間的延長，高血脂小鼠的皮毛逐漸蓬松、暗淡。取高血脂小鼠肝臟觀察，其肝葉及肝臟表面發白，而空白對照小鼠肝葉及肝臟表面色澤鮮紅，表明建模小鼠效果明顯。

表4 不同給藥時間長短調血脂作用效果(mmol/L)

水提法與醇提法初提液調高血脂試驗表明，調高血脂效果兩種方法差異不大，但調總膽固醇水提液效果略好，可能是兩種提取方法初提液中成分有差異的結果。調高密度脂蛋白與極低密度脂蛋白效果雌雄小鼠間達顯著差異水平，高密度脂蛋白雄鼠含量高，極低密度脂蛋白雌鼠含量高，可能是由于兩種提取方法初提液成分差異與雌雄鼠基因差異相互作用的結果。不同給藥方法試驗表明，調低密度脂蛋白效果拌料組與灌胃組達到顯著差異水平，拌料組效果較好，可能是由于拌料組小鼠攝取藥物量比灌胃組小鼠多的結果。調高密度脂蛋白效果雌雄小鼠間達極顯著差異水平，高密度脂蛋白雄鼠含量高，可能是由于兩種給藥方法小鼠藥物攝食量差異與雌雄鼠基因差異相互作用的結果。以上試驗表明，筋骨草初提液確有調血脂作用效果，但其調血脂作用藥效成分目前尚不清楚。大量研究發現，筋骨草含有二萜、環烯醚萜、甾酮、筋骨草內酯、筋骨草糖、黃酮苷、皂苷、生物堿、有機酸、酚性化合物、鞣質、木犀草素等[1－3]，其中甾酮、黃酮苷、皂苷等可能會有調血脂效果，需要進一步深入研究。

給藥時間試驗表明，給藥時間長短影響調血脂作用效果。3 d組與10 d組調低密度脂蛋白達極顯著差異、調極低密度脂蛋白效果達顯著差異水平，說明初提物調血脂作用有一個藥效過程，給藥10 d左右血脂可達正常水平。調總膽固醇、甘油三酯和高密度脂蛋白效果，雌雄鼠間達顯著或極顯著差異水平，可能是藥效時間與雌雄鼠基因差異相互作用的結果。高血脂在體內形成及其降解比較復雜，涉及過氧化物增殖物激活受體(PPAR)調節脂肪生成及脂代謝、固醇調節元件結合蛋白(SREBP)脂肪細胞決定和分化因子、脂肪酸合成酶(FAS)、激素敏感脂酶(HSL)、C反應蛋白(CRP)、血管緊張素轉換酶(ACE)、脂蛋白脂肪酶(LPL)、載脂蛋白(APO)等多種調控過程[4－6]。本試驗證明，筋骨草初提液具有調血脂效果，但其調控機制尚需進一步深入研究。

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