人絨毛膜促性腺激素對實驗性大鼠乳腺癌化學預防作用的分析

劉 藝，王 菡，陸 迪

(牡丹江醫學院藥學院中心實驗室，黑龍江牡丹江157000)

通過人絨毛膜促性腺激素(human chorionic gonadochopin，hCG)仿照妊娠可使乳腺組織結構更充分分化，從而預防乳腺癌的發生。類似于他莫昔芬(tamoxifen，TAM)的抗雌激素藥已確定為能夠有效預防乳腺癌［1］。本實驗對于各個時段采用hCG來預防乳腺癌進行討論研究，將hCG和TAM所產生的預防作用進行對比分析。

1 材料與方法

1.1 對象 選取未經產的SD雌性大鼠50只，在動物實驗室飼養，國標鼠料飲食，濕度40%～50%，溫度(22±2)℃。50只大鼠隨機分為hCG早干預組，hCG晚干預組，TAM組，暴露組，空白對照組各10只。

1.2 方法 hCG早干預組:自50 d齡開始，向腹腔內每天注射 hCG 100 U，共注射 21 d，在 134、141、217、262日齡向腹腔中注射甲基亞硝脲50 mg/kg的致癌劑。hCG晚干預組:從92日齡開始，每天向腹腔中注射 100 U hCG，共注射 21 d，在 134、141、217、262日齡開始向腹腔中注射50 mg/kg致癌劑甲基亞硝脲。TAM組:自92 d開始，每天在大鼠皮下注射1 mg/kg的 TAM，共注射 21 d，在 134、141、217、262 日齡分別向腹腔中注射50 mg/kg的甲基亞硝脲致癌劑。暴露組:于134、141、217、262日齡向腹腔中注射50 mg/kg的甲基亞硝脲致癌劑。空白對照組:不進行藥物治療。于276日齡將5組大鼠全部處死。

1.3 病理學檢查 將空白對照組所處死的大鼠，從頸部到腹股溝進行備皮以后，取下全塊頸部到腹股溝中皮膚的皮下乳腺組織，用甲醛(10%)對其進行固定3 h后，將梯度乙醇進行脫水處理，二甲苯透明，包埋，浸蠟，切成厚度大致為 4 μm片狀，然后進行HE染色，最后將其進行封片。將其于100倍的顯微鏡下進行觀察，將5組中全部大鼠乳腺通過隨機選擇的方法取3個視野，與常用的標準進行對照，對成熟小葉(lobule，Lob)、泡狀芽苞(alvedar buds，AB)、終末導管(terminalduct，TD)以及終末芽苞(terminal end buds，TEB)的結構數目進行分別計量。

1.4 統計學方法 采用SPSS 13.0軟件進行統計處理，大鼠成癌情況比較采用Fisher確切概率法，計數資料采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 5組大鼠成癌情況比較 各組均有乳腺腫瘤發生，肉眼可見的腫瘤最大直徑約1.8 cm，最小直徑約0.5 cm。hCG早干預組與暴露組的成癌率比較差異有統計學意義(P＜0.05)，與TAM組的成癌率相比差異無統計學意義(P＞0.05)。hCG晚干預組與暴露組的成癌率相比差異無統計學意義(P＞0.05)(表1)。

表1 5組大鼠成癌情況比較

2.2 5組大鼠乳腺的 TEB、TD、AB、Lob 構成比較5組大鼠乳腺TEB、TD、AB和Lob構成比較差異有統計學意義(χ2=6.04，P ＜0.05)。hCG 早、晚干預組與暴露組比較差異有統計學意義(χ2=4.65、5.29，P ＜0.05)，Lob、AB 比例高于暴露組，而 TD、TEB 比例低于暴露組(表2)。

表2 5組大鼠乳腺的TEB、TD、AB、Lob構成情況

3 討論

在臨床、流行病學和通過實驗而取得的數據都表明，人類患乳腺癌離不開機體中內分泌的環境以及生育情況。與未經產的女性相比，經產女性發生乳腺癌的概率較小，而且早期的妊娠與晚期的妊娠女性相比發生的概率也較小，妊娠的次數與發生乳腺癌概率呈反比［2］。這種早期足月妊娠保護乳腺的效果不僅在人類中有所體現，而且實驗性的動物模型同樣具有該特征。

本組資料顯示，hCG早干預組與暴露組的成癌率相比差異有統計學意義(P＜0.05)，說明較早進行hCG干預是可以預防大鼠乳腺癌的發生，并且hCG早干預組與TAM組的成癌率相比差異無統計學意義(P＞0.05)，說明hCG的預防作用與TAM是相當的。hCG晚干預組與暴露組的成癌率相比差異無統計學意義(P＞0.05)。從數據上可以看出，hCG晚干預組相對于暴露組，仍然有降低大鼠乳腺癌發生的趨勢。

本研究對大鼠的乳腺組織的類型進行了深層次的觀察，hCG的早、晚干預組與暴露組大鼠的乳腺組織中的TD、TEB、AB以及Lob結構比例相比，差異有統計學意義，大鼠患乳腺癌的概率與乳腺組織中期分化成熟的程度密切相關。

hCG的早、晚干預組中，大鼠的乳腺組織在分化上已經完全成熟，其與暴露組相比，在AB以及 Lob的結構上比例更大，而TEB以及TD的比例更小，Lob結構的比例顯著增加，TD結構的比例顯著降低，這說明hCG的早、晚干預組中，乳腺的發育已經十分成熟，造成其對致癌劑相對不敏感，這樣hCG的早、晚干預組與暴露組比較患乳腺癌的概率更低。

TAM組大鼠的乳腺的結構比率近似于暴露組，其TD結構都十分高，而Lob結構都十分低，TAM乳腺癌出現的比例與暴露組相比明顯較低，其可能原因是hCG和TAM對乳腺癌進行預防的機制不同，在TAM下乳腺結構并未達到成熟階段，競爭性將雌激素的受體進行控制進而將患乳腺癌的概率降低。空白對照組中大鼠乳腺并沒有完全發育，TD結構的比例仍然很高，Lob的結構比例較少，如致癌劑對其進行攻擊，癌變的概率仍然很大。

hCG將乳腺最后變為成熟的手段，至今還沒有確定。常規乳腺癌細胞、乳腺組織和卵巢中均有hCG受體，而乳腺作用中hCG直接作用或hCG作用于卵巢后提高了雌、孕激素的指標，在孕激素以及雌激素作用下將乳腺變成熟的機制至今還不明確［3］。有進行體外細胞的實驗表明，hCG對乳腺的癌細胞將產生直接的作用，將增殖的概率降低。另外，關于動物的實驗表明，大鼠進行短時間、低劑量的使用孕、雌激素將對患乳腺癌的可能性起到直接降低的作用，而大劑量、長時間內的使用孕、雌激素可使大鼠患乳腺癌概率增高。

hCG結合hCG受體共同作用下可使乳腺的癌細胞凋亡。另外，有文獻報道，妊娠或者hCG就是分支乳腺組織，并在發育上朝著小葉的方向，而單純的孕激素與雌激素就是增殖乳腺末端結構TEB，而且孕激素+雌激素與hCG對大鼠分別作用后其乳腺組織中具有不同的基因表型［4］。這些實驗都證實了hCG將直接保護乳腺組織，并非全部靠孕、雌激素，且在對乳腺癌進行預防時，hCG作為其預防藥物為最佳選擇。

雖然大鼠乳腺與人類乳腺在發展上不能完全進行統一，但是應視大鼠的各個發育階段中成癌狀況對人類乳腺進行進一步分析，很多小型臨床試驗在hCG應用方面進行探索與研究。hCG的使用在預防乳腺癌方面應該是一種值得推廣的措施，與傳統預防的措施相比，優勢更加明顯。hCG是由自體產生的，具有微小的不良反應，在分化乳腺法上所用的時間更短，可以對腺癌的發生進行有效地預防［5］。hCG對乳腺癌的預防要有合適人群，其用量以及作用時間的確定對開展乳腺癌的一級預防有重要作用。

［1］陳中揚，李文萍，王頎.甲基亞硝脲快速誘導大鼠乳腺原位癌模型的實驗研究［J］.中華腫瘤防治雜志，2007，14(9):657-659.

［2］Lopez D，Sekharam M，Coppola D，et al.Purified human chorionic gonadotropin induces apoptosis in breast cancer［J］.Mol Cancer T-her，2008，7(9):2837-2844.

［3］Pourhoseingholi MA，Mehrabi Y，Alavi-Majd H，et al.Association between risk of breast cancer and fertility factors—a latentvariable approach［J］.Asian Pac J Cancer Prev，2008，9(2):309-312.

［4］Jacobson HI，Lemanski N，Agarwal A，et al.A proposed unified mechanism for the reduction of human breast cancer risk bythe hormones of pregnancy［J］.Cancer Prev Res，2010，3(2):212-220.

［5］Kocdor H，Kocdor MA，Russo J，et al.Human chorionic gonadotropin(hCG)prevents the transformed phenotypes induced by17 betaestradiol in human breast epithelial cells［J］.Cell BiolInt，2009，33(11):1135-1143.