裸花紫珠制劑中毛蕊花糖苷含量測定

莫迎

(南寧食品藥品檢驗所，530001)

裸花紫珠為馬鞭草科植物裸花紫珠(CallicarpanudifloraHook.et Arn.)的干燥葉，被《中華人民共和國藥典》1977年版收載，以后歷版《中華人民共和國藥典》均未收載。目前裸花紫珠單味制劑在臨床上主要用于抗炎、止血，應用較廣的劑型有薄膜衣片、分散片、膠囊、栓劑等，國內研究該藥多集中在總黃酮類[2]、木犀草素[3-5]、熊果酸[6-7]、齊墩果酸[8]等方面，而測定該藥中毛蕊花糖苷含量的研究筆者尚未見報道。筆者在本研究以高效液相色譜法測定裸花紫珠分散片、裸花紫珠片、裸花紫珠膠囊中毛蕊花糖苷的含量，以期為科學評價裸花紫珠制劑質量提供新的參考依據。

1 儀器與試藥

1.1 儀器LC-2010AHT高效液相色譜儀(日本島津)，紫外檢測器，LCsolution色譜工作站。

1.2 試藥毛蕊花糖苷對照品(中國藥品生物制品檢定所提供，批號:111530-200505，含量測定用)，乙腈(色譜純)，磷酸(色譜純)，水(超純水)，其余試劑均為分析純。裸花紫珠分散片(成都華宇制藥有限公司，批號:091008，091201，規格:每片0.5 g，含干浸膏0.25 g)、裸花紫珠片(海南九芝堂有限公司，批號:100700，800490，規格:每片含干浸膏0.5 g)、裸花紫珠膠囊(江西杏林白馬藥業有限公司，批號:20100101，20110202，規格:每粒0.3 g，含干浸膏0.2 g)均為南寧食品藥品檢驗所抽驗及市售藥品。

2 方法與結果

2.1 色譜條件色譜柱:Shimadzu vp-ods(4.6 mm×250 mm，5 μm);流動相:乙腈-0.5%磷酸溶液(18∶82);流速:1.0 mL·min－1;檢測波長:332 nm;柱溫:35℃;進樣量10 μL;理論板數按毛蕊花糖苷計不低于5 000。

2.2 對照品溶液的制備精密稱取毛蕊花糖苷對照品9.98 mg，置10 mL量瓶，加50%甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液貯備液。精密量取貯備液1 mL至20 mL量瓶，搖勻，作為對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備取裸花紫珠分散片20片，裸花紫珠片20片(除去包衣)，裸花紫珠膠囊(10粒)內容物，精密稱定，研細，分別取0.5，0.1，0.25 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加50%甲醇溶液50 mL，稱定質量，超聲處理30 min，放冷，用50%甲醇補足質量，搖勻，過孔徑0.45 μm濾膜，作為供試品溶液。色譜圖見圖1。

圖1 4種溶液HPLC圖

2.4 線性關系考察分別取9.98，29.94，49.90，69.86，89.92 μg·mL-1對照品溶液進樣10 μL，測定峰面積，以進樣量為橫坐標，峰面積為縱坐標，進行回歸，回歸方程Y=1.202 1×106X－9 486，r=0.999 8。表明毛蕊花糖苷在0.1～0.9 μg范圍內線性關系良好。

2.5 精密度實驗取裸花紫珠片(批號:100700)供試品溶液1份，重復進樣6次，以峰面積計算得RSD為0.96%。

2.6 重復性實驗取裸花紫珠分散片、裸花紫珠片、裸花紫珠膠囊樣品，分別按供試品溶液制備方法各平行制備6份溶液，測定毛蕊花糖苷含量，結果其含量RSD分別為1.81%，1.05%和1.29%。

2.7 穩定性實驗取重復性實驗項下供試品溶液，分別于0，5，10，16，24 h測定含量，結果RSD分別為0.95%，0.77%，0.71%，表明供試品溶液在24 h內基本穩定。

2.8 加樣回收率實驗精密稱取裸花紫珠分散片(批號:091201)、裸花紫珠片(批號:100700)、裸花紫珠膠囊(批號:20100101)樣品各6份，分別精密加入1.002 8 mg·mL－1對照品溶液適量，揮干溶劑，按供試品溶液制備方法各制備供試品溶液6份，進行測定，結果見表1～3。裸花紫珠分散片中毛蕊花糖苷平均加樣回收率98.68%，RSD=1.97%;裸花紫珠片中毛蕊花糖苷平均加樣回收率99.43%，RSD=1.95%;裸花紫珠膠囊毛蕊花糖苷平均加樣回收率100.09%，RSD=1.60%。

表1 裸花紫珠分散片中毛蕊花糖苷加樣回收率實驗結果

表2 裸花紫珠片中毛蕊花糖苷加樣回收率實驗結果

表3 裸花紫珠膠囊中毛蕊花糖苷加樣回收率實驗結果

2.9 樣品測定取裸花紫珠分散片、裸花紫珠片、裸花紫珠膠囊各2批，按供試品溶液的制備方法依法操作，分別測定3種制劑中毛蕊花糖苷的含量，按上述色譜條件進樣10 μL，以外標法計算毛蕊花糖苷含量，結果見表4。

3 討論

毛蕊花糖苷為極性化合物，筆者曾選用甲醇、50%甲醇、乙醇、70%乙醇進行實驗，結果不同濃度的乙醇提取效果不佳且雜質干擾多，而50%甲醇提取效果較佳。通過比較加熱回流、超聲處理樣品兩種方式，結果提取效果無明顯差異，從節約能源角度出發，采用超聲處理。

表4 樣品測定結果

紫珠制劑為臨床各科的常用止血藥物[9]，目前裸花紫珠制劑標準大部分都是采用分光光度法測定總黃酮類含量，專屬性差。從不同生產企業生產的裸花紫珠劑型中毛蕊花糖苷含量測定結果來看，明顯存在較大差異，薄膜衣片含量較高，分散片含量較低，相差十多倍，提示藥材質量及生產工藝都有可能影響制劑質量。筆者在本實驗建立的含量測定方法專屬性強，為裸花紫珠藥材及其制劑的活性成分研究提供了新的理論依據。

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