莫吉司坦中有關(guān)物質(zhì)檢測方法研究

黃 艷，胡廣林

(1.海南醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，海南 海口 571101; 2.海南大學(xué)材料與化工學(xué)院，海南 海口 570228)

莫吉司坦(moguisteine)于2004年在意大利獲準(zhǔn)上市，是Roche公司開發(fā)的呼吸系統(tǒng)用藥，用于治療由感染、刺激、炎癥、腫瘤引起的急慢性呼吸系統(tǒng)疾病所致的咳嗽，鎮(zhèn)咳作用顯著，且不具有成癮性[1]。目前，莫吉司坦的有關(guān)物質(zhì)測定方法國內(nèi)未見文獻(xiàn)報道。筆者建立了高效液相色譜法，用于檢測莫吉司坦的有關(guān)物質(zhì)，方法簡便、準(zhǔn)確、靈敏，現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

LC－6AD型高效液相色譜泵(日本島津)，SPD－10Avp型紫外檢測器(日本島津)，2000型色譜工作站(浙大智能信息工程研究所);JASCOV－650型紫外－可見分光光度計(日本);Sartotius NE215S型電子天平(賽多利斯科學(xué)儀器有限公司)。甲醇為色譜純，水為高純水;莫吉司坦(批號為 20100801，20100802，20100803，自制);莫吉司坦對照品(自制，經(jīng)檢測純度為99.80%)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗

色譜柱:Luna C18柱(150 mm ×4.6 mm，5 μm);流動相:甲醇 － 水(58 ∶42);檢測波長:230 nm;流速:1.0 mL/min。精密量取供試品溶液與對照品溶液各20μL注入液相色譜儀，結(jié)果見圖1。理論板數(shù)按莫吉司坦主峰計算為2 343，莫吉司坦與相鄰雜質(zhì)峰的分離度為2.0。

2.2 溶液配制

取莫吉司坦對照品約25 mg，精密稱定，置25 mL量瓶中，加流動相約15 mL，超聲使溶解，放冷，用流動相稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。取本品約25 mg，精密稱定，置25 mL量瓶中，加流動相約15 mL，超聲使溶解，放冷，用流動相稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。精密量取供試品溶液2 mL，置100 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，作為自身對照溶液。

圖1 高效液相色譜圖

2.3 方法學(xué)考察

檢測限確定:取上述對照品溶液，逐級稀釋，分別取20 μL注入液相色譜儀，經(jīng)分析，莫吉司坦的檢測限為2.0 ng。

專屬性試驗:取莫吉司坦約25 mg，共6份，精密稱定，分別置25 mL量瓶中，加流動相約15 mL，超聲使溶解，按下列條件試驗。放冷，用流動相稀釋至刻度，搖勻(未破壞);放冷，加1 mol/L氫氧化鈉溶液5 mL，室溫下放置2 h，用1 mol/L鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH至中性，用流動相稀釋至刻度，搖勻(強(qiáng)堿破壞);放冷，加1 mol/L鹽酸溶液5 mL，室溫下放置2 h，用1 mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至中性，用流動相稀釋至刻度，搖勻(強(qiáng)酸破壞);于沸水浴中放置1 h，取出，放冷，用流動相稀釋至刻度，搖勻(高溫破壞);在日光下放置2 h，放冷，用流動相稀釋至刻度，搖勻(光破壞);放冷，加30%過氧化氫溶液3 mL，室溫下放置2 h，用流動相稀釋至刻度，搖勻(氧化破壞)。分別精密量取上述6種溶液各20 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，結(jié)果見圖2。

圖2 專屬性試驗色譜圖

精密度試驗:精密吸取自身對照溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次測定。結(jié)果峰面積的 RSD為1.62%(n=6)，表明本法的精密度良好。

重復(fù)性試驗:取批號為20100802的樣品6份，依法制備供試品溶液。精密量取供試品溶液和自身對照溶液各20 μL，注入液相色譜儀測定有關(guān)物質(zhì)。結(jié)果最大雜質(zhì)含量的 RSD為1.40%，總雜質(zhì)的 RSD為1.98%，表明方法的重復(fù)性較好。

穩(wěn)定性試驗:取同一供試品(批號為20100802)溶液，分別在放置 0，2，4，6，8 h 后測定。結(jié)果主峰峰面積的 RSD 為 0.92%，總雜質(zhì)峰面積的 RSD為1.54%，表明供試品溶液8 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.4 樣品有關(guān)物質(zhì)檢測

取3個批次的供試品，照2.2項下方法制備溶液并照2.1項下色譜條件檢測有關(guān)物質(zhì)。結(jié)果見表1。

表1 樣品有關(guān)物質(zhì)測定結(jié)果

3 討論

用流動相溶解制成每1 mL中含莫吉司坦約20 μg的對照品溶液，照分光光度法[2]，于200～400 nm波長范圍內(nèi)掃描，結(jié)果莫吉司坦在275 nm波長處有最大吸收峰，但吸收較弱;約在228 nm波長處還有一肩峰，故參考文獻(xiàn)[3]選擇230 nm的波長作為本品有關(guān)物質(zhì)的檢測波長。

在進(jìn)行色譜條件優(yōu)化試驗中，發(fā)現(xiàn)甲醇－水(60∶40)為流動相時，主峰保留時間較適中且分離效果較好，但主峰稍有拖尾;曾考慮加入0.1%三乙胺改善主峰峰形，結(jié)果主成分嚴(yán)重被破壞，產(chǎn)生大量的有關(guān)物質(zhì);最終以甲醇－水(58∶42)為流動相時，主峰峰形得以改善。

專屬性試驗結(jié)果表明，在中性條件下高溫或光照時莫吉司坦的有關(guān)物質(zhì)稍有增加;在強(qiáng)堿、強(qiáng)酸或氧化劑存在的條件下莫吉司坦發(fā)生明顯的降解，產(chǎn)生大量的有關(guān)物質(zhì);所產(chǎn)生的降解產(chǎn)物的峰與主峰均能達(dá)到完全分離，分離度符合規(guī)定。欲知其降解產(chǎn)物具體是什么物質(zhì)，還有待進(jìn)一步研究。

專屬性試驗結(jié)果還表明，本品的主要雜質(zhì)峰均在主峰2倍保留時間內(nèi)出峰，且在進(jìn)行破壞性試驗考察時，各破壞條件下的色譜圖中主峰2倍保留時間后均無雜質(zhì)峰出現(xiàn)，因此確定本品有關(guān)物質(zhì)檢查的保留時間為主峰保留時間的2倍。

本法專屬性強(qiáng)、靈敏度高、重復(fù)性好，可用于莫吉司坦有關(guān)物質(zhì)的檢測。

[1]Angelis L.Moguisteine[J].Drugs of the Future，1991，16(7):618 － 619.

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(二部)[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:附錄23.

[3]D.Castoldi，A.Oggioni，M.I.Renoldi，et al.Assay of moguisteine metabolites in human plasma and urine conventional an chiral high－performance liquid chromatographic methods[J].Journal chromatoGraphy B，1994，655:243－252.