反相高效液相色譜法測定苯酚溶液含量

柳雅君，夏維杰，張連成

(1.沈陽軍區總醫院特診科，110016;2.黑龍江省齊齊哈爾市藥品檢驗所，161006)

苯酚溶液是由苯酚溶解于水而成的溶液，未添加抗氧化劑等其他物質;由于苯酚溶液易于氧化，所以配制的苯酚溶液應密閉、避光、低溫保存。苯酚溶液是良好的消毒劑，用于醫院病房、手術室、公共場所的殺菌消毒，也可配制成低濃度溶液用于術前泡手消毒。苯酚收載于《中華人民共和國藥典》2010年版[1]，其含量測定為容量分析法，方法繁瑣，重復性差。筆者在本實驗建立測定苯酚溶液的反相高效液相色譜法[2]，該方法簡便、準確，靈敏度高，分離度好，可用于該制劑的質量控制。

1 儀器與試藥

1.1 儀器Agilent1100高效液相色譜儀，紫外檢測器，島津-2550型紫外分光光度計。

1.2 試藥苯酚對照品(中國藥品生物制品檢定所提供，批號:100509-200902)，二次蒸餾水，0.2%苯酚溶液(規格:500 mL∶1 g，批號:2010071，2010078，20100719，20100912，20100920，沈陽軍區總醫院制劑室制備)。

2 方法與結果

2.1 色譜條件采用迪瑪Diamonsil-C18(4.6 mm×150 mm，5 μm)，流動相為水-甲醇(85∶25)，檢測波長254 nm，流速1.0 mL·min－1，進樣量20 μL。柱溫30℃[3]，在本條件下苯酚對照品與樣品色譜圖見圖1。

圖1 空白溶劑(A)、對照品溶液(B)、供試品溶液(C)高效液相色譜圖1.苯酚

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液精密稱取苯酚對照品20.21 mg，置100 mL棕色量瓶，加水至刻度，搖勻，濃度為0.2 mg·mL－1，作為對照溶液的儲備液。

2.2.2 供試品溶液精密量取批號為2010071的溶液10 mL(相當于苯酚20 mg)，置100 mL棕色量瓶，加水至刻度，搖勻。精密量取5 mL，置100 mL棕色量瓶，加水溶解至刻度，搖勻。

2.2.3 空白溶劑的制備取生產線制劑用純化水(60～70℃)500 mL，置于產品用塑料瓶，加蓋、密封，存放10 d后使用。

2.3 線性關系考察精密量取苯酚對照溶液儲備液1.0，4.0，6.0，8.0，10.0 mL，分別置100 mL棕色量瓶，加水至刻度，搖勻，按“2.1”項色譜條件各進樣20 μL測定，測定苯酚峰面積，并以對照品的濃度為橫坐標(X)，峰面積為縱坐標(Y)，繪制標準曲線，得回歸方程為Y=28.625X－16.746，r=0.999 6。結果表明苯酚進樣量在2～20 μg·mL－1范圍內線性關系良好。

2.4 精密度實驗精密量取3種濃度苯酚對照品溶液儲備液2.0，4.0，8.0 mL，置100 mL棕色量瓶，加水至刻度，搖勻，分別進樣5次。結果3種濃度的精密度RSD分別為1.00%，0.87%，1.20%。

2.5 重復性實驗配制同一批(批號:2010071)供試品溶液5份，在“2.1”項色譜條件下進樣，測定苯酚的含量，RSD為0.8%(n=5)。

2.6 穩定性實驗取同一批供試品溶液，按“2.1”項色譜條件于0，4，6，8，12，24 h分別進樣20 μL測定，外標法計算含量，結果RSD為1.2%，初步表明供試品溶液在不避光條件下24 h內穩定。

2.7 加樣回收率實驗精密量取已知含量的供試品溶液共9份，分別置于100 mL量瓶，精密加入“2.2.1”項對照品儲備液，相當于供試品中已知含量的80%，100%，120%，各3份(精密量取對照品儲備液80，100，120 mL各3份)，置上述100 mL量瓶，加水至刻度，過濾，分別精密量取5 mL置100 mL量瓶，加流動相至刻度，按“含量測定”項下方法測定，計算回收率。平均回收率為99.7%，RSD為0.81%。

2.8 樣品測定精密量取“2.2.1”項對照品儲備液5 mL，置100 mL量瓶，加水稀釋至刻度，搖勻，按“2.1”項色譜條件測定，記錄色譜圖。按外標法以峰面積計算，測得結果見表1。

表1 兩種方法下苯酚含量測定結果%

3 討論

原苯酚的含量測定采用容量分析法[3]，其結果與高效液相色譜法測定比較，偏差約0.2%。筆者在本實驗建立了測定苯酚含量的高效液相色譜法。本方法簡便，準確，可更好地控制苯酚制劑的質量。

由于苯酚遇光易氧化，使溶液顏色加深，影響實驗結果，所以實驗時應避光操作。

采用苯酚溶液紫外測定項下的波長;在實驗過程中對色譜條件進行了考察，最后通過色譜系統適應性的幾個指標:理論板數、分離度對稱因子等的要求，認為以甲醇-水(85∶25)為流動相時，其色譜分離效果較為理想。能充分滿足實驗需求。

《中華人民共和國藥典》2010年版收錄了苯酚的含量測定方法(容量分析法)，筆者在本實驗建立測定其含量的高效液相色譜法，測定結果表明使用高效液相色譜測定苯酚的含量與容量分析法測定結果一致，且操作簡便，專屬性強，可以有效控制其質量。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(二部)[M].北京:中國醫藥科技出版社，2010:443.

[2]張慶合.高效液相色譜實用手冊[M].北京:化學工業出版社，2008:269.

[3]樊彩梅，孫彥平.苯酚及其光催化降解中間產物的HPLC法同時測定[J].分析測試學報，2000，19(4):49－50.