DC-CIK細胞聯合手術治療原發性肝癌的臨床研究

王 鄭

重慶市開縣人民醫院外二科，重慶 405400

原發性肝癌作為一種惡性腫瘤，單純的肝切除手術治療不能達到滿意的效果。肝癌的發生、發展與機體免疫密切相關[1]。隨著免疫分子和細胞生物學的發展，樹突狀細胞（DC）與細胞因子誘導的殺傷細胞（CIK）聯合介導的過繼免疫細胞治療成為手術治療、化療、放療等的重要輔助手段[2-3]。原發性肝癌的治療手段由單純手術治療逐漸向多手段聯合治療發展，成為原發性肝癌治療發展的新方向。但目前對DC-CIK細胞治療聯合手術治療的臨床研究資料較少，其效果及可靠性尚待進一步研究。本文總結我院DC-CIK細胞治療聯合手術治療的原發性肝癌患者資料，探討DC-CIK細胞治療聯合手術治療原發性肝癌的可行性及適應證。

1 資料與方法

1.1 一般資料

實驗組為2007年1月～2009年2月在我院住院治療的原發性肝癌患者76例，其中，男58例，女18例；平均年齡（48.9±14.7）歲；46例合并乙型肝炎后肝硬化，7例合并門靜脈高壓；根據肝功能Child-pugh標準分級，患者全部為Child-A 級；甲胎蛋白（AFP）<5 μg/mL 者 4例，AFP<400 μg/mL者39例；AFP≥400 μg/mL者 33例。所有患者或法定代理人知情并簽署《知情同意書》，通過醫院倫理委員會同意后接受DC-CIK細胞回輸治療。對照組為往年經我院單純手術治療的原發性肝癌患者76例，其中，男60例，女16例；平均年齡（49.8±15.3）歲；48例合并乙型肝炎后肝硬化，5例合并門靜脈高壓；全部為Child-A級患者；AFP<5 μg/mL者5例，AFP<400 μg/mL 者 39例；AFP ≥ 400 μg/mL 者 32例。 對照組與實驗組嚴格按病情、年齡進行1∶1匹配，年齡相差2歲為宜，兩組不同病情所占相應比例差異無統計學意義 （P>0.05），兩組具有可比性。

1.2 納入標準

①肝內多發腫瘤病灶≤3個；②主病灶≥5 cm，子病灶≤3 cm且與主病灶分屬不同肝段；③無門靜脈主干、下腔靜脈、肝靜脈、肝靜脈癌栓，排除肝外轉移。腫瘤的數目與位置通過B超和MRI共同定位。

1.3 方法

1.3.1 實驗組與對照組治療方法 實驗組患者采用聯合手術治療和自體DC-CIK細胞回輸方法治療，對照組只接受單純手術治療。

1.3.2 手術方法 患者病灶均進行右上腹“┙”形切口，按照肝癌切除“左規右不規”原則對主病灶先行切除，然后縫扎創面并止血。術后第3、7、14天定期復查肝功能、AFP，如發現并發癥及時對癥處理。術后每個月定期復查CT、肝功能和AFP，判斷患者與腫瘤的發展及轉歸情況，根據實際情況行肝動脈栓塞化療或其他補充治療。

1.3.3 自體DC-CIK細胞制備方法 DC細胞：采用血細胞分離機分離患者外周血單個核細胞，體積為0.3倍血容量。采用Ficoll淋巴細胞分離液從單個核細胞分離淋巴細胞，用培養液洗滌2次，BIN無血清培養基混懸于培養瓶中，置37℃5%CO2孵育箱中，2 h后將懸浮細胞移出，加入IL-4（500 U/L）、GM-CSF（1 000 U/mL）繼續培養，2～3 d換液 1次，第 6 天加入TNF-α（500 U/mL）。CIK細胞培養：分離后加入重組人IFN-γ（1 000 U/mL）和10%AB 型人血清的 RPMI 1640培養液，24 h后更換成含100 ng/mL小鼠抗人CD3單克隆抗體、1 000 U/mL IL-1和IL-2的RPMI 1640完全培養液繼續培養，2 d后換含IL-2的完全培養液隔日換液維持培養。DCCIK細胞培養：采集第7天的DC和CIK細胞，按1∶5混合培養，3 d 后開始應用。控制標準：CD3+、CD56+、NKT≥50%，CD3+CD8+≥30%，細胞存活率≥95%，不含細菌和內毒素。

1.3.4 DC-CIK細胞回輸方法 靜脈輸注DC-CIK細胞5×109/L，4次為1個療程，每例患者至少治療3個療程，最多治療8個療程。

1.4 療效評價

療效評價按照RECIST實體瘤近期療效評價標準進行，分為完全緩解（CR）、部分緩解（PR）、疾病穩定（SD）和疾病進展（PD）。總有效=CR+PR+SD。同時隨訪觀察3年生存率。

1.5 統計學方法

采用SPSS 18.0統計學軟件進行數據分析，計數資料用率表示，組間比較采用χ2檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 患者一般恢復情況比較

治療前，實驗組與對照組各方面差異均無統計學意義（P>0.05）。治療后，實驗組各方面恢復情況均優于對照組，差異有統計學意義（P<0.05）。兩組患者一般情況均較治療前好轉，精神狀態、食欲、睡眠及生活質量均有所提高，疼痛減輕患者增多，差異有統計學意義（P<0.05）。見表1。

表1 兩組患者治療前后一般恢復情況比較[n（%）]

2.2 兩組臨床療效比較

實驗組療效評定：CR 0例，PR 43例，SD 22例，PD 11例，治療總有效率為85.5%；對照組療效評定：CR 0例，PR 24例，SD 7例，PD 39例，治療總有效率為40.8%。實驗組總有效率較對照組高，差異有高度統計學意義（P<0.01）。見表2。

表2 兩組臨床療效比較（例）

2.3 兩組3年生存率比較

實驗組經過手術治療聯合自體DC-CIK細胞回輸后，每隔6個月進行隨訪，生存36個月以上者7例，生存25～36個月者11例，生存13～24個月者19例，生存6～12個月者34例，少于6個月者5例（主要是肝硬化伴腹水病例），3年生存率為9.2%。對照組生存36個月以上者3例，生存25～36個月者3例，生存13～24個月者13例，生存6～12個月者26例，少于6個月者30例，3年生存率為3.9%。兩組比較，差異有高度統計學意義（P<0.01）。見表3。

表3 兩組3年生存率比較[n（%）]

2.4 不良反應情況

兩組均未見有明顯心、肝、腎等毒副作用。

3 討論

隨著社會經濟水平的飛速發展，人們生活壓力加大，環境、飲食也不斷受到污染，種種原因導致癌癥的發病率不斷升高，其中，原發性肝癌是一種常見的惡性腫瘤，其發生率逐年上升，成為嚴重危害人類身心健康的惡性疾病。我國是肝癌的高發國家之一，其對我國社會經濟等造成的損失較為嚴重，已成為嚴重影響我國公民生命的危險之一[4]。由于原發性肝癌發病非常隱匿，發病初期患者無任何不適感并且極易忽視相關癥狀，當患者察覺機體出現病癥和不適感時，大都進入晚期，此時再進行手術治療已經無法阻止疾病的發展。手術時機是手術治療該病的關鍵。隨著現代科學技術的發展，肝動脈栓塞化療、放療等新方法不斷產生，但尚無一種有效的治療方法，手術治療仍然是主導方法[5-6]，其他方法也僅僅作為輔助方法進行治療。

免疫分子和細胞生物學的發展越來越趨于成熟，DCCIK細胞介導的過繼免疫細胞治療成為手術治療、化療、放療等方法的重要輔助手段[7]。免疫細胞的回輸對術后肝癌患者的恢復起到明顯的促進作用，筆者研究發現，手術治療聯合DC-CIK細胞回輸后，患者的精神狀態、睡眠質量，生活質量等均有明顯提升，肝區疼痛率明顯降低。手術治療與腫瘤細胞免疫治療的聯合治療越來越受到重視。本研究發現，手術治療聯合自體DC-CIK細胞回輸治療，除了可以明顯提高患者的生活質量外，而且對機體的心、肝、腎等組織基本無毒副作用，可以作為手術的輔助手段進行治療。經RECIST實體瘤近期療效評價標準進行評定的結果顯示，手術治療與腫瘤細胞免疫治療的聯合治療可以明顯提高手術患者治療效果，緩解病情的效果較好，能有效使病情趨于穩定，與單純進行手術治療相比，總體治療有效率明顯提高，分析可能與免疫細胞的增強可以通過分泌一些細胞因子發揮重要作用有關[8]。經過3年的隨訪和對對照組患者資料的回顧，發現患者術后經過DC-CIK細胞回輸治療可以使病情穩定，生存率明顯提高，特別是1年以上生存率提高最明顯，說明手術聯合自體DC-CIK細胞回輸治療可以大大提高患者生存率，治療效果較單純手術治療好。可能機制為 CIK在體內可以黏附并穿過內皮細胞準確定位到血管外的腫瘤組織，進而殺傷腫瘤細胞，改造機體的內免疫環境，在DC細胞的存在下體液免疫也被活化進而可以起到協同作用[9-10]，從而起到促進康復、遏制腫瘤的作用。

隨著人們對生命質量的重視，疾病治療勢必向高效、無毒副作用的方向發展，單純的手術治療已經不能滿足患者的需求，但目前尚無方法代替手術治療，因此，積極尋求術后有效的輔助治療方法勢在必行。筆者對該方面進行了研究，以期尋找較好較可靠的輔助治療手段。經過筆者的臨床研究證實，手術治療聯合自體DC-CIK細胞回輸療法對原發性肝癌的療效值得肯定，治療有效率和生存率均有較大提高，但尚有不足之處，有待進一步完善。

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