高效液相色譜法測定復方景天膠囊中紅景天苷含量

閆雪生，李 巖

(山東省中醫藥研究院，山東 濟南 250014)

復方景天膠囊是我院研制的非標制劑，主要由紅景天、人參、菊花、五味子組方，具有滋補強壯、扶正固本功能。為控制膠囊質量，筆者以方中主藥紅景天的主要成分紅景天苷為指標，參考有關文獻[1－2]，用高效液相色譜(HPLC)法測定復方景天膠囊中紅景天苷含量，現報道如下。

1 儀器與試藥

高效液相色譜儀(美國Waters公司)，包括Waters 600 Controller，WatersTM600 Pump，Waters996 PhotodiodeArrayDetector;超純水(Millipore公司純水器);所用甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純;紅景天苷對照品(中國藥品生物制品檢定所，供含量測定用，批號為110818－200404);復方景天膠囊(自制)。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱:lichrospher C18柱江蘇漢邦科技有限公司(250 mm×4.6 mm，5 μm);用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;流動相:甲醇－水(12∶88);檢測波長:275 nm。理論板數按紅景天苷峰計算應不低于2 000。

2.2 溶液制備

取本品內容物0.2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，準確加入甲醇10 mL，稱定質量，超聲提取30 min，稱定質量，用甲醇補足減失的質量，搖勻，濾過，棄去初濾液，取續濾液用微孔濾膜濾過，作為供試品溶液。精密稱取紅景天苷對照品4.60 mg，置10 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，取5 mL稀釋至10 mL，配制成每1 mL含紅景天苷0.23 mg的溶液，作為對照品溶液。取缺紅景天的陰性樣品，參照供試品溶液的制備方法，制得缺紅景天的陰性對照品溶液。

2.3 方法學考察

陰性干擾試驗:分別精密吸取2.2項下3種溶液各10 μL，注入液相色譜儀。結果供試品溶液色譜中，在與對照品溶液色譜相應位置上有色譜峰，陰性對照品溶液色譜中則無此峰，表明在該測定條件下，陰性樣品不干擾紅景天苷的測定，見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

線性關系考察:精密吸取對照品溶液(0.46 g/L)，分別稀釋成含紅景天苷 0.092，0.184，0.276，0.368，0.460 g/L 的溶液，各吸取10 μL，注入高效液相色譜儀，測定峰面積積分值。以峰面積積分值為縱坐標、進樣量(μg)為橫坐標繪制標準曲線，得回歸方程 Y=260 488 X+14 428，r=0.999 9(n=5)。結果表明，紅景天苷進樣量在0.92～4.6μg范圍內與峰面積積分值線性關系良好。

精密度試驗:精密吸取同一對照品溶液10 μL，連續進樣5次，測定峰面積積分值。結果的 RSD為0.89%(n=5)，表明儀器精密度良好。

穩定性試驗:精密吸取同一供試品溶液，于 0，2，4，8，24 h時進樣，記錄每次進樣的峰面積。結果的 RSD為0.99%(n=5)，表明供試品溶液在24 h內穩定性良好。

重現性試驗:取同一批樣品5份，按擬訂的方法測定。結果每粒膠囊平均含紅景天苷 4.214 mg，RSD 為 0.99%(n=5)，表明方法重現性良好。

加樣回收試驗:取已知含量的同批樣品6份，每份約0.1g，精密稱定，分別加入紅景天苷對照品，按供試品溶液制備方法制備溶液并測定含量，計算回收率。結果見表1。

表1 紅景天苷加樣回收試驗結果(n=6)

2.4 樣品含量測定

分別精密吸取3批供試品溶液，各10 μL，注入液相色譜儀，測定各批樣品中紅景天苷的含量，結果見表2。根據所用紅景天原料中紅景天苷平均含量為0.953%，結合藥典規定紅景天苷含量應不低于0.50%計算，暫訂本品每粒含紅景天以紅景天苷(C14H20O7)計，不得少于 3.0 mg。

表2 樣品含量測定結果

3 討論

復方景天膠囊為中藥復方制劑，成分復雜，本試驗以紅景天苷作為含量測定指標。紅景天苷的光譜掃描顯示在223 nm波長處有最大吸收峰，在275 nm波長處有弱吸收峰，文獻[1－4]中這2個波長均作為紅景天苷的測定波長。本次試驗中發現，紅景天苷在223 nm波長處測定易受其他成分干擾;在275 nm波長處測定，紅景天苷色譜峰分離好，無干擾。試驗中還比較了多種比例的流動相，結果以甲醇－水(12∶88)為優，峰的分離效果好，基線平穩。采用高效液相色譜法測定復方景天膠囊中紅景天苷含量，簡便易行，結果重現性好，可用于復方景天膠囊的質量控制。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:化學工業出版社，2005:附錄33.

[2]宋興發，尚 強，高 山.紅景天養生片中紅景天苷的含量測定[J].醫藥導報，2009，28(12):1 629－1 630.

[3]WS－10926(ZD－0926)－2002，國家中成藥標準匯編·中成藥地方標準上升為國家標準部分(內科氣血津液分冊)[S].

[4]WS3－000(Z－080)－2002(Z)，國家藥品標準·新藥轉正標準(第36冊)[S].