桉葉油對小鼠肺炎的恢復治療作用

秦海燕，葉 平，白鳳相，索志榮

（1.西南科技大學生命科學與工程學院，四川 綿陽 621010；2.西南科技大學分析測試中心，四川 綿陽 621010）

桉葉油是桉樹葉油腺細胞分泌的一種植物精油，藥理試驗表明，桉葉油具有抗菌消炎作用［1］，被廣泛用于治療肺結核，糖尿病，哮喘，也用作消毒劑，抗氧化劑和抗菌劑，尤其在上呼吸道感染疾病的治療上表現頗佳［2］。關于桉葉油的抑菌活性已有較多研究［3－4］，但以桉葉油為抗菌活性物質制作成固體栓劑用于動物肺炎的恢復治療未見文獻報道。當前，養殖場由于養殖動物密度大，空氣流通不暢，上呼吸道感染成為養殖場中極為常見的疾病，其中尤以豬細菌性肺炎居多［5］，養殖戶用藥種類增多，劑量加大，但用藥效果卻越來越不理想，導致抗生素濫用日益嚴峻，間接地危害人類健康。本試驗建立了小鼠肺炎模型，將桉葉油制成固體栓劑，利用栓劑中桉葉油自然揮發的特性，通過動物試驗研究桉葉油對肺炎小鼠的治療作用。該試驗為解決現代化養殖場中動物上呼吸道感染的預防與治療以及緩解抗生素濫用的問題提供了簡單、便捷、無副作用的給藥途徑。

1 儀器與材料

超凈工作臺、恒溫生化培養箱、高壓蒸汽滅菌鍋、接種針、1mL注射器、瓊脂、吐溫－80、山梨酸鉀、瓊脂營養粉、75%酒精、乙醚等。桉葉油（醫藥級），購自鄭州藍宇化工有限公司。保護傘（治療豬肺炎，編號：31915143217），購自成都福臨生物技術公司。實驗動物：18～22g雌雄小鼠，Ⅱ級，購自成都市實驗動物配送中心。

2 方法

2.1 制備桉葉油固體栓劑 取瓊脂4g溶于97 mL蒸餾水，加熱至沸騰，維持10min，待混合物冷卻至60℃，迅速加入山梨酸鉀1g，10mL桉葉油及6mL吐溫－80，并沿一個方向不斷攪拌使其完全乳化，接著沿玻璃棒傾倒至栓劑模型盒內，待其完全冷卻即得桉葉油固體栓劑。

2.2 肺炎病原菌的接種及分離培養 在綿陽某豬場，選取有嚴重肺炎癥狀的病豬，宰殺后取其肺部，自來水沖洗至表面無血水，75%酒精表面消毒備用，于超凈工作臺內無菌操作挑取肺部的膿點接種于培養基，在生化培養箱中37℃恒溫培養2d。再挑取單個菌落轉接于新的培養基，直至獲得純培養。

2.3 小鼠肺炎模型的建立

2.3.1 肺炎菌懸液的制備 刮取純培養培養皿內一定數目的特征菌落，置于10mL生理鹽水中，搖勻，制作成3種不同濃度的菌懸液，經試驗2個／mL菌落為建立小鼠肺炎模型的適合病菌濃度。

2.3.2 穿刺肺葉建立小鼠肺炎模型 取小鼠1只，用乙醚麻醉使其輕度昏迷，仰臥固定；用1mL注射器取b菌液0.05mL，用手觸摸小鼠腹部，在小鼠左下腹部找到最后肋骨，從下至上，摸至左側第3～4根肋骨之間；進針穿過胸腔，刺入肺小心推注。注射完成后，將小鼠置于籠內觀察4h，無明顯異狀，則建模成功。

2.4 桉葉油固體栓劑藥效試驗 為排除試驗過程中偶然誤差的影響，本試驗共做3批，第1批：取22只小鼠，用2.3.2方法使小鼠感染肺炎病菌。將已成功建立肺炎模型的小鼠隨機分成3組，桉葉油組8只，在圈養小鼠籠上放置桉葉油固體栓劑，空白對照組6只，籠上不放置任何東西；保護傘藥物對照組8只，在圈養小鼠籠上放置金鐘罩固體栓劑，飼養籠分別放于不同的房間。小鼠以專用飼料喂養，自由采食飲水，室溫適宜。第2批、第3批小鼠分組及藥效試驗同第一批。給藥方式均為空氣給藥。

3 結果與討論

桉葉油固體栓劑藥效試驗結果與分析 給藥后，觀察小鼠生理、活動情況并記錄，每日2次。小鼠在感染肺炎病菌后的第1、2天均表現精神沉郁，活動量明顯下降，食欲不振等，從第3天開始桉葉油組和金鐘罩組有部分小鼠出現好轉，并在7d之后生理、活動情況正常，但空白對照組死亡情況較為嚴重。桉葉油組、金鐘罩組和空白對照組的小鼠死亡情況見表1。

由表1可知：同一組別不同批次的數據波動平穩，表明本試驗重復性較好，且桉葉油組和保護傘組每一批次的小鼠死亡率均低于空白對照組，桉葉油組平均死亡率為58%，空白對照組平均死亡率為89%，桉葉油組與空白對照組差異顯著。試驗結果證實桉葉油固體栓劑能夠自然揮發。與空白對照組相比，桉葉油使肺炎小鼠存活率提高31%。

表1 小鼠死亡情況及死亡率

剖檢觀察健康小鼠其肺組織顏色淡白、彈性良好；空白對照組死亡小鼠肺組織為淡紅色至深紅色，可見肺組織出血點并伴有腫脹、彈性差；以桉葉油固體栓劑治療且2周后未死亡的小鼠肺部呈灰白色、彈性良好，其他無明顯病變特征。試驗結果證實，桉葉油固體栓劑對肺炎小鼠具有恢復治療作用。

4 結論

本試驗開發了一種新劑型－固體栓劑，并成功將桉葉油加入到固體栓劑中，使桉葉油能夠持續、均勻向空氣中散發，發揮其抑菌殺菌活性，在成功建立小鼠肺炎模型的基礎上，桉葉油以小鼠自然呼吸的方式用于肺炎小鼠的恢復性治療，小鼠平均存活率提高了31%，顯示桉葉油對肺炎小鼠具有恢復治療作用。將桉葉油制成固體栓劑用于養豬場不僅使用方便，且能勻速持久地向空氣中釋放出幽雅的清香氣味，對大、小型養豬場在預防及治療豬呼吸道疾病方面具有良好的應用前景。

［1］ 田玉紅，張祥民，黃泰松，等.桉葉油的研究進展［J］.食品與發酵工業，2007，33（10）：139－143.

［2］ Aihua Song，Ying Wang，Yanmei Liu.Study on the chemical constituents of the essential oil of the leaves of Eucalyptus globulus Labill from China［J］.Asian Journal of Traditional Medicines，2009，4（4）：134－140.

［3］ 楊致年，曾超，朱宗良，等.植物精油的抗菌性［J］.四川林業科技，2000，21（3）：37－39.

［4］ 黃瑤，田玉紅，劉雄民，等.尾葉桉葉精油的成分分析及抑菌效果初探［J］.北方園藝，2010（6）：26－28.

［5］ 白淑民.豬傳染性胸膜肺炎病的防治研究進展［J］.甘肅畜牧獸醫，1999，5：30－33.