曹 東,薛潤光,顧鑒秋
(1.云南中醫學院,云南 昆明 650500;2.云南省農業科學院高山經濟植物研究所,云南 麗江 674100)
瑪咖(Maca)屬于十字花科植物瑪咖獨行菜(Lepidium meyenii Walp.)一年生草本植物,原產于秘魯海拔3500m以上的安第斯山區。數千年來,作為當地土著居民的重要食物來源之一,因其具有豐富的營養價值和藥用功效,尤其是在增強精力和生育力等方面的功能,被人們視為安第斯山神賜予的珍貴禮物。以瑪咖為主要原料的保健品受到了世界各國的廣泛青睞。秘魯瑪咖主要含瑪咖酰胺、瑪咖烯、生物堿、芥子油苷、揮發油成分、類固醇物質及多種氨基酸,藥理研究表明,秘魯瑪咖能增強雄性性行為及增加精子數量,抗應激,調節內分泌、提高免疫、抗腫瘤、預防前列腺肥大、抗骨質疏松及增強營養等作用[1~2]。我省麗江和會澤兩地因海拔和地理環境與瑪咖原產地相似,瑪咖的種植已獲得成功[3],云南省農業科學院高山經濟植物研究所在海拔4000m左右的麗江高山地區,于2003年引種瑪咖成功,至今已有8年的歷史,目前麗江瑪咖已有片劑、酒等上市,但其生藥學、化學、藥理等基礎研究,仍屬空白。本實驗用麗江瑪咖為原料,篩選其增強雄性動物性行為的主要活性部位,為進一步深入研究其化學成分和藥效之間的相關性,為開發利用麗江瑪咖打基礎。
1.1 藥物與試劑 麗江瑪咖(Lepidium meyenii Walp.)飲片,由云南省農業科學院高山經濟植物研究所提供;麗江瑪咖石油醚、乙酸乙酯、正丁醇和水提取物,自制;萬艾可:輝瑞制藥有限公司,批號:95883011;復方鎖陽口服液(每毫升相當于生藥0.6g),由陜西關愛制藥有限公司提供(批號:20081101);苯甲酸雌二醇,上海通用藥業股份有限公司,批號:090502;石油醚,分析純,廣東華光化學廠有限公司,批號:20090911;乙酸乙酯,分析純,上海申博化工有限公司,批號:00912001;正丁醇,分析純,上海申博化工有限公司,批號:090706101;睪丸酮試劑盒,北京北方生物技術研究所,批號:110120;雌二醇試劑盒,北京北方生物技術研究所,批號:110120。
1.2 儀器 旋轉蒸發儀:A-1000S日本EYELA公司;AUW220型電子天平(上海精密科學儀器有限公司);LG-2.4A高速離心機,北京醫用離心機廠;微量移液器,上海大龍醫療設備有限公司;SN-695B型智能放免γ測量儀,上海原子核研究所日環儀器一廠。
1.3 動物 昆明種小鼠,清潔級,雌雄各半,體重18~22g,四川省醫學科學院實驗動物研究所動合格證號:SCXK(川)2008-14;
2.1 對雄性小鼠性行為的影響 參照文獻方法[4],選擇雄性性成熟小鼠正常飼養,隨機分為對照組(0.9%生理鹽水)、萬艾可組(0.013g/kg)、復方鎖陽口服液組(12g生藥/kg)、石油醚提取物組(13g生藥/kg)、乙酸乙酯提取物組(13g生藥/kg)、正丁醇提取物組(13g生藥/kg)、水提取物組(13g生藥/kg),除萬艾可組于試驗前1h灌胃給藥外,其余各組均連續灌胃給藥28d,灌胃容積均為0.2mL/10g。實驗前48h雌鼠皮下注射苯甲酸雌二醇(0.02mg/只),使動情期相同,試驗于晚上7~11時進行,將雄性小鼠單獨放入籠中(55cm×35cm×20cm)5min,使其適應環境,然后每籠加入1只雌鼠,觀察記錄捕捉潛伏期(自雌鼠投入至雄鼠第1次捕捉雌鼠的時間)、20min內雄鼠捕捉雌鼠的次數、交配潛伏期(自雌鼠投入至雄鼠第1次與雌鼠交配的時間)、20min內交配次數,結果見表1。
2.2 對雄性小鼠血清睪丸酮、雌二醇的影響 行為學指標測定后,各組雄鼠用10%水合氯醛腹腔注射麻醉,眼部取血,3000r/min,離心15min,取上清液,-20℃分裝冷藏,用SN-695B型智能放免γ測量儀測定血清睪丸酮,雌二醇含量,采用放射免疫試劑盒測定,操作依照試劑盒說明書,結果見表2。
3.1 對雄性小鼠性行為的影響 見表1。
表1 麗江瑪咖不同提取物對雄性小鼠性行為的影響(±s,n=10)

表1 麗江瑪咖不同提取物對雄性小鼠性行為的影響(±s,n=10)
注:與對照組比較,*P<0.05,**P<0.01
0對照組 13136.2±14.148.4±2.17 316.2±15.674.1±1.5萬艾可組 0.01395.0±12.15** 12.4±1.65** 252.5±20.57* 8.0±1.41*復方鎖陽口服液 12121.2±9.24* 11.3±1.84* 283.2±9.87* 7.4±1.18*石油醚提取物組 13132.8±14.948.9±1.73 322.2±13.834.8±13.98乙酸乙酯提取物組 13131.0±12.648.7±1.57 316.0±15.294.4±1.07正丁醇提取物組 13120.6±9.97* 10.5±1.72* 301.5±10.31* 6.5±1.27*水提取物組 13122.7±11.30*10.7±1.49* 296.7±13.44* 6.9±0.99*
試驗結果表明,麗江瑪咖石油醚、乙酸乙酯提取物對雄性小鼠捕捉潛伏期、捕捉次數、交配潛伏期、交配次數均無明顯影響,與對照組比較,經統計學處理,P>0.05,差異無顯著性意義;麗江瑪咖正丁醇提取物能縮短雄性小鼠捕捉潛伏期(P<0.05),增 加 捕 捉 次 數 (P<0.05),縮 短 交 配 潛 伏 期(P<0.05),能明顯增加20min內交配次數(P<0.01);水提取物能明顯縮短雄性小鼠捕捉潛伏期(P<0.05),增加捕捉次數(P<0.05),能明顯縮短交配潛伏期(P<0.05),明顯增加20min內交配次數(P<0.01);陽性對照藥萬艾可能明顯縮短雄性小鼠捕捉潛伏期、明顯增加捕捉次數、顯著縮短交配潛伏期、明顯增加20min內交配次數,經統計學處理,P<0.01,差異有非常顯著性意義,復方鎖陽口服液也能縮短雄性小鼠捕捉潛伏期(P<0.05),增加捕捉次數(P<0.05),縮短交配潛伏期(P<0.05)、明顯增加20min內交配次數(P<0.01)。
3.1 對雄性小鼠血清睪丸酮、雌二醇的影響 見表2。
表2 麗江瑪咖不同提取物對雄性小鼠血清睪丸酮、雌二醇的影響(±s,n=10)

表2 麗江瑪咖不同提取物對雄性小鼠血清睪丸酮、雌二醇的影響(±s,n=10)
注:與對照組比較,*P<0.05
組別 劑量(g/kg) 睪丸酮含量(ng/dl) 雌二醇含量(pg/ml)13 11.05±2.33 8.45±2.89復方鎖陽口服液 12 16.48±4.67* 7.65±2.17石油醚提取物組 13 11.09±1.78 8.63±2.98乙酸乙酯提取物組 13 11.28±2.15 7.82±2.0正丁醇提取物組 13 11.96±2.10 8.46±2.48水提取物組對照組13 12.06±2.12 7.90±1.89
試驗結果表明,麗江瑪咖四種提取物對雄性小鼠血清睪丸酮、雌二醇含量均無明顯影響,復方鎖陽口服液灌胃28d,可升高雄性小鼠血清睪丸酮含量(P<0.05),對雌二醇含量無明顯影響。
本次試驗結果表明,麗江瑪咖四種提取物中,正丁醇和水提取物能明顯提高雄性小鼠性行為,對捕捉潛伏期、捕捉次數、交配潛伏期、交配次數均有明顯影響,而石油醚、乙酸乙酯提取物對所有指標均無明顯影響,說明麗江瑪咖正丁醇和水提取物是其增強性行為的活性物質,為進一步研究麗江瑪咖的化學與藥效的相關性打基礎。但麗江瑪咖四種提取物對雄性小鼠血清睪丸酮、雌二醇含量均無明顯影響,說明其增強性行為的作用與性激素調節無關,作用機制有待進一步研究。
[1]肖偉 .秘魯特產藥用植物瑪卡研究的新進展[J].世界科學技術—中醫藥現代化,2007,9(3):102~103.
[2]金文聞 .藥食兩用植物瑪咖(Lepidium meyenii)的功效物質研究[C].華中科技大學博士論文:1~5.
[3]李培清 .會澤縣引進美國特種中藥材——瑪卡試驗成功[J].云南科技管理 .2006;(3):75.
[4]楊菊 .西地那非衍生物對雄性家兔和小鼠性行為的影響研究[J].中國藥房 .2007;18;(16).