單葉蔓荊不同器官中蔓荊子黃素含量測定*

孫維洋，李劍芳

(山東中醫藥大學藥學院，濟南250355)

蔓荊子為常用中藥材，始載于《神農本草經》，在我國已有2 000余年的栽培和藥用歷史，具有疏散風熱、清利頭目的功效，主治風熱感冒頭痛、齒齦腫痛、目赤多淚、目暗不明、頭暈目眩。《中華人民共和國藥典》2010年版收載蔓荊子為馬鞭草科植物單葉蔓荊(Vitex trifoliaL.var.simplicifoliaCham.)或蔓荊(Vitex trifoliaL.)的干燥成熟果實[1]。目前蔓荊子資源以野生為主，主產區有山東、江西和廣西，其中山東、江西以單葉蔓荊為主[2]。傳統中藥以單葉蔓荊或者蔓荊的果實入藥是否最為合理，蔓荊的其他部位如葉片、枝條、根能否入藥，能否找到化學依據，針對這些問題，筆者在本實驗中采用高效液相色譜法測定單葉蔓荊各不同器官——包括干燥的果實、葉片、枝條和根中蔓荊子黃素的含量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器Agilent 1200型高效液相色譜儀，G1314B VWD紫外檢測器，Agilent Technologies色譜工作站。

1.2 試藥本研究采用的單葉蔓荊(Vitex trifoliaL.var.simplicifoliaCham.)試材系2009年7月份取自山東牟平姜格莊鎮海灘，在山東中醫藥大學藥用植物標本園人工馴化1年，土質為棕壤土，有機質中等偏低，含較多砂礫，種植行距1.2 m，株距約1 m，為提高根系透氣性，均起壟栽植，壟高約15 cm。移植蔓荊于翌年正常開花結實，2010年8月下旬于同一植株采收其果實、葉片、枝條和根系。果實的采摘以顏色變黑為標準，去除幼果及雜質;取一年生健壯枝條為枝條試材，去除葉片及枝梢;采用健壯枝條中部葉片為試材，除去病蟲危害的葉片及雜質;根試材選取直徑1～3 mm根，去除雜質及嚴重木質化部分。以上試材均采用自然晾干，粉碎，過內徑0.425 mm(40目)篩后于－18℃密封貯存備用。蔓荊子黃素對照品(批號:111554-200402，中國藥品生物制品檢定所)，甲醇(色譜級，天津市協和昊鵬色譜科技有限公司)。

2 方法與結果

2.1 色譜條件色譜柱:Hypersil ODS(4.6 mm×150 mm，2.5 μm)，柱溫30℃，檢測波長為258 nm;流速為1 mL·min－1;流動相為甲醇-0.4%磷酸溶液(60∶40)，上樣量為20 μL，流動相經孔徑0.45 μm濾膜濾過。理論板數按蔓荊子黃素峰計算應不低于4 000[1]。

2.2 對照品溶液的制備精密稱取蔓荊子黃素對照品3.2 mg，置10 mL量瓶，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密吸取1 mL，置10 mL量瓶，加甲醇稀釋至刻度。每毫升含對照品約32 μg，備用，使用前過孔徑0.45 μm微孔濾膜[1]。

2.3 供試樣品溶液的制備干燥至恒重的蔓荊不同器官過內徑0.425 mm(40目)篩，精密稱取2 g，置具塞錐形瓶，準確加入甲醇50 mL，稱定質量，加熱回流1 h，冷卻，再稱定質量并用甲醇補足損失溶劑，搖勻，濾過待用。

2.4 線性關系考察分別用微量移液器精密吸取“2.2”項下對照品溶液40，80，120，160，200 μL，置1.5 mL EP管，再分別精密加入甲醇補齊至總體積200 μL，按上述色譜條件進樣。以峰面積為縱坐標，蔓荊子黃素的濃度(μg·mL－1)為橫坐標繪制標準曲線，回歸方程:Y=0.033 34X+1.352 5，r=0.999 9。結果表明，蔓荊子黃素濃度在6.4～32.0 μg·mL－1與峰面積呈良好的線性關系。

2.5 精密度實驗取同一濃度的蔓荊子黃素對照品溶液，重復進樣5次，測定峰面積積分值，結果其RSD為0.66%，表明儀器的精密度良好。

2.6 重復性實驗精密稱取蔓荊子果實干燥粉末5份，每份1 g，依“2.3”項下方法操作并測定蔓荊子黃素的質量分數。結果RSD為1.59%，表明該方法重復性較好。

2.7 穩定性實驗精密稱取蔓荊子果實干燥粉末1 g，依照“2.3”項方法制備供試品溶液，每隔2 h進樣一次，共進樣5次，結果蔓荊子黃素的峰面積RSD為1.77%，表明供試品溶液在8 h內測定結果穩定。

2.8 加樣回收率實驗取已測知含量的蔓荊子果實干燥粉末9份，每份1.0 g，精密稱定，分別精密加入0.32 μg·mL－1蔓荊子黃素對照品溶液1.5，1.5，1.5，1.0，1.0，1.0，0.5，0.5，0.5 mL;按“2.3”項方法制備供試品溶液(相應減少加入甲醇量)，按“2.1”項色譜條件測定樣品中蔓荊子黃素的含量，結果見表1。由表1可見，蔓荊子黃素的平均回收率為100.37%，RSD為1.07%。

2.9 樣品測定稱取不同試材粉末，每份2 g，按“2.3”項方法處理，按“2.1”項色譜條件，精密吸取20 μL進樣測定，結果見表2。

3 討論

由表2可見，同一單葉蔓荊植株中，以其干燥成熟果實中蔓荊子黃素含量最高，約為0.030 8%，而干燥葉片中的含量僅為0.012 0%，低于果實含量的40%，充分證明，僅以蔓荊子黃素為指標衡量藥材質量，果實入藥是最佳選擇，這為傳統中藥中蔓荊果實入藥提供了理論依據。

表1 蔓荊子黃素加樣回收率實驗結果Tab.1Result of recovery of vitexicarpin

單葉蔓荊葉片中蔓荊子黃素的含量雖然較低，但葉片是否可以作為入藥部位仍是一個值得研究的課題:第一，葉片的生物產量較高，在結果初期或特殊的年份有可能超過果實產量;第二，葉片和果實一樣是自然脫落器官，其利用不會對植株造成較大的傷害;第三，除含有一定量的蔓荊子黃素之外，其葉片還含有豐富的揮發油(本研究室未發表數據)，是否能夠單獨作為一種中藥材，與蔓荊子在化學成分、藥理作用等方面有何異同，值得進一步研究。近緣植物馬鞭草科蔓荊(Vitex trifoliaLinn.)的干燥葉為傣醫臨床常用藥材之一，香，溫，入風、水塔，具有清火解毒、消腫止痛、除濕止癢的功效[3]，也是傣醫傳統經方雅喃滿雅的(神藥油)[4]和《中華人民共和國藥典》[5]自1990年版即收載的傣醫制劑雅叫哈頓散的配方藥材之一。研究發現，蔓荊的干燥葉也含有多種揮發油[6]，且蔓荊與單葉蔓荊同為蔓荊子藥材的原植物，在許多研究方面可以相互借鑒;趙應紅等[7]對蔓荊干燥葉片的質量標準進行了研究，以上成果都將有利于開展單葉蔓荊(V.trifoliaL.var.simplicifoliaCham.)葉片研究工作。

由實驗結果可知，枝條和根系中蔓荊子黃素含量未能檢測出，同時作為單葉蔓荊植株的宿存器官，枝條和根系的采收較為困難且對植株損傷較大，不利于居群及環境保護，故目前不建議以這兩種器官入藥。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:中國醫藥科技出版社，2010:340－341.

[2]曹元宇.神農本草經[M].上海:上海科學技術出版社，1987:220.

[3]朱成蘭，趙應紅，馬偉光.傣藥學[M].北京:中國中醫藥出版社，2007:29.

[4]康朗臘.檔哈雅龍[M].昆明:云南民族出版社，2004:613.

[5]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:化學工業出版社，1990:510.

[6]潘炯光，徐植靈，樊菊芬.牧荊、荊條、黃荊和蔓荊葉揮發油的GC-MS分析[J].中國中藥雜志，1989，14(6):37－39.

[7]趙應紅，林艷芳，彭霞，等.傣藥蔓荊葉的藥材質量標準研究[J].中國民族醫藥雜志，2008，6(1):58－59.