紫外分光光度法測定蒙藥復方協日嘎－4中總酚酸含量＊

楊 婷，馬 強，董 玉

(內蒙古醫學院藥學院，內蒙古 呼和浩特 010110)

蒙藥協日嘎處方來源于《中華人民共和國衛生部藥品標準·蒙藥分冊》中協日嘎四味湯散，是由姜黃、黃柏、梔子、蒺藜4味藥組方，具有利尿、清瀉濕熱功能，主要用于小便閉止、尿頻、尿急、尿中帶血、膀胱刺痛，是蒙醫治療膀胱熱證的首選方劑[1]。協日嘎中含有姜黃，其主要生物活性成分為姜黃素類化合物和揮發油[2－3]。姜黃揮發油除具有廣譜抗菌消炎作用外，還有調血脂、抗凝、抗氧化、利膽、抗癌、抗艾滋病病毒等作用[4]。筆者建立了測定協日嘎中總酚酸含量的紫外分光光度法，以控制其內在質量，現報道如下。

1 儀器與試藥

TU－1901型紫外可見分光光度計(北京);Sartorius－BS224S型電子分析天平(北京賽多利斯儀器系統公司);KQ－250DE型數控超聲波清洗儀(昆山市超聲儀器有限公司)。蒙藥姜黃、黃柏、梔子、蒺藜飲片由內蒙古天力藥業有限責任公司提供，產地內蒙，經內蒙古醫學院藥學院龐秀生教授鑒定為蒙藥姜黃、黃柏、梔子、蒺藜;姜黃素對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號為110823－201004);其余試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 溶液制備

精密稱取姜黃素對照品適量，加無水甲醇制備成質量濃度為0.059 2 g/L的對照品溶液。取復方協日嘎－4粗粉約10 g，精密稱定，置圓底燒瓶中，加10倍量70%乙醇，加熱回流2 h，趁熱用棉花過濾，濃縮至小體積，置50 mL量瓶中，加50%乙醇稀釋至刻度，吸取5 mL，置25 mL量瓶中，并稀釋至刻度，再吸取2 mL，置25 mL量瓶中，以50%乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液。

2.2 測定波長選擇

分別吸取姜黃素對照品溶液和供試品溶液適量，分別置25 mL量瓶中，加無水乙醇至5 mL，加0.3%十二烷基硫酸鈉2.0 mL及0.6% 三氯化鐵 －0.9% 鐵氰化鉀(1 ∶0.9)混合溶液 1.0 mL，混勻，在暗處放置5 min，加0.1 mol/L鹽酸溶液至刻度，在暗處放置20 min，以相應試劑為空白，在400～800 nm波長范圍內進行掃描。結果供試品溶液和對照品溶液均在720 nm波長處有最大吸收，故確定720 nm為測定波長。吸收光譜見圖1。

圖1 紫外吸收光譜圖

2.3 方法學考察

線性關系考察:精密吸取姜黃素對照品溶液(質量濃度為23.68 μg/mL)0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0，3.5 mL，置 25 mL 量瓶中，加無水乙醇至5 mL，加0.3%十二烷基硫酸鈉2.0 mL及0.6% 三氯化鐵 －0.9% 鐵氰化鉀(1 ∶0.9)混合溶液 1.0 mL，混勻，在暗處放置5 min，加0.1 mol/L鹽酸溶液至刻度，在暗處放置20 min，以顯色劑為空白，在720 nm波長處測定吸光度。以姜黃素對照品取樣量為橫坐標、吸光度為縱坐標繪制標準曲線，得線性回歸方程 Y=8.177 5X+0.127 7，r=0.999 2(n=7)。結果表明，姜黃素進樣量在11.84～82.88 μg范圍內與吸光度呈良好線性關系。

精密度試驗:精密吸取對照品溶液1 mL，按擬訂的方法連續測定6次。結果吸光度的 RSD=0.22%(n=6)，表明該方法精密度良好。

穩定性試驗:精密量取同一供試品溶液1 mL，按擬訂的方法操作，分別于配制溶液后 0，15，30，45，60，75 min 時測定。結果吸光度的 RSD=2.68%(n=6)，表明供試品溶液在90 min內穩定。

重復性試驗:取樣品6份，每份約10 g，精密稱定，按2.1項下方法制備供試品溶液，按擬訂的方法測定吸光度，計算含量。結果的 RSD=1.92%(n=6)，表明該方法重復性良好。

加樣回收試驗:取已知含量的樣品粉末約5 g，精密稱定，6份，按2.1項下方法制備供試品溶液，精密吸取1 mL，精密加入經五氧化二磷減壓干燥至恒重的姜黃素對照品適量，照擬訂的方法，依法測定吸光度，從標準曲線上讀出供試品溶液中姜黃素的質量，計算回收率。結果見表1。

表1 加樣回收試驗結果(n=6)

2.4 樣品含量測定

取不同批次的樣品，按2.1項下方法制備供試品溶液，按擬訂的方法測定吸光度，計算含量。結果見表2。

表2 不同批次樣品含量測定結果(n=3)

3 討論

選取姜黃素為對照品，是因姜黃中含有姜黃素[5]，多有報道且含量較高，可作為含量測定指標性成分[6]。并且，姜黃素本身具有多種藥理活性[7]，可代表姜黃中的總酚酸。

復方協日嘎－4含有酚類成分，以姜黃素為對照，采用紫外分光光度法進行比色測定，在400～800 nm波長范圍進行光譜掃描。最終樣品和供試品在波長720 nm處均有最大吸收，且顯色劑與未顯色樣品在該波長下均無干擾，故選擇720 nm波長作為測定波長。

曾有人以亞硝酸鈉－硝酸鋁配位顯色法顯色[8]，但該方法專屬性較差;用紫外分光光度法測定，pH會對測定有顯著影響。本試驗采用三氯化鐵－鐵氰化鉀顯色法[9]。比較上述顯色方法，用三氯化鐵－鐵氰化鉀顯色后，對照品溶液、供試品溶液的λmax基本一致，而且重現性好，故采用三氯化鐵－鐵氰化鉀顯色－比色法對總酚酸進行測定。該反應顯色后需放置暗處，見光后操作。隨著時間的增加，450 nm波長處的吸收值增大，故450 nm處為干擾峰。

姜黃中含有酚酸類成分，并從中提取、分離、鑒定了姜黃素。姜黃主要生物活性成分為姜黃素類化合物和揮發油[3]。本試驗首次以姜黃素為對照品，對協日嘎－4中總酚酸進行了含量測定。該方法靈敏、簡便、快速、準確可靠，為合理、有效開發、利用復方協日嘎－4藥材奠定了基礎。

[1]劉建忠，姚 波，吳正啟，等.協日嘎四味湯膠囊治療急性下尿路感染 106例[J].陜西中醫，2007，28(5):527－528.

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[6]崔紅彬，孟建升，蔣俊春.HPLC法測定姜黃片中姜黃素的含量[J].中國藥師，2008，11(9):1 071 －1 072.

[7]韓 婷，宓鶴鳴.姜黃的化學成分及藥理活性研究進展[J].解放軍藥學學報，2001，17(2):95－97.

[8]陳煥娜，劉 洋，趙曉霞，等.分光光度法測定丹參總酚含量方法的研究[J].亞太傳統醫藥，2010，6(8):19－22.

[9]馬 強，董 玉，那生桑，等.冬葵果中總酚酸的含量測定[J].時珍國醫國藥，2010，21(10):2 583－2 584.