毛細管柱氣相色譜法測定七氟烷的有關物質

王 悅 劉舒揚 李銀峰 靳朝東

1.天津中醫藥大學，天津 300193；2.天津藥物研究院分析測試中心，天津 300193

七氟烷是一種較新的吸入麻醉藥，1968年由Regan合成，1971年Willin等最先報道并于1975年對其理化性質、藥理作用及毒理學進行了評價，1992年使用于日本，1995年經美國FDA批準在美國上市。吸入型麻醉劑[1-3]能通過呼吸有效地調節血中麻醉藥濃度，并能迅速被“洗出”，而七氟烷對心血管系統的影響比異氟烷小；不引起過敏反應，對眼黏膜刺激輕微，麻醉深度易調節等，是一種非常優良、具有較多理想特性的新型吸入型麻醉劑[4]。目前國內使用的七氟烷多為進口，為保證藥品質量，針對國內廠家的生產工藝，建立了毛細管氣相色譜法測定七氟烷的有關物質，并對測定條件進行了系統的考察。

1 儀器與試藥

Agilent Technologies 6890N氣相色譜儀，FID檢測器，七氟烷對照品（批號：090228），三批樣品（天津市智康科技有限公司，批號：090301、090302、090303），戊氟異丙基氟甲醚、己氟異丙基甲基醚均為USP對照品，1，2-二氯乙烷、二甲氧基甲烷均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件及系統適用性試驗

色譜柱 Dikma Technologies DM-624（75 m×0.53 mm，3.0μm）；柱溫：程序升溫（初始溫度 45℃，保持 1 min，再以5℃/min的升溫速率升至120℃，保持1 min，再以10℃/min的升溫速率升至 200℃，保持 3 min）；載氣：氮氣（恒流：4.00 mL/min）；進樣口溫度：230℃；檢測器溫度：250℃；進樣量：2 μL。

在上述色譜條件下，按七氟烷峰計算理論板數應不低于5 000，七氟烷峰與內標物質峰的分離度應大于2。

2.2 分離度試驗

分別取戊氟異丙基氟甲醚對照品和己氟異丙基甲基醚對照品適量，用1，2-二氯乙烷溶解，按上述色譜條件下分別測定，戊氟異丙基氟甲醚的保留時間為13.394 min，己氟異丙基氟甲醚為13.873 min。在對照品中加入少量以上兩種雜質對照品，以二甲氧基甲烷為內標，進樣測定，記錄色譜圖。結果顯示，戊氟異丙基氟甲醚的保留時間為13.503 min，己氟異丙基氟甲醚為13.859 min，七氟烷為14.465 min，內標為15.971 min，上述各峰分離度良好。見圖1。

圖1 七氟烷分離度試驗色譜圖

2.3 線性關系考察

取兩個5 mL量瓶，加入部分1，2-二氯乙烷溶劑，精密稱量七氟烷對照品（批號：090228）和二甲氧基甲烷各50 μL分別置于量瓶中，用1，2-二氯乙烷溶劑溶解并稀釋至刻度，得對照品儲備液和內標儲備液。精密量取對照品儲備液100、150、250、400、500 μL，分別置 10 mL 量瓶中（先加入1，2-二氯乙烷適量），各加入內標儲備液 250 μL 并用 1，2-二氯乙烷溶劑稀釋至刻度，搖勻，對照品溶液濃度分別為0.10、0.15、0.25、0.40、0.50 μL/mL；內標溶液濃度為 0.25 μL/mL。

用上述色譜條件對標準溶液進行測定，各進樣2 μL，記錄樣品與內標峰面積。以濃度為橫坐標，樣品和內標物峰面積比為縱坐標，回歸方程：Y=4.269X-0.041 3，r=0.999 6。

2.4 最低檢測限

取線性范圍測定項下的對照品溶液，稀釋至0.002 5 μL/mL，進樣2 μL，經測定在選定的色譜條件下，七氟烷的最低檢測限為 7.96 ng（S/N=3）。

2.5 定量限

取線性范圍測定項下的對照品溶液，稀釋至0.012 5 μL/mL，進樣2 μL，重復進樣6次，七氟烷與二甲氧基甲烷的峰面積比的相對標準偏差（RSD）為5.41%。

2.6 進樣精密度試驗

精密吸取含對照品和內標物0.25 μL/mL的溶液 2 μL注入氣相色譜儀，重復進樣6次，七氟烷與二甲氧基甲烷的峰面積比的相對標準偏差（RSD）為1.88%。

2.7 校正因子測定

取1，2-二氯乙烷適量，置于兩個5 mL量瓶中，精密稱定，用微量注射器分別加入對照品和二甲氧基甲烷（內標物）各 50 μL，精密稱定，用 1，2-二氯乙烷稀釋至刻度，搖勻，用微量注射器各取250 μL置同一10 mL量瓶中，用1，2-二氯乙烷定容，搖勻。量取2 μL，注入氣相色譜儀，平行進樣4次，平均校正因子為0.56，七氟烷與內標物峰面積比的相對標準偏差（RSD）為3.1%。

圖2 七氟烷有關物質測定色譜圖

表1 樣品的含量及有關物質的測定結果

2.8 有關物質的測定

精密量取七氟烷三批樣品（090301、090302、090303）50 mL于不同量瓶中，精密量取內標溶液12.5 μL分別加入樣品中，稱重，得樣品測定溶液（含內標0.25 μL/mL），將各批樣品溶液依上述色譜條件測定，每批平行測定2次，記錄色譜圖。見圖2。根據峰面積按下面公式計算雜質含量。色譜圖中如有雜質峰，主成分按自身對照法計算，各雜質峰面積總和與內標的峰面積比，不得大于對照液主峰與內標的峰面積比（1%）。另一已知雜質己氟異丙基甲基醚含量極小，在各批樣品中峰面積均小于1，樣品中所有雜質含量均不大于0.0050%。根據上述方法測定3批樣品的有關物質，結果見表1。

由表1可見，各樣品中未知雜質總含量均小于0.005 0%，單個最大揮發性雜質含量小于0.002 5%，含已知雜質戊氟異丙基氟甲醚小于0.002 5%，己氟異丙基氟甲醚含量小于0.005 0%。以上各批樣品含量測定符合要求。

3 討論

3.1 程序升溫條件

分別考察了起始溫度為 40、45、60、100℃和流速 2、4、8、10 mL/min對保留時間的影響，發現起始溫度對保留時間的影響小于流速對其的影響，流速越慢，分離效果越好，在考慮保留時間和分離效果兩者后，選用流速4 mL/min，起始溫度45℃；并嘗試不同的升溫程序以保證主峰與各個雜質峰的分離效果，得出最優條件。

3.2 色譜柱的選擇

分別考察了 DB-624（30 m）和 DM-624（75 m）的毛細管柱，通過改變流速和升溫速度，比較各條件下的分離度，DB-624不能分離主峰前的兩個已知雜質峰，而DM-624分離度較好，主峰保留時間為14.4 min，內標峰為15.9 min，戊氟異丙基氟甲醚為13.4 min，己氟異丙基氟甲醚為13.8 min，其他未知雜質峰分別為 12.8、13.2、13.6、15.1、15.5、16.9、18.1、18.4、19.5、20.6 min。

3.3 雜質的分離

戊氟異丙基氟甲醚雖未被證實對人體有毒性，但其已被實驗證實可使大鼠腎中毒，使其近曲小管單個細胞壞死并擴散。另據報道，戊氟異丙基氟甲醚作用于非人類靈長類動物體內8 h，會使其腎小管單個細胞退化及壞死，故實現戊氟異丙基氟甲醚與七氟烷主峰的分離并控制其含量是很有必要的；而己氟異丙基甲基醚對人體的毒性盡管未見報道，但作為已知雜質，本方法對其進行了很好的分離。

[1]姬梅，于布為.七氟烷用于承認麻醉誘導的臨床觀察[J].上海醫學，2007，12（30）：11.

[2]Hut BA，Mazze RI，Cook TL，et al.Thremorcgulatory defect in rats during anesthesia[J].Anesth，1977，（56）：9.

[3]Bernard MR，John CL.The method of inducing anesthesia by administering an anesthetically effectiveamountofthe compound fluoromethyl1，1，1，3，3，3-hexafluoro-2-propylether[P].US：3，683.

[4]Bernard M.Regan，John C.Longstreet Fluorinated ether[P].US：689.