芒果苷對氧嗪酸鉀所致慢性高尿酸血癥大鼠尿酸及肝腎功能的影響

牛艷芬，高麗輝，劉 旭，林 華，張 媛，李 玲

(1.昆明醫科大學生物醫學工程研究中心;2.昆明醫科大學藥學院暨云南省天然藥物藥理重點實驗室，云南昆明 650500)

痛風(Gout)是長期嘌呤代謝紊亂和(或)尿酸排泄減少引起的一種異質性、代謝性疾病。在歐洲、北美、日本等地區和國家痛風的發病率較高，近年隨著我國人民生活水平的提高，飲食結構的改變及肥胖者的增加，痛風和高尿酸血癥的發病率逐年增加，據估計，我國目前痛風患者約在1 200萬以上，而血尿酸值過高者約有1.2億(約占人口總數的9%)，痛風不再是達官貴人的專利，已成為現代生活的文明病。痛風的發生與高尿酸血癥密切相關，據統計約有5%～12%的高尿酸血癥患者最終可發展為痛風［1］，近年的研究表明高尿酸血癥不僅是痛風最重要的生化基礎，而且是引起心血管病死亡的獨立風險因素［2］，同時與代謝紊亂綜合征和胰島素抵抗綜合癥密切相關［3］，已成為嚴重威脅人類健康的代謝性疾病，聯合國將其列為21世紀的20大頑癥之一。

然而，治療痛風和高尿酸血癥的藥物非常有限，除應用秋水仙堿、非甾體類抗炎藥、糖皮質激素等對痛風患者進行對癥治療外，主要依賴于降尿酸藥物如別嘌醇、苯溴馬隆。這些藥物多是20世紀60年代研制的產品，且毒副作用較大，病人常常不能耐受，在一定程度上限制了其使用。因此，隨著高尿酸血癥和痛風發病率的大幅度升高，尋找新型高效、低毒、價廉的抗高尿酸血癥和痛風藥物仍是目前藥學研究的一個熱點。

芒果苷(mangiferin，Fig 1)系四羥基吡酮的碳糖苷、屬雙苯吡酮類化合物，存在于多種植物中，資源非常豐富。國內外學者對芒果苷的藥理學活性進行了較為廣泛的研究，發現芒果苷具有一定的抗氧化、抗糖尿病、抗腫瘤、抗病毒和肝保護作用等多種藥理活性［4－8］。本課題組研究發現芒果苷具有明顯降低尿酸的作用，已獲國家發明專利(專利號:ZL 2008 1 0058019.6.)，本文將進一步研究芒果苷對氧嗪酸鉀所致慢性高尿酸血癥大鼠尿酸及肝腎功能的影響，以期為芒果苷的進一步研究提供依據。

Fig 1 Structure of mangiferin

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 主要試劑 芒果苷:由昆明醫學院生物醫學工程研究中心提供，純度≥95%;別嘌醇片:廣東彼迪藥業有限公司產品;苯溴馬隆:德國赫曼大藥廠生產企業，由昆山龍燈瑞迪制藥有限公司分裝。臨用前用0.5%羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)配制成不同濃度備用。

尿酸(UA)測定試劑盒:南京建成生物工程研究所產品，丙氨酸氨基轉移酶測定試劑盒、尿素氮(BUN)測定試劑盒、天門冬氨酸氨基轉移酶測定試劑盒為上海科華東菱診斷用品有限公司產品。γ-谷氨酰轉肽酶測定試劑盒(GGT)、肌酐測定試劑盒(Cr)為上海科華生物工程股份有限公司產品。

氧嗪酸鉀:Alderich產品，純度97%，批號STBC1486V。其他試劑均為國產分析純。

1.1.2 實驗儀器 CL-770型臨床分光光度計為日本島津公司產品;MP4R型離心機為美國IEC公司產品，全波長紫外-可見光酶標儀為BioTek公司產品，型號PowerWave XS，全自動生化儀為GLAMOUR 2000 Radom Access Clinical Analyzer產品。

1.1.3 實驗動物 SD大鼠，由昆明醫學院實驗動物中心提供，實驗動物生產許可證號:SCXK(滇)2005-0008，飼養管理條件:SPF級動物實驗室，室溫為(20±2)℃，相對濕度(60～70)%。

1.2 方法

1.2.1 動物模型的復制 ♂性SD大鼠90只，體質量(150～180)g，隨機分為2組，正常組(n=10)和模型組(n=80)，參照文獻［9］模型組動物每天上午按15 ml·kg－1體重灌胃給予氧嗪酸鉀(2.5 g·kg－1體重)，連續灌胃1周后眼內呲取血用磷鎢酸法測定血清尿酸水平，尿酸水平 ＞110 μmol·L－1視為高尿酸血癥大鼠，符合該標準的大鼠有75只，無動物死亡，挑選出其中的60只留待下一步實驗。

1.2.2 動物分組及給藥 將上述挑選出的高尿酸血癥大鼠按血清尿酸水平均衡原則分組為:高尿酸血癥模型對照組(model)、芒果苷不同劑量組、苯溴馬隆和別嘌醇陽性對照組，每組10只，分別灌胃給予等體積溶媒(0.5%CMC-Na)、芒果苷(0.78、1.55、3.13 mg·kg－1)、苯溴馬隆(6.25 mg·kg－1)和別嘌醇(1.01 mg·kg－1);除正常對照組外，其余各組動物每天上午灌胃給予氧嗪酸鉀(2.5 g·kg－1體重)，下午按10 ml·kg－1灌胃給予各受試藥物，連續5周，1、3、5周末眼內呲取血測定血清尿酸水平。5周末將動物置于代謝籠，收集24 h尿液，記錄尿量，測定尿中尿酸和尿肌酐;然后，處死大鼠，取血測定血 ALT、AST、GGT 水平。

2 結果

2.1 芒果苷對高尿酸血癥大鼠血中尿酸的影響結果表明實驗期間模型組動物的血尿酸水平一直維持在較高水平，與正常對照組相比，差異有統計學意義，提示模型成功;灌胃給予芒果苷后，慢性高尿酸血癥大鼠的血清尿酸水平明顯降低，與高尿酸血癥模型對照組相比，差異有統計學意義(P＜0.05，0.01)，并呈現一定的劑量效應關系;芒果苷3.13 mg·kg－1組動物的血尿酸水平與等摩爾的陽性對照藥苯溴馬隆組相比，差異無統計學意義(P＞0.05)，與別嘌醇組相比，于給藥1周時血尿酸水平高于別嘌醇組，差異有統計學意義(P＜0.05)，提示芒果苷對氧嗪酸鉀所致的慢性高尿酸血癥大鼠具有降尿酸作用，其效價弱于等摩爾的別嘌醇，但不亞于苯溴馬隆(Fig 2)。

Fig 2 Effects of mangiferin on serum uric acid levels in the hyperuricemic rats(±s，n=10)

2.2 芒果苷對高尿酸血癥大鼠尿中肌酐、尿素氮及尿量的影響 由Tab 1可見，灌胃給藥5周后，芒果苷各劑量組明顯降低尿中的尿酸水平(P＜0.05，0.01)，對肌酐、尿素氮和尿量的影響不明顯，與模型組相比無統計學意義;陽性對照藥別嘌醇和苯溴馬隆明顯降低尿中尿酸水平(P＜0.05)，對尿中肌酐含量明顯降低，對尿素氮和尿量影響不明顯。

2.3 芒果苷對高尿酸血癥大鼠血中ALT、AST、GGT的影響 灌胃給藥5周后，模型組動物ALT和AST活性降低，與正常對照組比較，差異有顯著性;而芒果苷 0.78、1.55 mg·kg－1組和苯溴馬隆組明顯升高血清ALT水平，與模型對照組相比差異有統計學意義(P＜0.05，P＜0.01)，其余各組均無差別;各給藥組對血清AST、GGT水平均無明顯影響。

3 討論

尿酸是人類嘌呤代謝的終末產物，由次黃嘌呤、黃嘌呤在黃嘌呤氧化酶的作用下生成的，其中2/3由腎臟排除，1/3經消化道排除。人體由于缺乏尿酸酶，不能將尿酸進一步分解成水溶性的尿囊素而排出體外，使人類極易形成高尿酸血癥。尿酸在細胞外液的濃度，取決于尿酸生成速度和排泄之間的平衡。國際上將血液中尿酸水平男性大于420 μmol· L－1，女性大于357 μmol· L－1診斷為高尿酸血癥。任何原因引起尿酸生成增多和(或)排泄減少均可導致高尿酸血癥。當血尿酸增高超過其血中的超飽和濃度，即可在組織內形成尿酸鹽沉積，導致痛風發生。

Tab 1Effects of mangiferin on urine UA，Cr，BUN and urine volume in the hyperuricemic rats(±s，n=10)

Tab 1Effects of mangiferin on urine UA，Cr，BUN and urine volume in the hyperuricemic rats(±s，n=10)

#P＜0.05，##P＜0.01 vs normal group;*P＜0.05，＊＊P＜0.01 vs model group(Dunnett's test)

Group Dose/mg·kg－1 Urine UA/μmol·L －1 Urine Cr/μmol·L －1 Urine BUN/μmol·L －1Urine volume/ml Normal 0.5%CMC-Na 173.9 ±57.7 390.5 ±105.1 7.2 ±1.2 8.2 ±2.6 Model 0.5%CMC-Na 329.5 ±51.3## 420.3 ±69.7 8.0 ±1.8 14.9 ±3.7##Mangiferin 0.78 159.9 ±96.1* 401.0 ±103.4 6.8 ±0.6 13.5 ±3.6##1.55 138.0 ±66.1＊＊ 417.5 ±103.4 7.2 ±1.0 15.5 ±3.2##3.13 138.6 ±51.4＊＊ 379.6 ±159.4 6.9 ±0.9 14.6 ±8.3##Allopurinol 1.01 120.6 ±15.3#* 340.5 ±86.1* 6.7 ±1.4 15.9 ±6.4##Benzbromarone 6.25 160.9 ±87.9* 351.7 ±87.7* 7.5 ±2.5 13.9 ±4.8##

Tab 2 Effects of mangiferin on serum ALT，AST，GGT in the hyperuricemic rats(±s，n=10)

Tab 2 Effects of mangiferin on serum ALT，AST，GGT in the hyperuricemic rats(±s，n=10)

#P＜0.05，##P＜0.01 vs normal group;*P＜0.05，＊＊P＜0.01 vs model group(Dunnett's test)

Group Dose/mg·kg－1 ALT/U·L－1 AST/U·L－1 GGT/U·L －1 Normal 0.5%CMC-Na 36.4±7.1 97.2±29.4 7.8±3.3 83.6 ±15.9 9.4 ±4.0 Model 0.5%CMC-Na 24.3 ±4.3## 78.3 ±9.2# 8.2 ±3.5 Mangiferin 0.78 30.6 ±7.7* 81.6 ±22.6 6.8 ±1.1 1.55 30.5±5.4#＊＊ 76.8±9.5# 6.4±1.0 3.13 25.2 ±6.7## 88.1 ±18.5 9.4 ±8.0 Allopurinol 1.01 27.7 ±5.4# 73.3 ±13.7 5.7 ±1.6 Benzbromarone 6.25 29.5 ±6.5#*

目前，國內外用于制備高尿酸血癥動物模型的方法主要有3種:①通過破壞動物尿酸酶基因及基因重組法;②補充尿酸或尿酸前體物質法;③ 給予尿酸酶抑制劑法。氧嗪酸鉀(potassium oxonate)是一種尿酸酶抑制劑，作為化學誘導劑可抑制尿酸分解，增加體內血清尿酸水平，造成高尿酸血癥動物模型。該法靈敏簡便、重復性好，在國際上已普遍用于評價藥物的降尿酸作用。本研究灌胃給予氧嗪酸鉀造成高尿酸血癥模型，在該模型上研究表明芒果苷明顯降低氧嗪酸鉀所致的慢性高尿酸血癥大鼠的血尿酸水平，其效價弱于等摩爾的別嘌醇，但不亞于苯溴馬隆。此外，在氧嗪酸鉀誘導的急性高尿酸血癥小鼠模型上，芒果苷也顯示出較好的降血尿酸作用，其機制與抑制黃嘌呤氧化脫氫酶有關［10］，而與抑制嘌呤核苷磷酸化酶(PNP)的活性無關［11］。

血清肌酐和尿素氮是腎功能的重要指標，本實驗研究結果顯示，芒果苷灌胃給藥5周后，對高尿酸血癥動物尿中肌酐和尿素氮的影響不明顯，而陽性對照藥別嘌醇和苯溴馬隆明顯降低尿中肌酐含量，提示芒果苷對腎功能沒有影響，但別嘌醇和苯溴馬隆則減少了腎臟對肌酐的排泄。肝內轉氨酶是催化氨基酸與酮酸之間氨基轉移的一類酶，是人體代謝過程中必不可少的“催化劑”。當肝細胞受損時，轉氨酶便會釋放到血液里，使血清轉氨酶升高。在本實驗中，模型組動物ALT和AST活性明顯低于正常對照組，這是否與造模劑氧嗪酸鉀有關，有待進一步研究;而芒果苷0.78，1.55 mg·kg－1組和苯溴馬隆組明顯升高血清ALT水平，接近正常動物的水平，此外，各給藥組對血清AST、GGT水平均無明顯影響。綜上所述，芒果苷在降低血尿酸的同時，并不影響動物的肝腎功能影響，具有較好的安全性。

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