HPLC法測定大黃提取物中蘆薈大黃素、大黃酚、大黃素甲醚的含量

閆海燕

(寶雞文理學院 陜西省植物化學重點實驗室，陜西 寶雞 721013)

大黃(RheumpalmatumL.)為蓼科植物掌葉大黃、唐古特大黃和藥用大黃的干燥根及根莖，是一種多年生草本植物，其主要藥用成分為蒽醌類衍生物[1]。作者建立了同時測定大黃提取物中蘆薈大黃素、大黃酚、大黃素甲醚的高效液相色譜法，擬為該藥材的質量控制提供依據。

1 實驗

1.1 材料、試劑與儀器

馬蹄大黃，寶雞方晟藥業公司。

蘆薈大黃素、大黃酚、大黃素甲醚對照品，純度>98%，天津馬克生物技術有限公司；甲醇為色譜純；實驗用水為娃哈哈純凈水。

Agilent 1200型高效液相色譜儀，美國；CP225D型電子分析天平，德國Sartorius；KQ-300VDE型雙頻數控超聲波清洗器。

1.2 色譜條件

色譜柱：Prontosil-C18-ace-Eps(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流動相為甲醇-水(90∶10，體積比)，流速1.0 mL·min-1，檢測波長254 nm，柱溫25 ℃，進樣量20 μL。

1.3 對照品溶液的配制

精密稱取適量蘆薈大黃素、大黃酚、大黃素甲醚對照品，加甲醇定容至刻度，分別配制成32.6 μg·mL-1、65.0 μg·mL-1、49.6 μg·mL-1的對照品溶液，備用。

1.4 供試品溶液的制備

稱取0.5 g生藥大黃粉末，精密稱定，加入甲醇25 mL，加熱回流30 min，放冷，濾過，取濾液5 mL蒸干，殘渣加8%鹽酸溶液10 mL，超聲提取2 min，再加氯仿10 mL，加熱回流1.5 h，放冷，置分液漏斗中，用少量氯仿洗滌容器也置于分液漏斗中，分取氯仿層，酸液再用氯仿提取3次，每次10 mL，合并氯仿液，減壓回收氯仿，殘渣用甲醇溶解并轉移到10 mL容量瓶中定容。搖勻，濾過，取濾液作為供試品溶液。

1.5 線性關系考察

精密移取蘆薈大黃素、大黃酚、大黃素甲醚混合對照品溶液，按1.2色譜條件進樣測定。以峰面積(y)為縱坐標、對照品濃度(x)為橫坐標繪制標準曲線，并進行線性回歸。

1.6 精密度實驗

精密吸取同一濃度混合對照品溶液，在相同色譜條件下連續進樣6次，每次20 μL，分別測定峰面積。

1.7 穩定性實驗

取同一供試品溶液，按1.2色譜條件分別于室溫下第0 h、4 h、8 h、12 h、24 h進樣測定。

1.8 重現性實驗

分別精密稱取大黃粗粉6份并制成供試品溶液，按1.2色譜條件進樣測定。

1.9 加標回收率實驗

精密稱取已知含量大黃粗粉0.5 g，分別加入蘆薈大黃素、大黃酚、大黃素甲醚對照品適量，制成供試品溶液，按1.2色譜條件進樣測定。

1.10 樣品含量測定

精密稱取大黃粗粉0.5 g，制成供試品溶液，按1.2色譜條件進樣測定。

2 結果與討論

2.1 對照品與供試品的HPLC圖譜(圖1)

1.蘆薈大黃素 2.大黃酚 3.大黃素甲醚

2.2 線性回歸方程及線性范圍(表1)

表1 線性回歸方程及線性范圍

2.3 精密度

精密度實驗中，蘆薈大黃素、大黃酚、大黃素甲醚峰面積的RSD分別為0.60%、0.76%、0.27%(n=6)。表明儀器精密度良好。

2.4 穩定性

穩定性實驗中，蘆薈大黃素、大黃酚、大黃素甲醚的RSD分別為0.94%、1.36%、1.23%(n=5)。表明供試品溶液在24 h內穩定。

2.5 重現性

重現性實驗中，蘆薈大黃素、大黃酚、大黃素甲醚的RSD分別為1.36%、0.96%、1.96%(n=6)。表明該方法重現性良好。

2.6 加標回收率

測定結果表明，蘆薈大黃素、大黃酚、大黃素甲醚的平均加標回收率分別為115.5%、98.1%、99.9%。

2.7 樣品含量

測定結果表明，產自甘肅的馬蹄大黃中蘆薈大黃素、大黃酚、大黃素甲醚的含量分別為0.66 mg·g-1、1.98 mg·g-1、2.61 mg·g-1。

2.8 討論

以往文獻常用酸性水-甲醇[2]、TFA-HCN系統為流動相[3]。本研究采用甲醇-水為流動相，操作簡便，出峰快，峰形對稱，分離度高且實驗后色譜柱易清洗，取得了滿意效果。

3 結論

建立了同時測定大黃提取物中蘆薈大黃素、大黃酚、大黃素甲醚含量的HPLC方法。結果表明，蘆薈大黃素、大黃酚、大黃素甲醚分別在1.3～10.4 μg·mL-1、1.3～6.5 μg·mL-1、3.0～12.0 μg·mL-1范圍內線性關系良好，R2分別為0.9997、0.9999、0.9992，平均加標回收率分別為115.5%、98.1%、99.9%。該方法操作簡單、結果準確、靈敏度高，可用于大黃提取物的質量控制。

參考文獻：

[1] 徐翔，酈柏平,張慧芬.大黃的研究進展[J].上海中醫藥雜志，2003，37(4)：56-59.

[2] 徐世霞.HPLC法測定枳實導滯丸中蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚及大黃素甲醚的含量[J].中國藥師，2011，14(7)：971-973.

[3] 鄭志華,祝晨蔯.HPLC法測定大黃提取物中5種蒽醌的含量[J].廣東藥學院學報，2004，20(6)：594-595.