血管內皮生長因子在喉癌中的表達及其與血管生成和轉移的相關性

任光輝 董 朝 耿中利 李鴻濤 馬斌林

(新疆醫科大學附屬腫瘤醫院乳腺頭頸外科，新疆 烏魯木齊 830011)

已有研究表明，幾乎所有實體腫瘤的生長和轉移均依賴于腫瘤的血管生成。腫瘤血管形成受許多因素的調節，其中具有重要實際意義的是血管內皮細胞生長因子(VEGF)。絕大多數惡性腫瘤中，VEGF呈高表達，促進內皮細胞分裂、增殖，誘導血管新生，并直接作用于腫瘤細胞刺激其生長〔1〕。本文對我院診治的喉癌患者檢測VEGF及微血管密度(MVD)表達情況，探討其在喉癌發生、發展中的作用及臨床意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 病例組50例喉癌患者來自我院2006年6月至2009年6月住院患者，男28例，女22例，年齡50～82〔平均(61.4±10.9)〕歲。所有病例均經病理確診，依據TNM臨床分期，Ⅰ～Ⅱ期21例，Ⅲ～Ⅳ期29例。根據病理中淋巴結轉移與否分為轉移組與未轉移組，轉移組26例，未轉移組24例。20例對照來自我院聲帶息肉患者，男12例，女8例，年齡48～81〔平均(61.5±12.1)〕歲。兩組性別、年齡無統計學意義。

1.2 方法

1.2.1 試劑與方法 一抗鼠CD34單抗、兔VEGF多抗及即用型SABC試劑盒為武漢博士德生物工程有限公司生產。嚴格按試劑盒說明書操作，采用免疫組化SABC法檢測，VEGF工作濃度為1∶150稀釋，CD34工作濃度為1∶50稀釋，PBS代替一抗作為陰性對照，用已知陽性喉癌切片作為陽性對照。

1.2.2 結果判定 VEGF判定:隨機以200倍視野下計數染成棕黃色的腫瘤細胞數占整個腫瘤細胞的比例，至少計數5個視野，1 000個腫瘤細胞。VEGF的表達強度分為0～3級，陽性細胞數 ＜10%計為0，10% ～25%為1，25% ～50%為2，＞50%為3。MVD計數:CD34抗體顯示MVD，凡是被抗體染成棕黃色或棕褐色的內皮細胞或細胞簇作為一個微血管計數，即先在低倍鏡下尋找瘤內微血管密集區，選取5個血管豐富的視野，于200倍視野內計數，取平均值，即為MVD。

1.3 統計學方法 應用SPSS12.0統計軟件進行分析，計量資料用±s表示，計數資料以%表示，相關性分析用非參數檢驗的Pearson相關系數計算。

2 結果

2.1 兩組中VEGF及MVD的表達情況 50例喉癌組織中VEGF表達陽性例數為31例(62%)明顯高于對照組陽性例數〔5例(20%)，P＜0.01〕。喉癌組織MVD表達值亦高于對照組〔(22.35±2.1)vs(9.1±3.1)，P ＜0.01〕。Pearson相關分析結果顯示，喉癌患者VEGF水平與癌組織中MVD呈明顯正相關(r=0.729，P=0.005)。

2.2 VEGF陽性表達與喉癌臨床病理參數的關系 VEGF陽性表達率與TNM分期及頸淋巴結轉移有關。隨臨床分期的進展，VEGF表達率增高;且在有淋巴結轉移組高于無淋巴結轉移組，兩者比較有統計學差異(P＜0.01)。見表1。

表1 VEGF陽性表達率與喉癌臨床病理參數的關系(n)

3 討論

惡性腫瘤可呈現出無限制的生長、增殖和侵襲的特點，這一切都依賴于建立更多的血管網絡供給大量的營養物質，并帶走更多的代謝產物，其中VEGF在腫瘤血管生成中發揮著重要作用〔2，3〕。本組結果說明 VEGF在喉癌發生中起重要作用。VEGF是一個分子量為34～35 kD的高度糖基化的堿性蛋白，由分子量為17～22 kD的同源雙聚體構成。人體的許多組織可檢測到VEGF的表達，VEGF在腫瘤細胞株中的表達也很普遍，目前已肯定的有胃腸道原發腺瘤、喉癌、腎癌、乳腺癌、肺癌、黑色素瘤等。研究表明，腫瘤生長到1～2 mm3時，必須有新生血管的形成，才能保證其快速生長〔4，5〕。VEGF生物學功能主要有:(1)促進血管形成。作為特異內皮細胞分裂素，能直接促進內皮細胞分裂，增殖，體外促進細胞生長，并可誘導血管增生。(2)增加血管通透性。(3)增加組織因子的產生，可直接改變內皮細胞基因表達，促進細胞浸潤，有利于血管形成。腫瘤新生血管有重要作用:(1)輸送氧氣、營養，轉運代謝產物，滿足腫瘤組織無限生長的需要。(2)內皮細胞本身對腫瘤細胞有旁分泌刺激作用，產生生長因子、細胞因子促進腫瘤細胞生長轉移。(3)腫瘤的血管化使癌細胞易于接近血管系統，并且腫瘤血管的結構缺陷更有利于腫瘤的血管播撒。VEGF可能通過促進喉癌新生血管及淋巴管的增生、提高血管的滲透性等機制促進癌組織的發展和轉移〔6〕。惡性腫瘤轉移很少發生在血管新生之前，腫瘤的轉移及其在轉移部位的生長也依賴腫瘤組織的血管新生。腫瘤血管生成分前血管期與血管期，缺乏血液供應的腫瘤細胞主要靠彌散供氧，其體積一般不會超過1～2 mm3，可存在數月至數年而不發生轉移，一旦其獲得血供則迅速生長并發生轉移。

腫瘤的生長和轉移受多種因素的影響，其中腫瘤內MVD是影響腫瘤生物學特征的重要因素之一。近年來，人們已經發現腫瘤內的血管形成程度與腫瘤的臨床病理特征和預后有密切的關系。MVD是利用針對血管內皮細胞抗原的免疫組化技術對腫瘤血管進行定量，可直接量化反映腫瘤血管生成的程度。MVD指切片中血管“熱點”區在1個200倍視野下的血管數目。一般認為腫瘤的轉移復發與“熱點”區的MVD有良好的相關性。本組喉癌患者VEGF水平與癌組織中MVD呈明顯正相關。表明隨著VEGF水平的增高，MVD增多，血管增生，促進了腫瘤的生長。

綜上所述，VEGF促進血管再生，在喉癌發生、發展過程中起到了重要作用，與淋巴轉移明顯相關。喉癌中VEGF的表達與MVD呈正相關，可以作為判斷腫瘤惡性程度和估計預后的獨立影響因子，為抗血管治療提供依據。抗腫瘤血管生成的基因治療策略適用于多種實體瘤，隨著對VEGF在喉癌發病機制中作用研究的進一步深入，抑制血管形成治療腫瘤的新策略會越來越被重視，配合其他抗腫瘤方法必將提高治療效果。

1 李能蓮，張 煦，王雅莉.缺氧誘導因子及其應答基因BNIP3和血管內皮生長因子在胃腺癌中表達及臨床意義〔J〕.中華腫瘤雜志，2008;30(1):44-7.

2 楊東霞，韓艷春，劉魯英，等.Elf-1和VEGF在非小細胞肺癌組織中的表達及意義〔J〕.癌癥，2009;28(7):762-7.

3 方淯靖，萬德森.結直腸癌肝轉移的發生機制〔J〕.癌癥，2008;27(5):549-54.

4 黃 方，康 瑞，吳春林.VEGF-C、NF-κBp65及 Survivin在鼻咽癌中的表達及臨床意義〔J〕.山東大學學報(醫學版)，2009;47(6):83-7.

5 彭曉林，王斌全，劉 濤，等.喉癌血清VEGF水平與癌組織中VEGF表達及MVD的關系〔J〕.山東醫藥，2008;48(32):31-2.

6 盧 培，陸慧琦，韓煥興，等.2種檢測VEGF-C和VEGFR-3基因表達的方法在診斷食管癌淋巴結轉移中的價值〔J〕.檢驗醫學，2009;24(6):446-9.