氣相色譜法測定鹽酸法舒地爾中有機溶劑殘留量

方海燕 方學勤 劉元勝

1.湖北省黃石市食品藥品監督檢驗所生測室，湖北 黃石 435000；2.湖北省黃石市世星藥業有限責任公司，湖北 黃石 435003

鹽酸法舒地爾是一種具有廣泛藥理作用的新型藥物，它的分子結構為5-異喹啉磺酰胺衍生物，為RHO激酶抑制物，它抑制了RHO激酶參與的細胞黏附、細胞遷移、平滑肌細胞收縮、胞質分裂的調節，從而抑制了動脈粥樣硬化的發生與發展。在日本1995年正式批準進入臨床，用來防治慢性缺血性腦血管痙攣[1]。由于該藥在合成過程中需使用甲醇、二氯甲烷、N，N-二甲基甲酰胺等有機溶劑，產品中的有機殘留量對人體是有害，故應對原料藥中有機溶劑殘留量進行控制。由于現有文獻中尚未發現這方面的研究，本試驗根據ICH和 《中國藥典》2010年版二部對有機溶劑殘留量測定的指導原則[2]，并參考有關文獻[3-6]，采用氣相色譜法測定了鹽酸法舒地爾原料中的甲醇、二氯甲烷、N，N-二甲基甲酰胺的含量，方法簡便靈敏，結果準確可靠。

1 儀器與試藥

島津GC-14C氣相色譜儀，氫火焰離子檢測器（FID），CS-Light色譜工作站，梅特勒AL204分析天平；毛細管色譜柱 SE-54（30 m×0.53 mm，5.0 μm）。

鹽酸法舒地爾（批號：20080601、20080602、20080603，自制），甲醇、N，N-二甲基甲酰胺和二甲基亞砜均為色譜純，二氯甲烷為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

由于N，N-二甲基甲酰胺是高沸點有機溶劑，采用其色譜條件不能有效將甲醇、二氯甲烷進行分離。因此，分別采用兩種程序升溫條件，測定甲醇、二氯甲烷、N，N-二甲基甲酰胺。FID檢測器，檢測器溫度250℃，進樣口溫度200℃，載氣為氮氣，采用恒流模式，流速為12 mL/min，氫氣流速50 mL/min，空氣流速 500 mL/min，SE-54（30 m×0.53 mm，5.0 μm）毛細管柱，分流時間0.1 s，分流流速3 mL/s，進樣量1 μL。采用島津CS-light氣相色譜工作站，色譜峰理論塔板數不低于5000，分離度大于1.5。

分析甲醇、二氯甲烷的程序升溫：初始柱溫55℃，平衡0.5 min，以40℃/min的速度升溫至70℃，平衡1 min，以 40℃/min的速度升溫至180℃，平衡3 min。

分析N，N-二甲基甲酰胺的程序升溫：初始柱溫50℃，平衡3 min，以20℃/min的速度升溫至180℃，平衡3 min。

圖1 甲醇、二氯甲烷對照品溶液圖譜

2.2 溶液的制備

2.2.1 甲醇、二氯甲烷溶液的制備

2.2.1.1 對照品溶液的制備 分別取甲醇、二氯甲烷適量，精密稱定，用二甲基甲酰胺（DMF）稀釋成1 mL約含甲醇300 μg、二氯甲烷60 μg的溶液，另加0.5 mL內標溶液。內標物質具體制備為：取分析純苯約60 mg，精密稱定，置于50 mL量瓶中，加DMF并稀釋至刻度，振勻。

2.2.1.2 供試品溶液的制備 取鹽酸法舒地爾1.0 g，精密稱定，置10 mL容量瓶中，加入0.5 mL內標溶液，用DMF稀釋至刻度，振搖使溶解，即得。

2.2.2 N，N-二甲基甲酰胺溶液的制備

2.2.2.1 對照品溶液的制備 取N，N-二甲基甲酰胺定量稀釋制成每1 mL中分別約含88 μg的溶液，另精密量取內標溶液0.5 mL置于該量瓶中，用20%甲醇稀釋至刻度，振勻。內標物質具體制備為：取分析純N，N-二甲基乙酰胺約80 mg，精密稱定，置于50 mL量瓶中，加20%甲醇稀釋至刻度，振勻。

2.2.2.2 供試品溶液的制備 另取本品約0.1 g，精密稱定，取0.5 mL內標溶液，置于10 mL量瓶中，20%甲醇稀釋至刻度，充分振搖。

圖2 甲醇、二氯甲烷供試品溶液圖譜

2.3 測定方法

分別取對照溶液和供試品溶液，按上述色譜條件測定，甲醇、二氯甲烷結果，見圖1、2；N，N-二甲基甲酰胺結果，見圖 3、4。

2.4 線性關系考察

分別精密稱取甲醇、二氯甲烷適量，用DMF稀釋成含甲醇 0.0657、0.6570、6.5700、65.7000、657.0000 μg/mL，含二氯甲烷 1.76、17.60、176.00、246.40、316.80 μg/mL， 取以上各濃度溶液10 mL，分別加入0.5 mL苯內標溶液，用20%甲醇稀釋成含 N，N-二甲基甲酰胺 0.166、1.660、16.600、66.400、83.000、99.600 μg/mL的溶液備用，取此系列濃度溶液10 mL分別加入0.5 mL N，N-二甲基乙酰胺內標溶液，取1 μL樣品直接進樣以AR/AS為縱坐標（Y），濃度為橫坐標（X），計算甲醇、二氯甲烷、N，N-二甲基甲酰胺的回歸方程分別為Y=1.0122X+0.0029（r=1.0000）、Y=0.4387X+0.0002（r=0.9991）、Y=10.857X+0.056（r=0.9998）。結果表明甲醇在 0.0657～657.0000 μg/mL，二氯甲烷在 0.76～316.80 μg/mL，N，N-二甲基甲酰胺在0.166～99.600 μg/mL的濃度范圍內呈較好的線性關系。

2.5 精密度試驗

取對照品溶液，連續測定6次，結果甲醇溶液中苯/甲醇的峰面積的RSD為1.02%，二氯甲烷溶液中苯/二氯甲烷的峰面積的RSD為1.61%，N，N-二甲基甲酰胺溶液中苯/DMF的峰面積的RSD為3.13%，符合《中國藥典》2010年版規定的有機溶劑殘留內標法測定精密度的要求 （RSD不大于5%）。見表1。

2.6 最低檢測限的測定

圖3 N，N-二甲基乙酰胺對照品溶液色譜圖

圖4 N，N-二甲基乙酰胺供試品溶液色譜圖

取“2.4”項下的標準溶液，采用逐步稀釋法，按上述色譜條件進樣，測得甲醇、二氯甲烷、N，N-二甲基甲酰胺的檢測限（S/N=3）分別為 0.0657、1.1000、0.0166 μg/mL。

表1 殘留溶劑測定精密度試驗

2.7 回收率試驗

2.7.1 甲醇、二氯甲烷回收率試驗測定

分別量取甲醇、二氯甲烷對照儲備液0.5、4.0、5.0 mL，置10 mL量瓶中，加二甲基亞砜稀釋至刻度，搖勻，作為濃度為12%、100%、120%的混合加樣溶液。分別精密稱取已知殘留量的供試品（批號：20080603）各0.1 g，分別加以上各濃度的混合溶液10 mL使其溶解，搖勻，分別依法測定，計算各有機溶劑的平均回收率。見表2。

表2 甲醇、二氯甲烷回收率測定結果

2.7.2 N，N-二甲基甲酰胺回收率試驗測定

分別量取N，N-二甲基甲酰胺對照儲備液 4、5、6 mL，置10 mL量瓶中，加0.5 mL內標溶液，用20%甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為濃度為80%、100%、120%的混合加樣溶液。分別精密稱取已知殘留量的供試品（批號：20080601）各0.1 g，分別加以上各濃度的混合溶液10 mL使其溶解，搖勻，分別依法測定，計算N，N-二甲基甲酰胺平均回收率，見表3。

表3 N，N-二甲基甲酰胺回收率測定結果

2.8 樣品測定

取鹽酸法舒地爾樣品3批，各約1.0 g，精密稱定，置10 mL量瓶中，加0.5 mL內標溶液和DMF溶解并定容，搖勻，平行制備3份。加0.5 mL內標溶液和20%甲醇溶解并定容，搖勻，平行制備3份。按上述色譜條件進樣，以內標法計算，取平均值作為測定結果。見表4。由表4可知，3批樣品的殘留溶劑均符合規定（殘留溶劑甲醇≤0.3%，二氯甲烷≤0.06%，DMF≤0.088%）。

表4 殘留溶劑檢測結果（%）

3 討論

3.1 進樣方式的選擇

通常采用頂空進樣和直接進樣的方法，由于N，N-二甲基甲酰胺沸點為180℃，不能采用頂空進樣法，改用直接進樣，但是N，N-二甲基甲酰胺出峰較晚，不能選用高沸點溶劑作溶媒，但如果選用低熔點溶劑作溶媒又干擾了甲醇及二氯甲烷的出峰，所以檢測3種殘溶不能共用同一種溶媒。因此，選用兩種溶媒，采用兩種不同的程序升溫，進行測定樣品中甲醇、二氯甲烷、N，N-二甲基甲酰胺含量。

3.2 色譜柱的選擇

本實驗室曾選用不同極性及不同口徑的毛細管色譜柱，如 SE-54（30 m×0.32 mm，0.25 μm）、SE-54（30 m×0.53 mm，5.0 μm）、FFAP （25 m×0.32 mm，0.50 μm） 經多次試驗采用SE-54（30 m×0.53 mm，5.0 μm）柱，可使 DMF 達到較好的基線分離，基線平直，色譜峰峰型對稱，分離度較好，同時也能滿足甲醇及二氯甲烷的檢測要求。因此本次檢測采用的是毛細管色譜柱 SE-54（30 m×0.53 mm，5.0 μm），此色譜柱為大口徑色譜柱。

3.3 殘留溶液含量計算方法的選擇

本文建立以添加內標物的方法，采用內標法計算殘留溶液的含量。測定組分分離完全，各組分出峰時間靠近，原料藥溶液中各組分出峰保留時間與相應物質對照品溶液出峰保留時間一致，精密度及線性較為理想，添加組分回收完全。

綜上所述，本檢測方法操作簡便，經濟可行，并已于近期通過了藥品監督管理局的審核。

[1]孟祥軍，齊杰，田莉.鹽酸法舒地爾的合成、藥理和臨床研究進展[J].沈陽醫學院學報，2010，12（1）：45-50.

[2]國家藥典委員會.中國藥典[S].二部.北京：中國醫藥科技出版社，2010：附錄 61.

[3]安彥，王衛，唐素芳.頂空毛細管氣相色譜法測定地塞米松磷酸鈉有機溶劑殘留量[J].天津藥學，2010，22（4）：12-14.

[4]趙玉新，劉丹，任吉秋.氣相色譜法測定頭孢孟多酯鈉的殘留溶劑[J].中國醫藥導報，2010，7（13）：49-50.

[5]甘麗卿，葉志彬.毛細管氣相色譜法測定頭孢匹羅中有機溶劑殘留量[J].海峽藥學，2011，23（8）：90-92.

[6]祖金鳳.氣相色譜法測定枸櫞酸莫沙必利中有機溶劑殘留量[J].齊魯藥事，2011，30（9）：519-520.