心力衰竭大鼠不同時期血漿內皮素-1、降鈣素基因相關肽及神經肽Y水平變化及益氣溫陽活血方對其影響

楊冬花 付 蓉 羅建華 袁志柳 (貴州省人民醫院干醫科，貴州 貴陽 550002)

長期過度激活的神經內分泌激素系統可加重血流動力學紊亂，使心臟前、后負荷增高，進一步促使心室重塑持續進行，最終導致慢性心力衰竭惡化〔1〕。中藥復方益氣溫陽活血方對改善慢性心力衰竭患者臨床癥狀非常明顯〔2〕，但確切的作用機制目前尚不清楚。本研究通過觀察益氣溫陽活血方對心力衰竭大鼠血漿內皮素(ET)-1、降鈣素基因相關肽(CGRP)、神經肽Y(NPY)等血管活性肽水平的影響。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 健康Wistar大鼠90只，體重(250±10)g，雌雄各半，由貴陽醫學院實驗動物學部提供。

1.2 益氣溫陽活血方主要成分 人參、黃芪、丹參、益母草各30 g，白術、茯苓各15 g，桂枝9 g等11味中藥。藥材從貴州省人民醫院中藥房一次性選購，生藥按比例取好，加水浸泡1 h，第一遍煮沸40 min，濾渣取汁;再加水煮沸15 min，濾渣取汁，合并2次煎液，水浴中濃縮至每毫升煎液含生藥4 g備用。

1.3 試劑 ET-1由北京科美東雅生物技術有限公司提供，CGRP、NPY由北京解放軍總醫院東亞免疫技術研究所提供。

1.4 方法

1.4.1 心力衰竭的模型制備 阿霉素2.5 mg/kg尾靜脈注射，2 次/w，連續8 w。

1.4.2 動物分組及給藥 將上述所購大鼠隨機分組為:正常組，對照組，治療組。正常組10只，對照組及治療組分為不同的時間段組(第1、3、5、8周末)，每組10只。實驗開始治療組給予益氣溫陽活血方0.8 ml/100 g灌胃(相當于人臨床劑量10倍)，每日1次，正常組及對照組則以等量生理鹽水灌胃。所有大鼠均予標準飼料飼養，自由飲水。試驗結束后麻醉測量左室結構和功能，抽取血漿，后處死動物，取心臟組織，－70℃低溫冰箱中凍存，以檢測其他指標。

1.4.3 心功能測定 對各組大鼠實驗結束后對大鼠行超聲心動圖檢查。分別測量左室舒張末期內徑(LVDd)、左室收縮末期內經(LVDs)、左室后壁厚度(LVPW)、室間隔厚度(IVS)，推算射血分數(EF)。

1.4.4 血漿ET-1、CGRP、NPY的測定 均采用放射免疫法，嚴格按試劑盒說明書檢測。

2 結果

2.1 各組一般情況及死亡情況 整個實驗期間，正常及治療組大鼠毛色有光澤，雙眼靈活有神，行動敏捷，對周圍變化靈敏。模型大鼠在第1周后先后出現癥狀，如活動減少、蜷縮、進食減少、皮毛松軟、體重減輕等，此后癥狀呈逐漸加重趨勢，從第5周后出現程度不一的腹水，唇周青紫，雙耳蒼白，呼吸減弱，毛色枯槁、散亂豎起，脫毛，嚴重者行走不穩，消瘦，口唇及雙耳發紺，個別開始死亡。正常及治療組大鼠全部存活，模型組大鼠第5周末組死亡1只，第8周模組死亡2只，兩組模型大鼠生存率分別為90%和80%。

2.2 各組心臟結構及功能的檢測 與正常組比較，模型組第5周末及第8周LVDd、LVDs明顯擴大，有顯著性差異(均P＜0.01);而EF值與正常組比較，模型組第5周末及第8周末則明顯降低(均P＜0.01)。治療各組與正常組比較，差異均無顯著性(均P＞0.05);治療組第5、8周末與模型組第5、8周末比較均有顯著性差異(均P＜0.05)。見表1。

2.3 各組血漿ET-1、CGRP、NPY水平的測定 與正常組比較，模型組第1周末ET-1、NPY含量明顯升高，而CGRP則明顯降低(均P＜0.05)，并且隨著造模時間的延長，ET-1、NPY含量進性升高，CGRP進行性降低，第5周末后差異更顯著(均P＜0.01)。見表2。

表1 各組心臟結構及功能的檢測(±s)

表1 各組心臟結構及功能的檢測(±s)

與正常組比較:1)P＜0.01;與同一時間點模型組比較:2)P＜0.05

?

表2 各組血漿ET-1、CGRP、NPY水平的測定(±s)

表2 各組血漿ET-1、CGRP、NPY水平的測定(±s)

與正常組比較:1)P＜0.05，2)P＜0.01;與同一時間點模型組比較:3)P＜0.05

?

3 討論

阿霉素是一種廣譜高效的蒽醌類抗腫瘤化療藥物，具有嚴重的心臟毒性。長期使用阿霉素可致與累計量有關的擴張性心肌病和充血性心力衰竭，是目前較為常用、且成熟的心力衰竭動物模型。本實驗模型動物以阿霉素2.5 mg/kg尾靜脈注射，2次/w，累積量達40 mg/kg后，所有大鼠均出現心腔擴大、不同程度的心衰表現，并且部分大鼠出現死亡，與人類心力衰竭臨床表現相同。多次驗證造模方法，模型大鼠均出現上述表現，說明造模成功。

ET-1主要來源于血管內皮、心內膜、心肌細胞，是目前為止發現最強的縮血管肽類物質〔3〕。ET與兒茶酚胺及血管緊張素Ⅱ之間的協同作用促使心肌細胞肥大，誘導心肌細胞胚胎型基因的表達和影響成纖維細胞的膠原合成代謝，導致心肌間質纖維化，構成心室重構的病理基礎〔4，5〕。

CGRP是機體重要的內源性心血管保護物質，是體內最強的血管擴張劑之一，有明顯拮抗血管收縮劑的作用，CGRP是一種內源性舒血管活性肽，其擴血管作用比乙酰膽堿、5-羥色胺、P物質等均強，且呈不同程度的劑量依賴性〔6〕。CGRP還具能改善內皮細胞的功能，促進血管修復;有降低血液黏度、增加冠脈血流量、拮抗內皮素及內源性細胞保護等作用〔7〕。NPY具有很強的收縮血管作用，能引起劑量依賴的冠脈收縮反應，增強冠脈阻力，并引起心臟缺血，繼而引起左心室EF下降，對心臟有負性肌力作用，NPY明顯升高，其含量越高，對心臟損害作用越大〔8〕。本研究表明在初始的心肌損傷階段，即使機體尚處于代償期，血管內皮功能已出現障礙，ET-1、NPY及CGRP參與心衰早期對心肌損傷的病理生理進程，為重要的血管活性肽，可作為心力衰竭早期預警標志物。

益氣溫陽活血方主要成分人參、黃芪、丹參、益母草各30 g，白術、茯苓各15 g，桂枝9 g等11味中藥組成，以參芪桂益氣通陽，丹參益母草活血化瘀，茯苓白術健脾利水，且益母草既活血又利水，切中心衰病機。近年來的研究表明神經內分泌-細胞因子系統引起心肌重塑主要是通過信號傳導途徑和細胞凋亡過程參與的，這些細胞因子其下游都要經NF-κB通路〔9〕。而NF-κB的過表達可啟動心房利鈉因子(ANF)、BNP的表達并引起心肌細胞肥大，激活金屬基質蛋白酶-9(MMP-9)，影響細胞外基質的降解平衡，促使心室重構、心腔擴大和心衰發生〔10〕。故我們推測，在心力衰竭的早期，益氣溫陽活血方通過減少心力衰竭大鼠血漿ET-1、NPY的含量及升高CGRP含量，抑制NF-κB信號通路的活化，減少ANF、BNP、MMP-9等促使心室肥厚、心腔擴大因子的表達，阻斷心室重塑，增加心臟的射血分數，改善心臟功能，減少死亡率，具體作用機制有待于進一步研究證實。

1 鐘 萍，李 志，唐朝樞.充血性心力衰竭患者血管活性物質變化的臨床意義〔J〕.中國實用內科雜志，2005;25(1):27-9.

2 付 蓉，楊冬花.益心湯治療慢性心力衰竭96例〔J〕.新中醫，2006;38(9):68-9.

3 鄭 婧，任利群.內皮素1在充血性心力衰竭發生發展中的作用〔J〕.醫學綜述，2010;16(20):3133-5.

4 Raichlin E，Prasad A，Mathew V，et al.Efficacy and safety of atrasentan in patients with cardiovascular risk and early atherosclerosis〔J〕.Hypertension，2008;52(3):522-8.

5 Bao Y，Li R，Jiang J，et al.Activation of peroxisome proliferator-activated receptor gamma inhibits endothelin-1-induced cardiac hypertrophy via the calcineurin/NFAT signaling pathway〔J〕.Mol Cell Biochem，2008;317(1/2):189-96.

6 曾鐵功，李艷偉，趙晉英.降鈣素基因相關肽生物學作用及藥理學應用〔J〕.熱帶醫學雜志，2009;9(11):1348-52.

7 吳立榮，冉 迅，趙 卓.萘哌地爾對慢性心力衰竭患者神經內分泌的影響〔J〕.中國實用內科雜志，2007;27(2):133-6.

8 王鎖兒，張俊義，王新亮.NPY的研究現狀及進展〔J〕.內蒙古醫學雜志，2010;42(6):679-81.

9 吳錦暉，張新軍，吳琳娜.NF-κB在慢性心力衰竭發病機制中的研究〔J〕.華西醫學，2007;22(4):925-6.

10 Van der Heiden K，Cuhlmann S，Luong le A，et al.Role of nuclear factor kappaB in cardiovascular health and disease〔J〕.Clin Sci，2010;118(10):593-605.