正交試驗(yàn)優(yōu)選暖臍膏醇提工藝

仇 凡 李明梅 火躍芳 陳 俊

1.鹽城衛(wèi)生職業(yè)技術(shù)學(xué)院藥學(xué)系，江蘇 鹽城 224001；2.江蘇南京中康藥物科技有限公司，江蘇 南京 210009

暖臍膏（橡膠膏）是一種傳統(tǒng)的中藥處方，收載于中華人民共和國衛(wèi)生部部頒標(biāo)準(zhǔn)第15冊(cè)[WS3-B-3010-98]。它由當(dāng)歸、白芷、烏藥、小茴香、八角茴香、木香、香附等13味中藥組成，具有溫里散寒、行氣止痛的功效，常用于寒凝氣滯、少腹冷痛、脘腹痞滿、大便溏瀉等癥狀。其制法為取處方中除乳香、沒藥、麝香外，其余當(dāng)歸等10味藥材，用75%～85%乙醇回流提取，濃縮得浸膏；將乳香、沒藥、麝香及上述浸膏加入由橡膠、松香等制成的基質(zhì)中，制成涂料[1]。筆者在工藝研究中，不擬對(duì)其基本工藝進(jìn)行改變，但擬進(jìn)一步細(xì)化。原暖臍膏標(biāo)準(zhǔn)中提取工藝未明確所用乙醇的濃度、乙醇的用量、提取的時(shí)間以及提取次數(shù)，本項(xiàng)研究以當(dāng)歸中阿魏酸的提取量為指標(biāo)，通過實(shí)驗(yàn)確定了乙醇的濃度、乙醇的用量、提取時(shí)間以及提取次數(shù)，完善了提取工藝。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent 1100液相色譜儀（美國 Agilent公司），Mettler AE240電子天平（10萬分之一），SYZ-A石英亞沸高純水蒸餾器（江蘇信達(dá)儀器廠），HH-6恒溫水浴鍋（國華電器有限公司）。

1.2 試藥

乙醇（分析純），甲醇（TEDIA，USA，色譜純），水（重蒸餾，臨用前制備），醋酸（上海化學(xué)試劑有限公司，分析純），阿魏酸對(duì)照品（中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)：0733-9910）；當(dāng)歸、白芷、烏藥、小茴香、八角茴香、木香、香附、乳香、母丁香、肉桂、沉香均購于江蘇省淮陰藥材采購供應(yīng)站。

2 方法與結(jié)果

2.1 正交試驗(yàn)的設(shè)計(jì)[2-4]

以當(dāng)歸中阿魏酸的提取量為考察指標(biāo)，選用L9（34）正交試驗(yàn)，考察藥材提取所用乙醇的濃度、乙醇的用量、提取的時(shí)間以及提取次數(shù)，各因素水平見表1。

表1 提取工藝的因素水平

按處方量配比平行稱取藥材9份（58 g/份），依據(jù)表1具體試驗(yàn)參數(shù)進(jìn)行試驗(yàn)。

2.2 暖臍膏醇提取部分得膏率的測定方法

分別精密吸取50 mL醇提取液，置于精密稱重的潔凈蒸發(fā)皿中，水浴揮至近干，加入精密重量的柱層析硅膠，攪勻，低溫鼓風(fēng)干燥至恒重，置干燥器中冷卻后迅速稱定重量，按下式計(jì)算：干浸膏得率＝（W1/W）×100%。式中，W1為 50 mL提取液中干浸膏質(zhì)量；W為每份藥材的質(zhì)量。

2.3 阿魏酸含量的測定[5-8]

2.3.1 色譜條件 Agilent KR100-5 C18（5μm，4.6 mm×250 mm）；流動(dòng)相：甲醇-水-醋酸（25.0∶75.0∶0.7）；流速：1 mL/min；檢測波長為 280 nm；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：5 μL；理論塔板數(shù)按阿魏酸峰計(jì)算不低于2 000。

2.3.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取阿魏酸對(duì)照品適量，加流動(dòng)相溶解制成每1 mL含49.8μg阿魏酸的溶液，即得。

2.3.3 供試品溶液的制備 分別將9份醇提液濃縮并定容至200 mL 量瓶中，分別取 25 mL，用微孔濾膜（0.45μm）濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.3.4 線性關(guān)系的考察 精密稱取阿魏酸對(duì)照品適量，加甲醇制成濃度分別為 20.02、33.30、48.62、65.77、82.40、95.25μg/mL的溶液，分別精密稱取上述各對(duì)照品溶液5 μL，注入液相色譜儀，測定色譜峰面積。以對(duì)照品溶液進(jìn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)（X），峰面積為縱坐標(biāo)（Y），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算得回歸方程為 Y=1.54X×106＋3.32×105（r=0.999 6）。 表明阿魏酸進(jìn)樣量在0.10～0.47μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.3.5 樣品含量測定 分別精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液各5 μL，注入液相色譜儀，按《中國藥典》2010年版一部附錄ⅥD法[9]測定。

2.4 正交試驗(yàn)分析

根據(jù)得到的阿魏酸含量和得膏率結(jié)果，按下式計(jì)算綜合評(píng)分：綜合評(píng)分=（阿魏酸含量/最高阿魏酸含量）×100×0.7+（得膏率/最高得膏率）×100×0.3。 正交試驗(yàn)結(jié)果見表 2，方差分析結(jié)果見表3。

表2 醇提正交試驗(yàn)結(jié)果分析

表3 方差分析結(jié)果

根據(jù)數(shù)理統(tǒng)計(jì)理論，筆者對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行計(jì)算和分析。從表2和表3可知，影響提取效果的因素大小依次為：D＞B＞C＞A，較主要的因素是D，即提取次數(shù)對(duì)阿魏酸提取量和得膏率有顯著影響，其次是 B、C、A。水平優(yōu)勢為 A1＞A3＞A2，B2＞B1＞B3，C3＞C2＞C1，D2＞D1＞D3，因此最優(yōu)提取工藝為 A1B2C3D2。即加 9 倍量75%乙醇，提取90 min，再加6倍量75%乙醇，提取60 min。

2.5 驗(yàn)證試驗(yàn)

為了驗(yàn)證最佳工藝的合理性，按A1B2C3D2條件制備暖臍膏配方藥材3批，測定提取液得膏率以及阿魏酸的含量。結(jié)果各項(xiàng)指標(biāo)RSD均小于7%，表明該工藝較穩(wěn)定，重現(xiàn)性好。并且該項(xiàng)試驗(yàn)結(jié)果較正交試驗(yàn)結(jié)果好，表明優(yōu)化條件可行，故確定最佳工藝為A1B2C3D2。見表4。

表4 最佳工藝條件驗(yàn)證結(jié)果

3 討論

筆者在預(yù)實(shí)驗(yàn)時(shí)按照中藥材提取的常規(guī)操作，將藥材浸泡在溶劑中，為了減小這一操作對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，故將浸泡時(shí)間一致定為30 min。綜合考慮該劑型的需要，將得膏率作為指標(biāo)之一，最后以綜合評(píng)分的形式評(píng)價(jià)提取工藝。另外該方劑中的有效成分以小分子化合物居多，且有揮發(fā)性，所以在操作過程中需要注意實(shí)驗(yàn)環(huán)境的溫度和濕度，以減小實(shí)驗(yàn)誤差。實(shí)驗(yàn)證明，分次提取的效果最好，但是提取的時(shí)間均較長，這也是和實(shí)驗(yàn)室常規(guī)提取小分子物質(zhì)如揮發(fā)油成分的情況是吻合的。

[1]國家藥典委員會(huì).衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑[S].中國中藥雜志，1998：210-211.

[2]謝秀瓊，周淑芳，韓麗，等．現(xiàn)代中藥制劑新技術(shù)[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2004：348-351.

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[9]國家藥典委員會(huì).中國藥典[S].一部.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：附錄 37.