風(fēng)濕Ⅱ號(hào)合劑抗炎鎮(zhèn)痛作用研究

陳黎，王啟斌，李梓香，詹艷，朱海濤，葉立紅，王剛

(湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬太和醫(yī)院1.藥學(xué)部;2.心血管內(nèi)科，湖北十堰442000)

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎是一種以滑膜慢性炎癥為主要表現(xiàn)的自身免疫性疾病，主要侵犯全身各處關(guān)節(jié)，呈多發(fā)性、對(duì)稱性、慢性增生性滑膜炎，由此引起關(guān)節(jié)軟骨和關(guān)節(jié)囊的破壞，最后導(dǎo)致關(guān)節(jié)強(qiáng)直畸形[1]。風(fēng)濕Ⅱ號(hào)合劑是我院治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的中藥驗(yàn)方，由金銀花、全蟲、當(dāng)歸等十余味中藥配伍組成，具有祛風(fēng)除濕、抗炎、消腫、鎮(zhèn)痛的功效。筆者在本實(shí)驗(yàn)中對(duì)該制劑進(jìn)行抗炎和鎮(zhèn)痛作用研究，以期為風(fēng)濕Ⅱ號(hào)合劑的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用提供理論依據(jù)。

1 材料

1.1 試藥風(fēng)濕Ⅱ號(hào)合劑由太和醫(yī)院制劑室提供，所用藥材均由太和醫(yī)院藥學(xué)部葉立紅副主任藥師鑒定，符合2010年版《中華人民共和國(guó)藥典》要求;氫化可的松(南陽(yáng)普康藥業(yè)有限公司，批號(hào):2008070302)。二甲苯、伊文思藍(lán)、甲醛、醋酸，以及其他所用試劑均為分析純，水為純化水。

1.2 動(dòng)物昆明種小鼠，體質(zhì)量(20±2)g;SD大鼠，體質(zhì)量(200±20)g。合格證號(hào):SYXK(鄂)2005-0031，均由湖北醫(yī)藥學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，許可證號(hào):SCXK(鄂)2005-0008。

1.3 儀器501型超級(jí)恒溫器(上海實(shí)驗(yàn)儀器總廠)，島津AUW120D分析天平(d=0.1 mg∶0.01 mg)，分光光度計(jì)(北京普析通用儀器廠)，打孔器。

2 方法與結(jié)果

2.1 鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)

2.1.1 小鼠熱板實(shí)驗(yàn)昆明種小鼠50只，隨機(jī)分為模型組(灌胃等體積0.9%氯化鈉溶液)，風(fēng)濕Ⅱ號(hào)合劑高、中、低劑量組(分別給予濃度為0.5，0.25，0.125 g·mL－1風(fēng)濕Ⅱ號(hào)合劑)，陽(yáng)性對(duì)照組(氫化可的松50 mg·kg－1)，每組10只。除氫化可的松皮下注射外，其他各組均灌胃給藥，0.3 mL·(10 g)－1，連續(xù)7 d，qd，最后一次給藥1 h后取小鼠置超級(jí)恒溫器中，計(jì)算各組小鼠第一次舔后足時(shí)間(痛閾)，痛閾超過(guò)60 s者按60 s計(jì)，計(jì)算痛閾提高率。給藥前痛閾以模型組痛閾計(jì)，痛閾提高率(%)=(給藥后痛閾－給藥前痛閾)/給藥前痛閾×100%，結(jié)果見(jiàn)表1[2]。

2.1.2 醋酸致小鼠扭體反應(yīng)昆明種小鼠50只，分組及給藥方法同“2.1.1”項(xiàng)，連續(xù)給藥7 d，各小鼠腹腔注射0.6%醋酸，0.1 mL·(10 g)－1，記錄給藥后各組小鼠首次出現(xiàn)扭體反應(yīng)的時(shí)間與20 min內(nèi)各鼠扭體次數(shù)，結(jié)果見(jiàn)表2。

2.2 抗炎實(shí)驗(yàn)

2.2.1 腹腔染料法昆明種小鼠50只，分組及給藥方法同“2.1.1”項(xiàng)，連續(xù)給藥7 d，最后一次給藥1 h后，尾靜脈注射伊文思藍(lán)，0.1 mL·(20 g)－1，1 h后斷頭處死小鼠，剪開(kāi)腹腔并用純化水5 mL沖洗腹腔，收集洗液，離心，在紫外分光光度計(jì)590 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度[3]，結(jié)果見(jiàn)表3。

2.2.2 小鼠耳廓腫脹實(shí)驗(yàn)昆明種小鼠50只，分組及給藥方法同“2.1.1”項(xiàng)，連續(xù)給藥7 d，最后一次給藥1 h后，在小鼠右側(cè)耳廓正反兩面均勻涂抹二甲苯致炎。30 min后處死小鼠，用打孔器等面積沖下左右兩耳同一部位耳廓，分別置于分析天平上稱質(zhì)量，計(jì)算鼠耳腫脹度及抑制率。腫脹度(%)=(右耳質(zhì)量－左耳質(zhì)量)/左耳質(zhì)量×100%，腫脹抑制率(%)=(模型組平均腫脹度－給藥組平均腫脹度)/模型組平均腫脹度×100%。比較各組間差異[4]，結(jié)果見(jiàn)表4。

表1 5組小鼠痛閾提高率測(cè)定結(jié)果Tab.1Elevated rate of pain threshold in 5 groups of mice ±s

表1 5組小鼠痛閾提高率測(cè)定結(jié)果Tab.1Elevated rate of pain threshold in 5 groups of mice ±s

與模型組比較，*1P＜0.01Compared with model group，*1P＜0.01

/%風(fēng)濕Ⅱ組別動(dòng)物數(shù)劑量/(g·kg－1)痛閾提高率號(hào)合劑高劑量組1015.0062.14±3.90*1中劑量組107.5043.02±2.30*1低劑量組103.7517.45±2.27*1陽(yáng)性對(duì)照組1050 mg·kg－160.18±2.74*1模型組10…3.92±1.14

表2 5組小鼠醋酸致疼痛反應(yīng)測(cè)定結(jié)果Tab.2 Results of pain induced by acetic acid in 5 groups of mice ±s

表2 5組小鼠醋酸致疼痛反應(yīng)測(cè)定結(jié)果Tab.2 Results of pain induced by acetic acid in 5 groups of mice ±s

與模型組比較，*1P＜0.01Compared with model group，*1P＜0.01

次數(shù)風(fēng)濕Ⅱ組別動(dòng)物數(shù)劑量/(g·kg－1)首次出現(xiàn)扭體反應(yīng)時(shí)間/min扭體號(hào)合劑高劑量組1015.0014.20±3.2712.20±1.92*1中劑量組107.5012.60±3.2113.80±3.35*1低劑量組103.7510.60±2.9719.60±4.16陽(yáng)性對(duì)照組1050 mg·kg－114.60±2.7010.80±3.19*1模型組10…8.80±1.325.20±3.56

表3 5組小鼠腹腔洗液吸光度值Tab.3Absorbance of celiac eluate from 5 groups of mice ±s

表3 5組小鼠腹腔洗液吸光度值Tab.3Absorbance of celiac eluate from 5 groups of mice ±s

與模型組比較，*1P＜0.01Compared with model group，*1P＜0.01

吸光度值風(fēng)濕Ⅱ組別動(dòng)物數(shù)劑量/(g·kg－1)腹腔洗出液號(hào)合劑高劑量組1015.000.276±0.053*1中劑量組107.500.317±0.101*1低劑量組103.750.428±0.027*1陽(yáng)性對(duì)照組1050 mg·kg－10.266±0.048*1模型組10…0.556±0.012

2.2.3 大鼠足腫脹實(shí)驗(yàn)SD大鼠50只，分組及給藥方法同“2.1.1”項(xiàng)，連續(xù)給藥7 d，最后一次給藥后，分別給大鼠右后足趾注射10%蛋清致炎，每只0.2 mL，致炎0.5，1，2，4，6 h后分別用軟皮尺測(cè)量大鼠足周長(zhǎng)，計(jì)算各組平均腫脹度。腫脹度(%)=(給藥后足周長(zhǎng)－給藥前足周長(zhǎng))/給藥前足周長(zhǎng)×100%，結(jié)果見(jiàn)表5。

3 討論

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，風(fēng)濕Ⅱ號(hào)合劑能減輕二甲苯所致小鼠耳廓腫脹，抑制蛋清致大鼠足腫脹。而且隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，作用效果持久;熱板法和扭體法實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，風(fēng)濕Ⅱ號(hào)合劑有明顯的鎮(zhèn)痛效果，抗炎、鎮(zhèn)痛作用呈現(xiàn)一定的量效關(guān)系，藥物劑量越大，鎮(zhèn)痛、抗炎作用越強(qiáng)。說(shuō)明風(fēng)濕Ⅱ號(hào)合劑在鎮(zhèn)痛、抗炎方面有顯著的作用。

表4 5組小鼠耳廓腫脹度與耳廓腫脹抑制率測(cè)定結(jié)果Tab.4Swelling of auricle and the inhibition ratio in 5 groups of mice%，±s

表4 5組小鼠耳廓腫脹度與耳廓腫脹抑制率測(cè)定結(jié)果Tab.4Swelling of auricle and the inhibition ratio in 5 groups of mice%，±s

與模型組比較，*1P＜0.01Compared with model group，*1P＜0.01

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表5 5組大鼠不同時(shí)間足趾腫脹度測(cè)定結(jié)果Tab.5 Results of swelling of paw in 5 groups of rats at different time points%，±s

表5 5組大鼠不同時(shí)間足趾腫脹度測(cè)定結(jié)果Tab.5 Results of swelling of paw in 5 groups of rats at different time points%，±s

與模型組比較，*1P＜0.01Compared with model group，*1P＜0.01

0.5 h1 h2 h4 h6 h風(fēng)濕Ⅱ組別動(dòng)物數(shù)劑量/(g·kg－1)號(hào)合劑高劑量組1015.0014.17±1.26*113.13±4.84*110.73±3.47*18.71±5.12*16.52±3.57*1中劑量組107.5019.47±3.01*117.58±4.72*115.34±4.01*112.37±1.47*110.37±8.14*1低劑量組103.7522.37±2.47*120.56±3.12*117.42±4.0715.23±3.1412.76±1.25陽(yáng)性對(duì)照組1050 mg·kg－113.01±1.12*110.72±2.15*19.13±4.18*17.16±1.14*15.76±2.32*1模型組10…30.78±11.0228.56±10.0518.23±9.3117.16±11.0315.11±4.87

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果初步證實(shí)，風(fēng)濕Ⅱ號(hào)合劑具有較強(qiáng)的抗炎、鎮(zhèn)痛作用，而且起效快，持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)，為臨床治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎提供了一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)[5-6]。

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