豬藍眼病研究進展

劉 建， 湯德元*，李春燕，羅險峰，甘振磊，王 鳳，郝 飛

(1.貴州大學動物科學學院，貴陽 550025；2.貴州省動物疫病預防控制中心，貴陽 550008)

豬藍眼病(blue eye disease，BED)是由藍眼病副黏病毒（blue eye paramyxovirus，BEP），又稱為豬副黏病毒（Porcine paramyxovirus）感染所引起的以豬中樞神經系統(tǒng)紊亂，生殖障礙和角膜渾濁、發(fā)藍等為主要特征的疫病。該病主要在墨西哥發(fā)生，2001年美國也報道發(fā)生本病，目前歐洲和亞洲等尚無有關本病的報道[1]。

1 病原

本病病原為藍眼病副黏病毒（blue eye paramyxovirus，BEP），又稱為豬副黏病毒（Porcine paramyxovirus），同時由于該病首次發(fā)生在墨西哥中部La-Pieda-Michoacan地區(qū)及其周圍，因此，根據(jù)其首次分離地命名，該病原又被稱為拉帕丹密考克病毒(La-Pieda-Michoacan virus，LPMV)。從形態(tài)學和理化特性來看，該病毒屬于副黏病毒科(Paramyxoviridae)的腮腺炎病毒屬(Rubulavirus)，BEP的形態(tài)特征與其他副黏病毒相似。電鏡下可見病毒粒子呈現(xiàn)多形性，但以圓球形為主，未見絲狀體，大小不一，直徑在70～120 nm。外部包有脂質囊膜，囊膜上有纖突（或稱囊膜突起）長6～8 nm，核衣殼直徑20 nm，長1 000～1 630 nm或更長，呈螺旋對稱，位于病毒粒子中央。BEP的基因組是單股負鏈RNA，長約16～20 kb，分子質量為5×106～7×106[2]。用甲硫丁氨酸35S或葡萄糖胺3H標記BEP感染的IBRS細胞，編碼的病毒蛋白質經SDS-PAGE電泳，發(fā)現(xiàn)至少有6種病毒結構蛋白，分子質量分別為200 ku、68 ku、66 ku、59 ku、52 ku和40 ku。后來研究逐步證實，200 Ku大小的結構蛋白為具有RNA聚合酶活性的L蛋白、68 ku大小的的結構蛋白為核衣殼NP蛋白、66 ku大小的結構蛋白為具有血凝素和神經氨酸酶活性的HN蛋白、59 ku大小的結構蛋白為融合蛋白F、52 ku大小的結構蛋白為磷酸化蛋白P、40 ku大小的結構蛋白為基質蛋白M。其中5種能產生明顯的免疫沉淀，L蛋白和HN蛋白形成病毒粒子表面2種較大的纖突，融合蛋白F則形成較小的纖突，而病毒的毒力主要取決于HN蛋白。通過對M蛋白和HN蛋白的研究證明BEP與腮腺炎病毒（Mumps Virus，MuV），猿猴病毒5(Simian virus，SV5)和副流感病毒Parainfluenza virus type 2 (PIV-2) 和type 4 (PIV-4)具有很高的同源性，氨基酸同源性在40%左右[3-4]。

BEP能在Vero細胞、PK15細胞、BHK21細胞、牛和雞胚原代細胞等多種哺乳動物細胞內復制增殖，產生細胞病變（CPE），融合或形成胞漿內包涵體。BEP能被氯仿、福爾馬林、乙醚、β-丙內酯滅活，經福爾馬林滅活后，病毒失去血凝活性。該病毒對溫度敏感，在56 ℃4 h可被滅活，易被洗滌劑滅活[5]。BEP能凝集哺乳動物和禽類的紅細胞，其中血凝價最高的為雞、豚鼠和火雞紅細胞。病毒在扁桃體、嗅球和中腦中含量最高，尤其在30日齡以上病豬的嗅球和中腦組織內的病毒效價極高。

2 流行病學

2.1 傳染源

病豬和亞臨床感染豬是主要的傳染源。此外，被污染的運輸工具和圈舍也是一個傳染來源。

2.2 傳播途徑

BEP主要經接觸傳播，噴嚏、咳嗽和呼吸道散毒是主要的傳播方式，帶有病毒的飛沫和灰塵也可傳播該病，部分病毒也可通過尿液排出體外，病豬的不合理運輸可導致疫情擴散。此外，鳥類、人和用具也是本病的傳播途徑之一。

2.3 易感動物

豬是目前已知唯一自然感染BEP后出現(xiàn)臨床癥狀的動物，仔豬最易感，發(fā)病率為20%～50%。一旦發(fā)病，其死亡率迅速升高，可達90%，在短期內下降。實驗室通過自然途徑接種3～17日齡仔豬，則會引起嚴重的神經癥狀最終導致死亡，3日齡仔豬接種后6～8 d即死亡或瀕于死亡，17日齡仔豬接種后有30%感染發(fā)病。犬、貓和野豬感染后無癥狀，但有抗體產生。

2.4 流行特點

該病一年四季皆有發(fā)生，但尤以4-7月份為甚。自然感染豬產生的BEP抗體常可持續(xù)終生。但是，該病可在易感的后代和新引進的易感豬群中重新暴發(fā)。該病主要出現(xiàn)在墨西哥，2001年美國也報道發(fā)生本病，其他國家目前尚無相關報道。在連續(xù)生產的豬場中，BED呈周期性流行。

3 病毒入侵細胞機制與發(fā)病機理

副黏病毒囊膜中與融合功能有關的糖蛋白有2種，即具有血凝素和神經氨酸酶活性的HN蛋白和融合糖蛋白(F)，其中HN蛋白可以與細胞的含唾液酸的受體結合，具有很高的親和性，直接介導病毒與細胞的附著；融合糖蛋白(F)則介導病毒囊膜與宿主細胞表面脂蛋白膜的融合。雖然目前有2種HN嚴格依賴性副黏病毒的HN蛋白激活F蛋白，并引發(fā)膜融合以入侵宿主細胞的假說，一種認為HN蛋白與F蛋白的相互作用只是發(fā)生在HN蛋白與受體細胞結合之后，并引發(fā)F蛋白的構象變化，從而介導病毒囊膜與宿主細胞表面脂蛋白膜的融合[6-7]；第二種則認為HN蛋白與受體細胞結合之前就以多聚體構象存在，當 HN蛋白與受體結合后多聚體被破壞，使融合肽插入到宿主細胞膜內，并導致F蛋白脫離下來，最終HRl和 HR2形成的六聚體結構誘導膜融合發(fā)生，近年來的研究結果更傾向于認為第二種假說的成立。F蛋白是副黏病毒粒子的2種包膜突起之一，它參與了病毒包膜和細胞膜的融合，F(xiàn)蛋白的合成先以無活性的F0前體存在，所有副黏病毒的膜融合活性和血溶活性均是由F0糖蛋白引起的。在膜融合過程中，F(xiàn)0糖蛋白發(fā)揮融合作用時發(fā)生一系列的構象變化，必須經過—種類似于胰酶的蛋白酶裂解成由二硫鍵連接的亞基F1和F2，才能誘導膜融合。F0裂解產生的F1共有—個新的N端。這—區(qū)域的氨基酸序列呈高度疏水性，且在副黏病毒科各屬之間十分保守。F1片段的七肽重復區(qū)域(heptad repeat)HRl和HR2形成穩(wěn)定的六螺旋束結構引發(fā)膜融合，這在禽副黏病毒-1(新城疫病毒)(APMV-1，NDV)、猿副流感病5(SV5)、呼吸道合胞體病毒(RSV)、麻疹病毒(MV)，以及腮腺炎病毒(MuV)已經得到證明。而且已證明體外合成的HRl或HR2可通過特異性競爭結合其配體以抑制發(fā)夾三聚體構象的形成，繼而阻遏病毒膜融合過程。

F0蛋白的作用在于能使病毒粒子接觸處的細胞膜脂質雙分子層不穩(wěn)定而與病毒包膜融合，一旦膜融合開始，F(xiàn)0隨即在細胞膜上水平擴散．促進病毒包膜與細胞膜進行磷脂分子的交換，最終導致病毒包膜與細胞膜完全融合。對副黏病毒的最新研究還表明，病毒入侵宿主是個很復雜的過程，除HRl和HR2區(qū)域外，F(xiàn)蛋白的HR-C區(qū)、七肽重復區(qū)域HR3、HN蛋白的球形頭部區(qū)域與莖部結構都與膜融合有關，但這些功能區(qū)調節(jié)膜融合的作用機理尚待研究。

病毒經口、鼻侵入機體后，首先在上呼吸道上皮細胞內增殖，進入中樞神經前繼續(xù)在扁桃體和肺組織中復制，引起局部炎癥和免疫反應，如淋巴細胞浸潤、血管通透性增加及IgA分泌等。然后，增殖后的病毒進入血循環(huán)，發(fā)生病毒血癥，擴散入不同器官，如中樞神經系統(tǒng)等。病毒侵犯中樞神經系統(tǒng)(CNS)可能是通過脈絡膜擴散，病毒一旦進入神經元細胞，便可沿神經傳導路徑而廣泛分布。散布至第一次未曾侵入的其他器官，引起炎癥。試驗已經證實，中樞神經系統(tǒng)是病毒持續(xù)性感染的作用位點，病毒的這種持續(xù)性感染能夠逃逸宿主特異性免疫的攻擊。

4 臨床癥狀

豬藍眼病的癥狀因感染豬的年齡不同差異較大。2～15日齡仔豬最易感，癥狀出現(xiàn)快，發(fā)病初期發(fā)熱、厭食、被毛粗亂弓背、有時伴有便秘或腹瀉，進而表現(xiàn)共濟失調、虛脫、強直（多在后肢）肌肉震顫、姿勢異常呈犬坐樣等神經癥狀。仔豬突然由平臥位逐漸轉為側臥，有的出現(xiàn)神經癥狀，驅趕時一些患豬異常興奮、尖叫或劃水樣運動。其他癥狀有嗜睡、病豬不愿活動、瞳孔擴大、失明間有眼球震顫。有些仔豬有結膜炎，表現(xiàn)為眼瞼腫脹和流淚，有1%～5%的病豬呈單側或雙側角膜混濁，一般會自然康復。少數(shù)病豬在出現(xiàn)癥狀后48 h死亡，一般經4～6 d死亡。在BED暴發(fā)階段約有20%～60%仔豬被感染，病死率極高，可達到87%～90%。30日齡以上仔豬癥狀輕、病程短、呈一過性，表現(xiàn)厭食、發(fā)熱、噴 和咳嗽、神經癥狀少見，不伴有其他癥狀，感染率僅為1%～4%，很少死亡。30日齡內的感染仔豬常死于腦炎,死亡率很高。母豬大多沒有臨床癥狀，個別母豬在產前1～2 d食欲有所下降，部分母豬角膜混濁。妊娠母豬會出現(xiàn)持續(xù)性繁殖障礙，發(fā)病期間孕豬的返情率增加、產仔數(shù)下降、斷奶至發(fā)情間隔延長。此外，死胎和木乃伊胎增多，造成產仔數(shù)和產活仔數(shù)下降，妊娠母豬一般不發(fā)生流產，但在急性發(fā)病期，可見個別母豬流產。后備母豬和其他成年豬偶爾有角膜混濁。公豬感染后除少數(shù)有厭食和角膜渾濁外，一般不表現(xiàn)出臨床癥狀。大約有29%～73%的公豬會發(fā)生急性睪丸炎和附睪炎,精子活力下降,還有部分公豬睪丸和附睪明顯水腫，后期發(fā)展成萎縮，多為單側或變軟松弛，但嚴重者性欲喪失。另有報道，公豬感染BEP后,急性睪丸炎的發(fā)病率為28%，單側睪丸萎縮占66%,附睪炎發(fā)生率為78%，部分病豬精子活力則降為0。

5 病理變化

病豬無特征性肉眼病變。仔豬在肺前葉有輕微的肺炎病灶，大腦充血，腦脊髓液增多。眼球結膜水腫和不同程度的角膜混濁，以角膜水腫和前眼色素層炎為主要特征，角膜有囊泡和潰瘍，在虹膜、角膜內皮、鞏膜和角膜中有中性粒細胞、巨噬細胞和單核細胞浸潤。仔豬有中度胃、膀胱擴張，腹腔積有少量混有纖維素樣的液體，偶爾出現(xiàn)心包和腎出血，組織學變化在腦和脊髓較為多見，丘腦、中腦和大腦皮層表現(xiàn)為非化膿性腦脊髓炎，呈多病灶和彌漫性神經膠質增生，出現(xiàn)淋巴細胞、漿細胞和網狀組織細胞的血管套現(xiàn)象。肺呈散在性間質性肺炎，肺中膈由于單核細胞浸潤而增厚。公豬睪丸和附睪腫大、水腫，初期為睪丸炎和附睪炎，后發(fā)展成睪丸萎縮，睪丸生殖上皮出現(xiàn)變性和壞死，有時附睪有肉芽腫。神經細胞中不出現(xiàn)包涵體，這與豬的偽狂犬病有所不同。病理損傷程度和范圍因個體而異。

6 診斷方法

根據(jù)BED的典型臨診癥狀，如腦炎、角膜混濁、母豬繁殖障礙、前眼色素層炎、公豬睪丸炎和附睪炎等可對本病做出初步診斷。此外，非化膿性腦炎、角膜炎、睪丸炎和附睪炎等組織病理學變化可進一步提供診斷依據(jù)。本病的確診則依賴于血清學方法和病毒的分離鑒定。目前已建立的用于檢測BED的血清學方法主要是血凝抑制試驗（HI試驗）、病毒中和試驗、微量中和試驗、酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA試驗）等，這些診斷方法可用于檢查抗體陽性豬，診斷時最好采集相隔15 d的雙份血清用于本病的診斷。對本病做鑒別診斷時，須與其他疾病所引起的腦炎和繁殖障礙嚴格區(qū)分，尤其與豬繁殖與呼吸綜合征和偽狂犬病區(qū)別診斷。這些傳染病中，只有豬藍眼病副黏病毒引起角膜混濁（可占感染豬的30%）和公豬睪丸炎及附睪炎。

7 預防和治療

在建立和更新種豬群時，種豬必須來自健康豬群。引種須經血清學檢測，檢測結果為陰性的方可混群。嚴格控制外來人員和車輛進場，防止野鳥和鼠類入侵，采取全進全出的飼養(yǎng)方法。良好的管理，保持清潔衛(wèi)生，提供適宜的豬舍條件和營養(yǎng)水平，可有效地減少該病的發(fā)生。豬藍眼病目前尚無特效的治療方法。豬僅有角膜混濁者可自然康復，出現(xiàn)神經癥狀的一般以死亡告終。臨床感染豬(有神經癥狀和不育公豬)要及時隔離，并合理地飼喂抗菌藥以防繼發(fā)感染，病死豬應進行無害化處理。目前，已有實驗室用細胞培養(yǎng)和雞胚增殖藍眼病副黏病毒制成油乳劑疫苗或氫氧化鋁佐劑疫苗，可用于本病的控制，但尚未商品化。

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