毛細(xì)管氣相色譜法測(cè)定克痢痧膠囊中丁香酚含量

盧智玲，劉華棟

(1.浙江省杭州市藥品檢驗(yàn)所，浙江 杭州 310017; 2.杭州民生藥業(yè)有限公司，浙江 杭州 310011)

克痢痧膠囊現(xiàn)收載于2010年版《中國(guó)藥典(一部)》，由白芷、蒼術(shù)、丁香、蓽茇、石菖蒲、細(xì)辛、鵝不食草、豬牙皂等12味藥材組方，具有解毒辟邪、理氣止瀉的功效，用于止瀉和痧氣(中暑)。經(jīng)處方分析，丁香中的丁香酚為其藥效成分，具有鎮(zhèn)痛、抗菌、抗炎等藥理作用[1]。而2010年版《中國(guó)藥典(一部)》的標(biāo)準(zhǔn)雖較之前的國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)(WS3－B－3053－98－2008)有所提高，增加了丁香酚的氣相定性鑒別，但仍缺乏定量分析方法，不能有效控制該組分。因此，參考2010年版《中國(guó)藥典(一部)》丁香藥材及相關(guān)文獻(xiàn)[2]方法，建立用于測(cè)定丁香酚含量的氣相色譜法(外標(biāo)法)，以提高并完善標(biāo)準(zhǔn)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

Agilent 6890N型氣相色譜儀，氫火焰離子化檢測(cè)器(FID);XS105型電子天平(Mettler toledo);KQ－600DV型數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。丁香酚對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)為110725－200711，純度為99.3%);克痢痧膠囊(浙江南洋藥業(yè)有限公司，批號(hào)分別為20100111，20100509，20100802);缺丁香陰性對(duì)照樣品依照處方工藝自制;正己烷為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱:HP innowax石英毛細(xì)管柱(30 mm×0.32 mm，0.25 μm);柱溫:程序升溫，初始溫度為100℃，以10℃ /min速率升至200℃，保持5 min;進(jìn)樣口溫度:250℃;檢測(cè)器溫度:250℃;FID檢測(cè)器;載氣:氮?dú)?，氣體流量為1.2 mL/min;分流進(jìn)樣，分流比為5∶1;進(jìn)樣體積為1 μL。在此色譜條件下，丁香酚與相鄰色譜峰均能達(dá)到基線分離，見(jiàn)圖1。

圖1 氣相色譜圖

2.2 溶液制備

稱(chēng)取丁香酚對(duì)照品27.20 mg，精密稱(chēng)定，置100 mL量瓶中，加正己烷溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得對(duì)照品溶液。取本品內(nèi)容物，研細(xì)，混勻，取約0.5 g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入正己烷15 mL，稱(chēng)定質(zhì)量，超聲處理15 min，放冷，再稱(chēng)定質(zhì)量，用正己烷補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

陰性干擾試驗(yàn):按處方工藝制備陰性空白樣品，按供試品溶液制備方法制得陰性對(duì)照品溶液，依法進(jìn)樣。結(jié)果表明，陰性對(duì)照品溶液在與丁香酚相同保留時(shí)間處無(wú)干擾，表明方法專(zhuān)屬性良好。結(jié)果見(jiàn)圖1。

線性關(guān)系考察與最低檢出限確定:稱(chēng)取丁香酚對(duì)照品60.50mg，精密稱(chēng)定，置25 mL量瓶中，加正己烷溶解并稀釋至刻度。分別精密吸取 0.3，0.5，1，2，3，4，5 mL，置 10 mL 量瓶中，加正己烷稀釋至刻度，得系列質(zhì)量濃度的對(duì)照品溶液。依法進(jìn)樣測(cè)定，以峰面積(Y)與進(jìn)樣量(X)作線性回歸，回歸方程為 Y=2 246.408 X+3.347 7，r=0.999 9(n=7)。結(jié)果表明，丁香酚進(jìn)樣量在 0.072 6 ～1.21 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。將對(duì)照品溶液逐步進(jìn)行稀釋?zhuān)陨V峰高是基線噪聲高度的3倍作為標(biāo)準(zhǔn)，計(jì)算檢出限，結(jié)果丁香酚的最低檢出限為5 ng。

精密度試驗(yàn):精密吸取同一丁香酚對(duì)照品溶液1 μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積。結(jié)果峰面積的 RSD為0.79%(n=6)。

穩(wěn)定性試驗(yàn):精密吸取同一供試品(批號(hào)為20100802)溶液，分別于 0，1，2，4，6 h 時(shí)進(jìn)樣，測(cè)定峰面積。結(jié)果的 RSD 為 1.67%(n=5)，表明供試品溶液在配制后6 h內(nèi)穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗(yàn):取同一批樣品(批號(hào)為20100802)，按2.2項(xiàng)下依法制備供試品溶液6份并測(cè)定含量。結(jié)果丁香酚的平均含量為6.128 5 mg/g，RSD 為 1.44%(n=6)，表明該方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗(yàn):取已知含量的樣品(批號(hào)為20100802)約0.30 g，精密稱(chēng)定，精密加入質(zhì)量濃度為2.42 g/L的丁香酚對(duì)照品溶液 0.6，0.8，0.9 mL，按供試品溶液制備方法制備溶液，測(cè)定含量，并將樣品已知量、加入量及測(cè)得量均按進(jìn)樣體積1 μL換算成相應(yīng)的μg數(shù)，計(jì)算回收率。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 丁香酚加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2.4 樣品含量測(cè)定

依法對(duì)3批樣品中的丁香酚含量進(jìn)行了測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果

3 討論

曾分別試用醋酸乙酯、甲醇、正己烷作為提取溶劑，結(jié)果醋酸乙酯、甲醇提取液色譜峰形不佳，且基線不如正己烷平整，故最后確定用正己烷提取樣品。

在供試品溶液制備中，對(duì)超聲時(shí)間進(jìn)行了考察，將時(shí)間分別設(shè)定為10，15，20 min，并測(cè)定不同時(shí)間點(diǎn)提取出的丁香酚含量。結(jié)果表明，在15 min時(shí)即可提取完全，從時(shí)效性考慮，將超聲時(shí)間定為15 min。

本試驗(yàn)建立了簡(jiǎn)便可行、結(jié)果可靠的丁香酚氣相色譜測(cè)定方法，可以更好地控制制劑的質(zhì)量，確保用藥劑量準(zhǔn)確，保障人民用藥安全有效。

[1]肖培根.新編中藥志[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2002:676－680.

[2]楊鳳梅.GC法測(cè)定藏藥六味丁香丸中丁香酚的含量[J].青海醫(yī)藥雜志，2007，37(8):92－94.