冠心康膠囊藥學研究思路初探

施明毅，李建利,2

冠心病是指冠狀動脈粥樣硬化使血管腔狹窄或阻塞，或（和）因冠狀動脈功能性改變導致心肌缺血缺氧或壞死而引起的心臟病[1]，是心血管系統常見病、多發病，嚴重威脅中老年的健康和生命。冠心康膠囊是四川中醫藥科學院中醫研究所針對冠心病腎虛血瘀證研制的新藥，由丹參、淫羊藿、黃芪、赤芍、太子參、五味子、麥冬、川芎、當歸、桂枝、紅花等十一味中藥組成，具補心強腎、活血化瘀、通竅止痛之功效，主要用于胸悶氣短、冠心病心絞痛、心肌缺血的治療。本文結合相關文獻及預試驗，通過對處方研究及劑型選擇、制備工藝研究、中試研究、質量標準研究和初步穩定性研究等方面的理論進行初步探討，旨在為具體實驗研究提供思路。

1 處方研究與劑型的選擇

1.1 處方來源、組成及功能主治

本處方為四川中醫藥科學院中醫醫院的名老中醫經驗方，由丹參、淫羊藿、黃芪、赤芍、太子參、五味子、麥冬、川芎、當歸、桂枝、紅花等組成，具強心補腎、活血化瘀、通竅止痛之功效，主要用于胸悶氣短、冠心病心絞痛、心肌缺血的治療。

1.2 劑型的選擇

本品處方原以湯劑和片劑形式應用于臨床多年，具有良好的強心補腎，活血化瘀，通竅止痛作用。但湯劑口服劑量大，不宜貯存、攜帶不便，不適應現代生活的需要；片劑在制備、儲存、服用等方面亦存在諸多不便。本課題組成員曾將本方制成膠囊劑、顆粒劑與片劑進行了比較，結果表明：膠囊劑與顆粒劑療效相近，片劑次之；片劑制作穩定性較差，顆粒劑口感差攜帶服用不及膠囊劑方便；膠囊劑美觀、穩定性好，利于生產、運輸、貯藏和服用，更易為患者接受。膠囊劑不僅整潔、美觀、容易吞服，而且還具有可掩蓋藥物的不良氣味、提高藥物的穩定性、藥物生物利用度高、彌補其他制劑的不足等特點[2]。綜合考慮處方功能主治及臨床用藥需要、方中藥物主要有效成分性質，以及生產成本等因素，新制劑的劑型選定為膠囊劑。

2 制備工藝研究

2.1 工藝路線的確定

本課題研究的新制劑為中藥復方制劑，擬制成硬膠囊劑，注冊申請6類新藥。本復方由11味中藥組成，其中丹參為君藥，其水溶性和脂溶性成分均含有效成分，故擬采用醇水雙提法，先乙醇提取醇溶性成分，藥渣干燥后并入水提藥中共同水提；川芎、當歸和桂枝均含有較多的揮發油，與其活血化瘀、補血通經的功能關系密切，其他有效成分基本可溶于水，故可采用水蒸氣蒸餾法提取揮發油，提取后的水液并入水提液中處理，藥渣干燥后并入水提藥中共同水提；淫羊藿、黃芪、麥冬、紅花有效成分基本都能溶于水，擬采用水提取法；赤芍、太子參、五味子有效成分基本都能溶于醇且水溶性效果較差，擬采用乙醇提取法。

通過查閱相關文獻[3~6]及初步預實驗，綜合考慮處方特點、藥材性質、制劑類型、臨床用藥要求、大生產的可行性和生產成本，以及工藝的先進性要求等多方面因素，初步擬定工藝路線如下：

水蒸氣蒸餾法混合提取川芎、當歸和桂枝，得川芎、當歸和桂枝揮發油、水提液1和藥渣1；揮發油采用β-環糊精包合技術包合得包合物，備用。乙醇提取丹參，得醇提液1和藥渣2；乙醇回流混和提取太子參、赤芍和五味子，得醇提液2和藥渣（棄去）；合并醇提液1和醇提液2，減壓回收乙醇得濃縮液1，備用。水煎煮提取淫羊藿、黃芪、麥冬、紅花、藥渣1和藥渣2，得水提液2和藥渣（棄去）；合并水提液1和水提液2，濃縮至一定程度，得濃縮液2，純化，濾過得濾液。合并濃縮液1和濾液，濃縮至一定程度，得清膏，干燥得浸膏粉。將浸膏粉和包合物裝入空心膠囊，得成品。

2.2 藥材的鑒定與前處理

按《中國藥典》2010年版一部和《四川省中藥飲片炮制規范》2002年版相關項下要求進行藥材鑒定和炮制。

2.3 提取工藝研究

2.3.1 川芎、當歸和桂枝揮發油提取工藝研究[4~7]采用水蒸氣蒸餾法提取川芎、當歸、桂枝揮發油，以揮發油的收率作為評價指標，選擇加水量、浸泡時間及提取時間等為主要影響因素，應用星點設計-效應面法優選最佳提取工藝條件。試驗研究發現，揮發油最佳提取工藝條件為加9 倍量的水，浸泡80 min，蒸餾提取7.5 h。

2.3.2 β-環糊精包合揮發油技術研究[5,8,9]采用包合水溶液超聲法制備包合物，以揮發油包合率、包合物收得率及包合物含油率（權重系數分別為0.6、0.2和0.2）為綜合評價指標，選擇揮發油與β-環糊精的用量比、包合溫度、超聲時間為考察因素，應用星點設計-效應面法優選最佳的包合工藝，并對包合物進行驗證。試驗研究發現，揮發油的β-CD 最佳包合工藝條件為β- CD 與揮發油的用量比為7∶1，包合溫度為45 °C，超聲時間為40 min。

2.3.3 丹參醇提工藝研究[5,11]選擇乙醇濃度、加醇量、提取時間、提取次數四個因素，以丹參酮ⅡA含量和干浸膏收率（權重系數分別為0.7和0.3）為指標，利用L9(34)正交試驗法優選最佳醇提工藝條件。試驗研究發現，最佳提取工藝加12 倍量的80%乙醇，煎煮3 次，每次30 min。

2.3.4 赤芍等醇提工藝研究[3.11]醇提赤芍、五味子和太子參。選取乙醇濃度、加醇量、提取時間、提取次數為考察因素，以芍藥苷含量和干浸膏收率（權重系數分別為0.7和0.3）為指標，利用L9(34)正交試驗法優選最佳醇提工藝條件。試驗研究發現，最佳提取工藝加10 倍量的70%乙醇，煎煮3 次，每次30 min。

2.3.5 淫羊藿等水提工藝研究[5,11~13]水煎煮提取淫羊藿、黃芪、麥冬、紅花、丹參醇提藥渣和揮發油提取藥渣。以加水量、煎煮時間、煎煮次數為考察因素，以淫羊藿苷、丹參素含量和干浸膏收率（權重系數分別為0.4、0.4和0.2）為指標，按L9（34）進行正交試驗，篩選最佳水煎煮工藝條件。試驗研究發現，最佳水提取工藝條件為加10 倍量的水，煎煮3次，每次60 min。

2.4 分離純化及濃縮干燥工藝研究

2.4.1 水提液純化工藝研究 以淫羊藿苷保留率、丹參素保留率及固形物減少率（權重系數分別為0.4、0.4和0.2）為指標，擬考察水提醇沉法（55%、70%、85%乙醇 )、澄清劑吸附法(甲殼素類澄清劑、ZTC1+1天然澄清劑)、高速離心法 （4000，8000，12000轉/分）的除雜效果，篩選最佳工藝。預試驗發現，ZTC1+1（Ⅱ型）澄清劑澄清效果效佳。

2.4.2 分離、濃縮工藝研究 依據物料的理化性質、制劑要求及預實驗，進行分離、濃縮工藝方法及參數選擇試驗。初步選取300目濾布濾過，減壓濃縮。

2.4.3 干燥工藝研究 綜合考慮物料的理化性質、制劑要求及生產成本等因素，擬采用烘箱直接干燥法，考察干燥溫度及干燥時間等因素，優選干燥工藝試驗參數。初步選用烘箱在70-80℃條件下干燥72h。

2.5 制劑成型工藝研究

2.5.1 輔料篩選試驗 擬選用酒精、糊精等?？疾焖幂o料的種類、型號、規格、用量等。

2.5.2 半成品質量考察 包括休止角測定、堆密度測定，吸濕率考察，臨界相對濕度考察。

2.5.3 制劑處方考察與確定試驗 考慮臨床用藥的要求、制劑原輔料性質、劑型特點等因素，初步確定制劑處方組成，明確所用輔料的種類、型號、規格、用量等。

2.5.4 包裝材料及容器的選擇 結合休止角、堆密度測定結果和空膠囊容積情況進行選擇。

2.6 初定制備方法

取制劑處方量，川芎、當歸和桂枝，加8倍量水，浸泡0.5 h，水蒸氣蒸餾法提取7 h，得揮發油、水提液1和藥渣1；揮發油在40 ℃條件下超聲環境下，按β-CD：油為6:1 (g﹒mL-1)比例逐滴滴加50 %的揮發油乙醇溶液，超聲包合20 min，于冰箱中冷卻24 h，抽濾，用少量無水乙醇洗滌，至無揮發油氣味，40 ℃恒溫干燥1 h，即得包合物，備用。加12倍量80%乙醇提取丹參，提取3次，30 min/次，得醇提液1和藥渣2。加10倍量70%乙醇回流混合提取太子參、赤芍和五味子，提取3次，30 min/次，得醇提液2和藥渣（棄去）。加10倍量水煎煮提取淫羊藿、黃芪、麥冬、紅花、藥渣1和藥渣2，提取3次，1h/次，得水提液2和藥渣（棄去）；合并水提液1和水提液2，減壓濃縮至1:5（60 ℃）得濃縮液，濃縮液用70%的乙醇醇沉，濾過，將濾液與醇提液合并，減壓回收乙醇，并濃縮至1:1 (60 ℃)，得清膏，用烘箱在70~80 ℃條件下干燥72 h。收集浸膏粉末，加入揮發油包合物和約10%的糊精，混合均勻，裝入空心膠囊，得成品。

3 中試研究

3.1 中試生產考察

將制劑處方量擴大10倍，按以上工藝研究所得出的最佳工藝條件，連續生產3批中試樣品，進一步驗證制備工藝。

3.2 中試樣品的質量檢查

對中試三批樣品（編號）進行質量檢查，包括性狀、鑒別、裝量差異、崩解時限、水分、微生物限度。

4 質量標準研究

4.1 原料質量標準研究

按照《中國藥典》2010年版一部藥材項下對處方中全部藥材進行檢驗，各藥應符合相關規定。

4.2 成品質量標準研究

4.2.1 定性鑒別 對處方中全部藥材進行薄層鑒別研究。

4.2.2 成品含量測定 根據相關文獻[5,11,13]及預試驗，選取丹參酮ⅡA和淫羊藿苷含量為指標，進行高效液相色譜法測定法的方法學考察（包括測定條件選擇、標準曲線制備、樣品制備方法、陰性樣品干擾考察、重復性、精密度、穩定性、加樣回收率等試驗）及成品指標成分限量確定。初步試驗發現，丹參酮ⅡA和淫羊藿苷含量參照藥典方法進行測定，方法穩定可行。

4.2.3 其他 包括通則檢查和重金屬及有害元素、農藥殘存量考察，確定成品名稱、漢語拼音、處方、制法、性狀、功能與主治、用法與用量、規格、貯藏、包裝標準及輔料標準等。

5 初步穩定性研究

按確定的質量標準規定，對3批中試樣品，于室溫下進行0~3個月共4次考察（每月考核一次），包括性狀、鑒別、水分、粒度、含量、微生物限度等。

6 討論

6.1 本研究處方來源于名老中醫經驗方，長期臨床應用發現，本處方不僅能改善局部心絞痛，而且能改善腎虛現象，使局部作用和整體調節有機結合，從治療腎虛血瘀入手，標本同治，不失為目前治療冠心病的新思維藥物。

6.2 劑型選擇方面，相關預試驗發現，本處方片劑，在制備和臨床使用中存在吸濕性強，穩定性較差，口感差等缺點；本處方口服液制劑，久置易發霉、變質，影響藥液的質量穩定性，同時貯存、運輸不方便；本處方濃縮丸劑，崩解困難，時間長達兩個多小時才能溶散；故考慮將其制成膠囊劑。

6.3 揮發油制備工藝研究中，本研究首次引入星點設計-效應面法進行優選工藝參數，采用水蒸氣蒸餾法混合提取揮發油，并用飽和水溶液超聲法進行β-環糊精包合，方法簡便，預測性良好，可為冠心康膠囊的工業生產提供試驗依據，將最大程度地保留處方中主要的揮發性有效成分。水提液純化工藝研究發現，ZTC1+1（Ⅱ型）澄清劑澄清效果較佳，然而干膏得率卻高達25%以上，不利于制劑，如何平衡既提高有效成分含量，又節約成本且利于制劑的成型，今后研究將進一步深入。

6.4 含量測定供試品溶液制備中，試驗將制得的樣品貯備液直接微孔濾膜濾過，取續濾液即得，方法更為簡便，且減少了試驗結果的影響因素，結果可靠。

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